三聚氰胺檢測儀乳乳制品及飼料中三聚氰胺的測定 一．名詞簡介 1. 三聚氰胺理化性質(zhì) 三聚氰胺：英文名melamine，簡稱三胺，學(xué)名三氨三嗪，別名蜜胺氰尿酰胺三聚酰胺分子式：C3N6H6C3N3(NH2)3；分子量：126.12；物理性能：白色結(jié)晶粉末，無毒，無味；相對密度：1570kg/m³；熔點：在常壓下，354分解；升華溫度：300；溶解性：能溶于甲醇甲醛乙酸熱乙二醇甘油吡啶；微溶于水乙醇；不溶于苯和四氯化碳，水溶液呈弱堿性 化學(xué)性能：三聚氰胺是一種重要的氮雜環(huán)有機化工原料，顯弱堿性，能夠與各種酸反應(yīng)生成三聚氰胺鹽；在強酸或強堿液中，三聚氰胺發(fā)生水解，胺基逐步被羥基取代，生成三聚氰酸二酰胺三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸；三聚氰胺與醛類反應(yīng)生成加成化合物；三聚氰胺與甲醛反應(yīng)制成樹脂，三聚氰胺樹脂是一種多種用途的材料，防火耐熱且有很高的穩(wěn)定性，用于生產(chǎn)塑料地板磚，廚房用具，防火纖維，商業(yè)濾膜，膠水和阻燃劑 2. 乳制品 是指以生鮮牛（羊）乳及其制品為主要原料，經(jīng)加工而制成的各種食品本標(biāo)準(zhǔn)所指的乳制品包括液體乳類（殺菌乳滅菌乳酸牛乳配方乳）乳粉類（全脂乳粉脫脂乳粉全脂加糖乳粉和調(diào)味乳粉嬰幼兒乳粉其他配方乳粉）含乳飲料類煉乳類（全脂無糖煉乳全脂加糖煉乳調(diào)味煉乳；配方煉乳）乳脂肪類（稀奶油奶油無水奶油）干酪類（原干酪；再制干酪）乳冰淇淋類（乳冰淇淋乳冰）和其他乳制品類（干酪素乳糖乳清粉濃縮乳清蛋白）等 二．GX液相色譜法測定 1. 原理 試樣經(jīng)溶解超聲提取沉淀蛋白過濾得到測試液，經(jīng)GX液相色譜測定，根據(jù)保留時間和紫外吸收光譜定性，根據(jù)峰面積進行定量 2 試劑 方法中所用試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純試劑，水為GB/T 6682-2008中一級用水，溶液為水溶液 2.1 磺基水楊酸 2.2 檸檬酸 2.3 辛烷磺酸鈉：GX液相色譜離子對試劑 2.4 乙腈：色譜純 2.5 鹽酸 2.6 60 g/L磺基水楊酸：稱取60 g磺基水楊酸用水定容至1 L 2.7 0.1 mol/L鹽酸：量取8.3 mL鹽酸用水稀釋至1 L 2.8 緩沖液：檸檬酸和辛烷磺酸鈉濃度均為10 mmol/L 2.9 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品：已知含量大于99% 2.10 標(biāo)準(zhǔn)儲備液：稱取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品0.01g（準(zhǔn)確至0.0 001g），用甲醇配制成濃度為1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液 2.11 標(biāo)準(zhǔn)系列：將標(biāo)準(zhǔn)儲備液用0.1 mol/L鹽酸逐級稀釋至0.25µg/mL，0.50µg/mL，1.00 µg/mL，2.00 µg/mL，4.00 µg/mL，5.00 µg/mL，10.0 µg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液 3 儀器成套性 3.1 GX液相色譜儀 3.1.1 P3000型 高壓輸液泵 3.1.2 UV3000紫外檢測器 3.1.3 Rehodyne手動進樣閥(20l) 3.1.4 CXTH3000色譜工作軟件 3.1.5 ODS（VenusilASB-C18色譜柱） 250 mm×4.6 mm，5 µm 3.1.6 分析啟動工具包 3.1.7 溶劑托盤 3.1.8 試劑包 3.1.9 保護柱和柱芯 3.1.10真空固相萃取裝置（含混合型的陽離子交換柱10根） 3.2 溶劑過濾器（含真空泵） 3.3 超聲波清洗器 3.4 柱溫箱 3.5 高速離心機：轉(zhuǎn)速>4 000 r/min 3.6 旋渦混勻器 3.7 分析天平：感量0.1mg 4 樣品處理 4.1 固態(tài)乳制品 稱取1.0 g左右試樣（準(zhǔn)確至0.0 001 g），加入0.1 mol/L 鹽酸約15 mL，渦旋混勻，超聲提取30 min后加入60 g/L磺基水楊酸6 mL ~8 mL，用0.1 mol/L 鹽酸定容至25 mL，混勻后離心，上清液經(jīng)0.45 µm的微孔濾膜過濾后進樣 4.2 液態(tài)乳制品（包含酸奶） 稱取15 g左右試樣（準(zhǔn)確至0.0 001 g），加入60 g/L磺基水楊酸3 mL~4 mL，用0.1 mol/L 鹽酸定容至25 mL，混勻后離心，上清液經(jīng)0.45 µm的微孔濾膜過濾后進樣 