豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）酶聯(lián)免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說明書 本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定豬血清，血漿及相關(guān)液體樣本中流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）水平 實驗原理： 本試劑盒采用雙抗原夾心法測定血清或血漿中豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）用純化的豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）抗原結(jié)合，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）的存在與否 試劑盒組成： 試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存 說明書 1份 1份 封板膜 2片（48） 2片（96） 密封袋 1個 1個 酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8保存 陰性對照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8保存 陽性對照 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8保存 酶標(biāo)試劑 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8保存 樣品稀釋液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8保存 顯色劑A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8保存 顯色劑B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8保存 終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8保存 濃縮洗滌液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8保存 樣本處理及要求： 1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心 2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心 3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心胸腹水腦脊液參照實行 4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細(xì)收集上清檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達到100萬/ml左右通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細(xì)收集上清保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心 5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量加入一定量的PBS，PH7.4用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆脴?biāo)本融化后仍然保持2-8的溫度加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細(xì)收集上清分裝后一份待檢測，其余冷凍備用 6. 標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗若不能馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融. 7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過氧化物酶的（HRP）活性