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協(xié)議目標(biāo)
該協(xié)議的目的是提供使用 INKREDIBLE 、INKREDIBLE+ 或 BIO X 的 CELLINK? LAMININK 系列進(jìn)行生物打印的說明，并涵蓋從預(yù)打印與細(xì)胞混合、3D 生物打印和離子交聯(lián)的打印后過程的步驟。 CELLINK? LAMININK 系列包括 CELLINK? LAMININK111 、 CELLINK? LAMININK 121 、 CELLINK? LAMININK 411 、 CELLINK? LAMININK 521 和 CELLINK? LAMININK+。 該方案針對 CELLINK? LAMININK 進(jìn)行了優(yōu)化，未稀釋以及使用 10+1 細(xì)胞懸液稀釋。 更改協(xié)議中的參數(shù)可能會(huì)更改所需的交聯(lián)時(shí)間。 該協(xié)議使用BIO X 的氣動(dòng)打印頭進(jìn)行了優(yōu)化。1
所需材料
Cellink?層板*
清除墨盒，3cC*
無菌錐形生物打印噴嘴*
BioX*或InkRedible-系列*3D Bioprinter
孔板或培養(yǎng)皿
交聯(lián)劑（包括在bioink采購中）
細(xì)胞+細(xì)胞培養(yǎng)基
3毫升帶luer鎖連接的注射器
陰/陰路厄鎖適配器*或細(xì)胞混合器*
*該產(chǎn)品可在www.gaiachina.com.cn購買
協(xié)議
本協(xié)議可在室溫下使用打印頭和打印機(jī)執(zhí)行，室溫在20-25°C之間。
| 步驟 | 標(biāo)題 | 材料 | 說明 |
| 1 | 準(zhǔn)備生物墨水 | -- CELLINK? LAMININK | 如果不使用細(xì)胞打印，則直接轉(zhuǎn)到第 3 步。 - 將 CELLINK? LAMININK 墨盒加熱至室溫。 |
| 2 | 將 CELLINK ?LAMINI NK 與細(xì)胞混合 | - 帶魯爾鎖接頭的 3 ml 注射器 - 預(yù)熱的CELLINK? SKIN - 母/母魯爾鎖接頭 - 注射器中的細(xì)胞懸浮液 | 此時(shí)，將十份 bioink 與一份細(xì)胞懸浮液混合，注意不要將氣泡引入混合物中。有關(guān)詳細(xì)說明，請參閱Mixing Cells Protocol CELLINK 系列。 - 使用母/母魯爾鎖接頭將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到 1 ml 細(xì)胞注射器（第 1 部分）。 - 使用母/母魯爾鎖適配器將 bioink 轉(zhuǎn)移到 12 毫升注射器（第 2 部分）。 - 將兩個(gè)注射器夾在分配裝置上（第 3 部分）。 - 將兩個(gè)注射器連接到混合裝置（第 4 部分），然后將空墨盒（第 5 部分）連接到混合裝置的另一側(cè)。 - 輕輕按壓分配裝置，將兩個(gè)注射器的內(nèi)容物混合到空墨盒中。 注意：為避免在混合 bioink 和細(xì)胞懸液時(shí)出現(xiàn)氣隙，請?jiān)趯⒆⑸淦髋c細(xì)胞懸液連接之前小心地用CELLINK? LAMININK 預(yù)填充 Luer Lock 適配器。如果準(zhǔn)備的 CELLINK? LAMININK 數(shù)量小于 2 毫升，建議連接兩個(gè) 3 毫升魯爾鎖注射器并在注射器之間來回混合直至均勻。 |
| 3 | 冷卻并裝入墨盒 | - 透明墨盒，裝有 CELLINK? LAMININK（和 電池）的 3cc - 無菌錐形生物打印噴嘴。 | - 將經(jīng)過室溫處理的 CELLINK? LAMININK 放入帶有所選打印噴嘴的打印頭和蓋子中。 推薦的噴嘴尺寸為 22G。 降低噴嘴直徑以實(shí)現(xiàn)更小的燈絲直徑，但這也會(huì)增加 bioink 堵塞的風(fēng)險(xiǎn)。 |
| 4 | 打印 | - 生物打印機(jī) （推薦 BIO X |
- 生物打印結(jié)構(gòu)的參數(shù)根據(jù)表 1 或應(yīng)用說明中的打印參數(shù)。 如果打印性不符合要求，將壓力向上 /向下調(diào)整 1 kPa 以擠出更多/更少的材料。 注意：如果在兩次擠壓之間等待時(shí)間過長，生物墨水可能會(huì)在噴嘴中變干，從而導(dǎo)致噴嘴堵塞。 如果發(fā)生這種情況，請更換新的噴嘴。 |
或 INKREDIBLE 系列） - 孔板或培養(yǎng) | |||
| 皿 |
表1.建議的Z小擠壓壓力*(±2 kPa）用于在21-25°C下打印連續(xù)長絲，有單元/無單元。同樣，“有細(xì)胞”假設(shè)一份細(xì)胞懸浮液和十份生物墨水的混合物。有關(guān)燈絲直徑的信息，請參見應(yīng)用筆記中的打印參數(shù)。對于高度濃縮的細(xì)胞懸浮液，壓力需要增加到用于未稀釋生物墨水的壓力。
*注意，這只是推薦的起始壓力參考。 所需的實(shí)際壓力將根據(jù)制備程序（生物墨水的量和生物墨水的實(shí)際溫度）以及活塞在墨盒中的安裝和打印表面的平整度而有所不同。 該表是在打印頭溫度為 22°C 時(shí)“無細(xì)胞”和 27°C“有細(xì)胞”以及使用低濃度細(xì)胞的bioink 稀釋生成的。
| 步驟 | 標(biāo)題 | 材料 | 說明 |
| 5 | 交聯(lián) | 交聯(lián)液 細(xì)胞培養(yǎng)基 |
CELLINK? LAMININK 可以使用 CaCl2 交聯(lián)溶液與離子交聯(lián)。 |
| - 根據(jù)構(gòu)建體的大小，將載有細(xì)胞的構(gòu)建體浸入 | |||
| 交聯(lián)溶液中 30 秒至 5 分鐘。 去除交聯(lián)溶液并 | |||
| 用基礎(chǔ)培養(yǎng)基沖洗一次構(gòu)建體。 | |||
| 6 | 孵化 | -細(xì)胞培養(yǎng)基 | 交聯(lián)和洗滌后，將所需培養(yǎng)基添加到構(gòu)建體 中并放入孵化器。 在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件（37°C、5% CO2 和 95% 相對濕度）或根據(jù)您的應(yīng)用在細(xì)胞培養(yǎng)基中孵育構(gòu)建體。 |
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