色譜柱是色譜儀分析系統(tǒng)中的核心，色譜柱分離度會影響到檢測結(jié)果的速率和準(zhǔn)確性美國藥典對色譜法規(guī)定較嚴(yán)，它規(guī)定了色譜柱的長度，填料的種類和粒度，填料分類也較詳細(xì)，這樣使色譜圖易于重現(xiàn)；而ZG藥典僅規(guī)定填料種類，未規(guī)定柱的長度和粒度，這使檢驗(yàn)人員難于重現(xiàn)實(shí)驗(yàn)，在某些情況下還浪費(fèi)時間和試劑因此，在液相色譜儀分析系統(tǒng)中，流動相和固定相的選擇較為重要 固定相的選擇 分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物可選擇極性鍵合相氰基鍵合相對雙鍵異構(gòu)體或含雙鍵數(shù)不等的環(huán)狀化合物的分離有較好的選擇性氨基鍵合相具有較強(qiáng)的氫鍵結(jié)合能力，對某些多官能團(tuán)化合物如甾體強(qiáng)心甙等有較好的分離能力；氨基鍵合相上的氨基能與糖類分子中的羥基產(chǎn)生選擇性相互作用，故被廣泛用于糖類的分析，但它不能用于分離羰基化合物，如甾酮還原糖等，因?yàn)樗鼈冎g會發(fā)生反應(yīng)生成堿二醇基鍵合相適用于分離有機(jī)酸甾體和蛋白質(zhì) 分離非極性和極性較弱的化合物可選擇非極性鍵合相利用特殊的反相色譜技術(shù)，例如反相離子YZ技術(shù)和反相離子對色譜法等，非極性鍵合相也可用于分離離子型或可離子化的化合物ODS(octadecyl silane)是應(yīng)用Z為廣泛的非極性鍵合相，它對各種類型的化合物都有很強(qiáng)的適應(yīng)能力短鏈烷基鍵合相能用于極性化合物的分離，而苯基鍵合相適用于分離芳香化合物 流動相的選擇 流動相的性質(zhì)要求：一個理想的液相色譜儀流動相溶劑應(yīng)具有低粘度與檢測器兼容性好易于得到純品和低毒性等特征選好填料（固定相）后，強(qiáng)溶劑使溶質(zhì)在填料表面的吸附減少，相應(yīng)的容量因子k降低；而較弱的溶劑使溶質(zhì)在填料表面吸附增加，相應(yīng)的容量因子k升高因此，k值是流動相組成的函數(shù)塔板數(shù)N一般與流動相的粘度成反比所以選擇流動相時應(yīng)考慮以下幾個方面： 流動相應(yīng)不改變填料的任何性質(zhì)低交聯(lián)度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時遇到某些有機(jī)相會溶脹或收縮，從而改變色譜柱填床的性質(zhì)堿性流動相不能用于硅膠柱系統(tǒng)酸性流動相不能用于氧化鋁氧化鎂等吸附劑的柱系統(tǒng) 純度色譜柱的壽命與大量流動相通過有關(guān)，特別是當(dāng)溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累時 必須與檢測器匹配使用UV檢測器時，所用流動相在檢測波長下應(yīng)沒有吸收，或吸收很小當(dāng)使用示差折光檢測器時，應(yīng)選擇折光系數(shù)與樣品差別較大的溶劑作流動相，以提高靈敏度 粘度要低（應(yīng)<2cp）高粘度溶劑會影響溶質(zhì)的擴(kuò)散傳質(zhì)，降低柱效，還會使柱壓降增加，使分離時間延長**選擇沸點(diǎn)在100以下的流動相 對樣品的溶解度要適宜如果溶解度欠佳，樣品會在柱頭沉淀，不但影響了純化分離，且會使柱子惡化 樣品易于回收應(yīng)選用揮發(fā)性溶劑 流動相的選擇：在化學(xué)鍵合相色譜法中，溶劑的洗脫能力直接與它的極性相關(guān)在正相色譜中，溶劑的強(qiáng)度隨極性的增強(qiáng)而增加；在反相色譜中，溶劑的強(qiáng)度隨極性的增強(qiáng)而減弱 正相色譜的流動相通常采用烷烴加適量極性調(diào)整劑 反相色譜的流動相通常以水作基礎(chǔ)溶劑，再加入一定量的能與水互溶的極性調(diào)整劑，如甲醇乙腈四氫呋喃等極性調(diào)整劑的性質(zhì)及其所占比例對溶質(zhì)的保留值和分離選擇性有顯著影響一般情況下，甲醇-水系統(tǒng)已能滿足多數(shù)樣品的分離要求，且流動相粘度小價格低，是反相色譜Z常用的流動相但Snyder則推薦采用乙腈-水系統(tǒng)做初始實(shí)驗(yàn)，因?yàn)榕c甲醇相比，乙腈的溶劑強(qiáng)度較高且粘度較小，并可滿足在紫外185~205nm處檢測的要求，因此，綜合來看，乙腈-水系統(tǒng)要優(yōu)于甲醇-水系統(tǒng) 在分離含極性差別較大的多組分樣品時，為了使各組分均有合適的k值并分離良好，也需采用梯度洗脫技術(shù) 本文地址：www.hxsj17.com