實驗 時 對 所有材料的DNA提取均采用同一方法,即CTAB法,且這些材料的DNA提取都
使用RETSCH MM301 DNA提取儀在同一時間(同一工作日)內(nèi)完成,以盡量縮小材料間DNA
提取的濃度差異
CT A B法 快速提取植物基因組DNA的操作步驟如下:
A. 2 m1 離心管中加入1cm }新鮮葉片2片;
B. 加 入 CTAB緩沖液500u1,研磨機(RETSCH MM 301)研磨成勻漿;
C. 65 水浴1小時;
D. 置 于4冰箱冷卻至150C以下;
E. 加 入 250ul 24:1 氯仿/異戊醉,上下混勻5分鐘,保證樣品與氯仿充分混勻;
F. 1 30 00rpm離心10分鐘:
G. 取 上 清液200ul,加入預(yù)先加好200ul異丙醇的1.5m l離心管中,輕輕上下顛倒混勻:
H. 4 0C 冰箱靜置30分鐘以上;
I. 1 30 0Drpm離心10分鐘,棄上清液,涼干;
7 加 入100u1Hz0(含luIRNase)溶解DNA;
K. 37 水浴30分鐘去除RNA;
L 用 1 %瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA濃度及質(zhì)量;
M. 稀 釋 DNA至所需濃度(約60ng/ul)后于一20冰箱中保存待用 德國Retsch(萊馳)MM400冷凍混合研磨儀
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