從大腸桿茵中提取質(zhì)粒DNA的方法很多，其中的堿性別方法提取質(zhì)粒是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性存在差異而予以分離的在強(qiáng)堿性條件下，染色體洲A和質(zhì)粒DNA均變性（雙鏈解開(kāi)）由于質(zhì)粒DNA是共價(jià)閉合環(huán)狀超螺旋結(jié)構(gòu)，變性后兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)完全分開(kāi)當(dāng)溶液pH調(diào)節(jié)到中性時(shí)．質(zhì)粒DNA容易復(fù)性并溶解在溶液中，而染色體DNA不容易復(fù)性，互相繼繞．在利用臺(tái)式高速離心機(jī)進(jìn)行離心時(shí)極易和蛋白質(zhì)3Ds復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)轉(zhuǎn)移出上演液，再用乙醇沉淀出其中的質(zhì)粒DNA具體操作步驟如下： （1）接種一單菌落于100ml LB液體培養(yǎng)基中，加入50l的氨芐青霉素，37振蕩培養(yǎng)810h，使培養(yǎng)達(dá)到飽和狀態(tài) （2）取1.5ml培養(yǎng)液利用臺(tái)式高速離心機(jī)離心20s，沉淀用100l GTE懸浮并于室溫放置5min （3）加入200l NaOH/SDS溶液，混勻，于冰上放置5min （4）加入150l KAc溶液，在MixMax旋渦混合器上振蕩2s，于冰上放置5min （5）離心3min，然后吸取0.4ml上清液移入干凈的微量離心管中，加入0.8ml無(wú)水乙醇，室溫靜置2min （6）室溫下通過(guò)臺(tái)式高速離心機(jī)進(jìn)行離心3min，（使用臺(tái)式高速離心機(jī)時(shí)一定要注意轉(zhuǎn)速時(shí)間控制以及操作規(guī)范）用lml 70％的乙醇洗滌沉淀，然后真空于燥 （7）沉淀用30l dd HO溶解，-20保存 文章鏈接：開(kāi)源國(guó)創(chuàng)儀器網(wǎng) http://www.keyyer.com/ 美國(guó)SI Vortex Genie2 渦旋振蕩器|SI旋渦混合器|旋渦混合器