4.3 飼料 稱取1.0g左右試樣（準(zhǔn)確至0.0 001 g），將樣品用研缽充分碾碎混勻，加入0.1 mol/L 鹽酸約15 mL，渦旋混勻，超聲提取30 min后加入60 g/L磺基水楊酸6 mL ~8 mL，用0.1 mol/L 鹽酸定容至25 mL，混勻后離心，上清液經(jīng)0.45 µm的微孔濾膜過濾后進樣 5 測定步驟 5.1 色譜條件 5.1.1 色譜柱：ODS或C8，250 mm×4.6 mm，5 µm 5.1.2 流動相：緩沖液乙腈=8515 5.1.3 流速：1.0 mL/min 5.1.4 柱溫：40 5.1.5 波長：240 nm 上述色譜條件是典型的，可根據(jù)實際情況做具體調(diào)整如果分離效果不理想，將水相改為：檸檬酸和辛烷磺酸鈉濃度均為10 mmol/L，加3mL三，配制成1000mL溶液，流動相用氨水調(diào)PH值3.9到3.95 5.2 測定 5.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 將標(biāo)準(zhǔn)系列0.25µg/mL，0.50µg/mL，1.00 µg/mL，2.00 µg/mL，4.00 µg/mL，5.00 µg/mL，10.0 µg/mL分別進樣20 µL,以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)作圖，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 5.2.2 樣品測定 取制備好的試樣溶液進樣20 µL,進行液相色譜分析根據(jù)保留時間和紫外吸收光譜定性，根據(jù)峰面積進行定量三聚氰胺的標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖見圖1，液態(tài)奶樣品色譜圖見圖2，奶粉樣品色譜圖見圖3 圖1 標(biāo)樣色譜圖 儀器：山東金普分析儀器有限公司LC3000 色譜柱：山東金普分析儀器有限公司ODS柱 250 mm×4.6 mm，5m 流動相：緩沖液乙腈=8515，用三調(diào)PH3.9 流速：1.0 mL/min 柱溫：40 波長：240 nm 圖2 液態(tài)奶樣品色譜圖 儀器：山東金普分析儀器有限公司LC3000 色譜柱：山東金普分析儀器有限公司ODS柱 250 mm×4.6 mm，5m 流動相：緩沖液乙腈=8515，用三調(diào)PH3.9 流速：1.0 mL/min 柱溫：40 波長：240 nm 圖3 奶粉樣品色譜圖 儀器：山東金普分析儀器有限公司LC3000 色譜柱：山東金普分析儀器有限公司ODS柱 250 mm×4.6 mm，5m 流動相：緩沖液乙腈=8515，用三調(diào)PH3.9 流速：1.0 mL/min 柱溫：40 波長：240 nm 6 結(jié)果計算 6.1 計算 試樣中三聚氰胺的含量（mg/kg）按式（1）計算: C×V X = （1） m 式中：X樣品中三聚氰胺含量，mg/kg； C從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的含量，µg/mL； V定容體積，mL； m稱樣量，g 平行測定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字 本文參考以下方法： HPLC-UV檢測方法 三聚氰胺在傳統(tǒng)的C18柱上保留很差，需要用離子對試劑色譜方法才能有良好的保留與分離，按照美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）的三聚氰胺檢測方法和ZG農(nóng)業(yè)部頒部的三聚氰胺檢測方法，采用北京創(chuàng)新通恒科技有限公司的ODS，Ｃ１８色譜柱，能夠得到良好的結(jié)果 1 三聚氰胺的FDA檢測方法 色譜柱：山東金普分析儀器有限公司ODS 4.6×250mm 緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調(diào)pH為3.0 流動相：緩沖液：乙腈=85：15 進樣量：樣品用緩沖液溶解成約0.1mg/mL，進10L， 進樣前用0.22m針式過濾器過濾 流 速：1.0mL/min 柱 溫：40 波 長：240nm 2三聚氰胺的ZG農(nóng)業(yè)部頒標(biāo)準(zhǔn)檢測方法 色譜柱：山東金普分析儀器有限公司ODS 4.6×250mm 緩沖液：10mM檸檬酸, 10mM庚烷磺酸鈉 流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15 進樣量：樣品用緩沖液溶解成約0.1mg/mL，進10uL 進樣前用0.22m針式過濾器過濾 流 速：1.0mL/min 柱 溫：40 波 長：240nm 山東金普分析儀器有限公司 技術(shù)部 三聚氰胺檢測儀