原理

苯丙氨酸解氨酶是植物次生代謝中的一個關(guān)鍵酶。它催化 L-苯丙氨酸的脫氨反應(yīng). 釋放氨而形成反式肉桂酸。根據(jù)產(chǎn)物反式肉桂酸在波長 290 nm 處吸光度的變化，可以測定該酶的活性。

材料與儀器

UV-1800紫外可見分光光度計、冷凍高速離心機(jī)，旋渦混合器，恒溫水浴鍋等

材料：黃化水稻幼苗

試劑：0. 1 mol / L硼酸緩沖液（pH 8. 8）；0. 02 mol/ L 1 L-苯丙氨酸：稱取3.33 g/ L-苯丙氨酸溶于1000 mL 0. 1 mol/L"1 硼酸緩沖液（pH 8. 8）；7 mmol - 統(tǒng)基乙醇硼酸 緩沖液：0. 11 mL 藐基乙醇用 0. 1 mol/L-1 硼酸緩沖液溶解，并定容至 200 mL；聚乙烯毗咯 烷酮（PVP）。

實驗步驟

酶液制備：稱取黃化水稻幼苗 0.5 g, 先加 1.5 mL 預(yù)冷的提取液（即 7 mmol - L-1 蔬 基乙醇硼酸緩沖液）、過量的聚乙烯毗咯烷酮（PVPX 但不能太多，否則不易研磨）、少量石英 砂在冰浴下研磨成漿，再加 3.5 mL 預(yù)冷的提取液使其終體積為 5 mL。于 12 000 g 4°C 下離心15 min, 用吸管吸取上清液，即粗酶液。