研究背景

由于吐溫（聚山梨酯，polysorbate）具有優(yōu)良的穩(wěn)定性、生物相容性和安全性，是抗體藥物制劑處 方中常用的穩(wěn)定劑。作為制劑的重要輔料，吐溫既可以提高活性成分的溶解度，同時又可以抑 制蛋白藥物的自動聚合。盡管吐溫在多種生物制劑中被廣泛應用，但由于不同供應商家產(chǎn)品中存在的副產(chǎn)物差異以及其對各種降解反應的敏感性，迫切需要合適的質(zhì)控方法來監(jiān)控吐溫原料當中以及終端生物制品生命周期中的吐溫質(zhì)量。

在生物制劑配方的酸堿條件下或者具有脂肪酶/酯酶活性的殘存的宿主細胞蛋白（HCP）的催化作用下，吐溫可能發(fā)生水解，見圖 1。吐溫的降解不僅降低了表面活性劑的真實濃度，而且還與不溶性微粒的形成有關(guān)。中藥注射液和化學藥品注射液亦是常用吐溫作為增溶劑、乳化劑或分散劑，制劑通常也會根據(jù)主藥的化學性質(zhì)進行 pH 值的調(diào)節(jié)，弱的酸堿條件下同樣會導致吐溫的水解。吐溫原料本身的質(zhì)量也有較大的差異，同時在長期的儲存和流通中也會產(chǎn)生不同程度的水解。

圖 1. 吐溫 20 水解示意圖

對吐溫原料及其相關(guān)的不同類型制劑中的長期穩(wěn)定性和安全性的關(guān)注促進了吐溫表征和定量的分析方法的發(fā)展。安捷倫公司與科邁恩以及中國醫(yī)學科學院/協(xié)和醫(yī)學院藥物研究所合作建立了吐溫表征和檢測的系列方案，如 UHPLC/QTOF 結(jié)合 Polymer Studio 軟件用于吐溫組成和降解產(chǎn)物精細表征，詳細內(nèi)容可參考往期微信推送?；谟坞x脂肪酸結(jié)構(gòu)中無明顯發(fā)色基團，并且抗體制劑中游離脂肪酸的含量較低，選擇了靈敏度高、專屬性強并且操作簡單的單四極桿質(zhì)譜法來檢測游離脂肪酸。安捷倫實驗室應用 ICH Q14 分析方法開發(fā)指導原則的 AQbD（analytical Quality by Design）理念開發(fā)了基于 UHPLC-MSD 單四極桿質(zhì)譜的游離脂肪酸含量測定方法。

安捷倫多平臺解決方案為吐溫降解與抗體制劑中可見異物/不溶性微粒形成機制研究提供新思路

藥 用輔料分析與質(zhì)量控制 | LC-Q/TOF結(jié)合PolymerStudio 軟件進行吐溫成分精細表征和對比研究

藥 用輔料分析與質(zhì)量控制 ——UHPLC/Q-TOF結(jié)合PolymerStudio 軟件進行吐溫降解產(chǎn)物的研究

儀器和設備

采用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)，配備如下：

二元泵（部件號 G7120A）

自動進樣器（部件號 G7167B）

柱溫箱（部件號 G7116B）

單四極桿質(zhì)譜（部件號 G6125C）

色譜柱 Agilent Zorbax SB-C18 2.1 ×50 mm, 1.8 μm

方法開發(fā)與驗證

樣品前處理：操作簡單，進行簡單的蛋白沉淀，離心取上清液過濾后直接進樣分析。

色譜質(zhì)譜條件摸索：基于 ICH Q14 分析方法開發(fā)指導原則，進行色譜和質(zhì)譜條件的摸索，如下表所示

3 種游離脂肪酸典型分離色譜圖

方法學驗證結(jié)果

分析方法色譜條件確定后，并按照 ICH Q2 的要求進行了方法學驗證。

結(jié) 語

我們基于 ICH Q14 分析方法開發(fā)指導原則的 AQbD 理念，利用 UHPLC/MSD 單四極桿質(zhì)譜和亞二微米 Zorbax SB-C18 色譜柱開發(fā)了抗體藥物制劑中游離脂肪酸含量測定的方法，并按照藥典要求進行了方法學驗證。本方法樣品基質(zhì)和流動相無干擾，3 種游離脂肪酸線性相關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù) R2 均大于 0.999，平均回收率處于 86.85%-105.33% 的范圍內(nèi)，回收結(jié)果良好。

本方法能快速準確的檢測抗體制劑中游離脂肪酸的含量，監(jiān)控抗體制劑在運輸、儲存和流通過程中吐溫由于酯酶或則 pH 作用導致的水解變化，為抗體制劑中吐溫降解的研究提供靈敏的檢測結(jié)果，同時也可以用于化學藥物注射液、中藥注射液以及吐溫原料中吐溫水解產(chǎn)生的游離脂肪酸的含量，用于評估制劑生命周期中的吐溫的質(zhì)量。

# 掃碼可獲得詳細的《安捷倫蛋白制劑中可見異物/不溶性微粒整體方案》