概述

豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type 2, PCV2）是一種單鏈環(huán)狀DNA病毒，豬感染后能引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征，是影響世界養(yǎng)豬業(yè)的重要病毒性疾病之一。目前，疫苗免疫是預(yù)防PCV2感染的有效手段。

在亞單位疫苗中，病毒樣顆粒疫苗具有與天然病毒類似的結(jié)構(gòu)而更易被免疫系統(tǒng)所識(shí)別，并且能夠以更為真實(shí)的構(gòu)象被抗原提呈細(xì)胞吞噬、加工和提呈，具有非常好的應(yīng)用前景。PCV2編碼的Cap蛋白是構(gòu)成其衣殼的WY結(jié)構(gòu)蛋白。目前，已有研究可將PCV2 Cap蛋白在大腸桿菌中進(jìn)行了可溶性表達(dá)，并能夠自組裝為VLPs。胞內(nèi)自組裝VLPs可能受到宿主蛋白和DNA的污染，可能形成不穩(wěn)定結(jié)構(gòu)或聚集。

本篇應(yīng)用是采用凝膠色譜柱TSKgel G4000SWXL對(duì)大腸桿菌表達(dá)PCV2 Cap蛋白自組裝的VLPs，進(jìn)行GX尺寸排阻色譜 (HPSEC) 的分離檢測(cè)。

01 樣品的制備

重組PCV2 Cap 蛋白的表達(dá)與純化及自組裝VLPs參考方法^[1]制備。

02 分析條件

色譜柱：TSKgel G4000SWXL（7.8 mmI.D.×30 cm，8 μm）

流動(dòng)相：50 mM PB+0.1 mM Na2SO4（pH 7.2）

流速：0.5 mL/min

進(jìn)樣體積：15 μL

柱溫：室溫

檢測(cè)器參數(shù)：UV @280 nm

03 分析結(jié)果

豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)病毒樣顆粒分離色譜圖

04 結(jié)果與討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：使用凝膠色譜柱TSKgel G4000SWXL可對(duì)重組PCV2 Cap 蛋白自組裝VLPs進(jìn)行GX分離檢測(cè)，VLPs的再組裝效率≥99%。

參考文獻(xiàn)：

1. 王彥偉,李鵬歟等. 豬圓環(huán)病毒2型病毒樣顆粒的GX組裝技術(shù)研究,ZG生物工程雜志,2020,40(11):35-42.

標(biāo)簽：凝膠色譜柱