引言

亞硝胺，是最重要的化學(xué)致癌物之一，同時也是四大食品污染 物之一，亞硝胺對人體健康具有嚴(yán)重危害，所以對其在食品中 的檢測和研究，以保障食品安全尤為重要。迄今為止，已發(fā)現(xiàn) 的亞硝胺有300多種。其中N-二甲基亞硝胺（NDMA）和N-二 乙基亞硝胺（NDEA）被國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）列為2A類 致癌物。長期攝入含有大量亞硝胺類物質(zhì)的食品會對人體健康 造成極大危害。 

食物蛋白質(zhì)分解時可能會產(chǎn)生胺類物質(zhì)，蛋白質(zhì)含量豐富且易 腐爛的食品往往有亞硝胺超標(biāo)的風(fēng)險，比如肉類，水產(chǎn)品，且 蛋白質(zhì)的分解產(chǎn)物可能進(jìn)一步與亞硝酸鈉反應(yīng)生成亞硝胺類物 質(zhì)，因此，肉制品以及水產(chǎn)品是亞硝胺的檢測重點。2022年 國家市場監(jiān)督管理總局和國家衛(wèi)生健康委員會共同頒布了GB  2762-2022 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中污染物限量》（該標(biāo) 準(zhǔn)已于2023年6月30日實施），其中規(guī)定肉制品（肉類罐頭除 外）和熟肉干制品中NDMA<3.0 μg/kg，水產(chǎn)制品（水產(chǎn)品罐頭 除外）和干制水產(chǎn)品中NDMA<4.0 μg/kg。該標(biāo)準(zhǔn)實施過程中鼓 勵采用嚴(yán)于GB 2762的控制限量要求，來降低食品中污染物的 風(fēng)險。目前國內(nèi)食品中亞硝胺的檢測標(biāo)準(zhǔn)為GB5009.26-2016 ，其中的方法是氣相色譜-質(zhì)譜法，氣相色譜-熱能分析儀法， 這兩種方法靈敏度低抗干擾能力差，對前處理要求高。采用氣 相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法，可以有效降低基體干擾，提高方法選擇 性與靈敏度，非常適用于肉制品及水產(chǎn)品等復(fù)雜基質(zhì)中NDMA 的檢測。本文采用氣相色譜-電子轟擊-串聯(lián)質(zhì)譜儀（GC-EI-MS/ MS）建立了食品中NDMA的分析方法，方法學(xué)驗證結(jié)果表明， 方法靈敏度高，重復(fù)性好，前處理簡單且回收率良好，可應(yīng)用 于肉制品及水產(chǎn)品中NDMA的定量分析。

實驗部分

儀器與色譜條件

Thermo Scientific? AS 1610 液體自動進(jìn)樣器

Thermo Scientific? TRACE 1610 氣相色譜儀配備程序升溫 （PTV）進(jìn)樣口

Thermo Scientific? TSQ 9610 三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀

Thermo Scientific? Chromeleon? 7.3 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)

標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制

除非另有規(guī)定，本方法所用試劑為色譜純。

標(biāo)準(zhǔn)樣品為NDMA，內(nèi)標(biāo)物為NDMA-D6。稱取NDMA適量，以乙腈為溶劑，分別稀釋至0.25，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0  ng/mL作為系列標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液。其中內(nèi)標(biāo)的濃度均為 5 ng/mL。

樣品溶液與加標(biāo)溶液配制

提?。悍Q取豬肉和魚肉干制品各5 g于50 mL離心管中，加入5 mL水，振蕩混勻，加入10 mL乙腈，渦旋振蕩2 min，置于-20 ℃冰 箱冷凍20 min，加入陶瓷均質(zhì)子1粒以及 4 g硫酸鎂和1 g氯化鈉，渦旋振蕩2 min，置于冷凍離心機(jī)中，轉(zhuǎn)速9 000 r/min，10 ℃離 心 5 min，上清液待凈化。

凈化：稱取150 mg PLS-A 粉末（或1 g增強(qiáng)型脂質(zhì)去除 EMR-Lipid 萃取粉劑或同級品）于15 mL離心管中，加入5 mL水渦旋振 蕩，立即加入5 mL上清液渦旋振蕩1 min，置于冷凍離心機(jī)，9000 r/min，10 ℃離心5 min。

除水：稱取1.6 g硫酸鎂和0.4 g氯化鈉于另一15 mL離心管，加入凈化液渦旋振蕩2 min，置于冷凍離心機(jī)中，轉(zhuǎn)速9000 r/min， 10 ℃離心5 min。取上層有機(jī)相經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾后，上機(jī)測定。樣品濃度為0.5 g/mL，加標(biāo)樣品前處理按以上操作處理，添加濃度為0.5 ng/mL，5.0 ng/mL。

實驗結(jié)果

PTV進(jìn)樣口介紹

原理：PTV進(jìn)樣口相較于傳統(tǒng)分流/不分流進(jìn)樣口，樣品在低溫下以液態(tài)形式注入進(jìn)樣口，然后通過設(shè)定的升溫程序迅速升溫，以 避免樣品瞬間汽化，溶劑和分析物按照沸點大小依次汽化進(jìn)樣。

優(yōu)點： 

? 分析物被注入冷襯管中， 避免了傳統(tǒng)進(jìn)樣的針頭歧視效應(yīng)。 

? 化合物依據(jù)其沸點高低依次汽化然后順序進(jìn)入襯管，能有效減少分流歧視并提高回 收率。 

? 減少污染。當(dāng)目標(biāo)組分進(jìn)入色譜柱后，系統(tǒng)會啟動清洗升溫程序，以從襯管中去除 多余的高沸點基質(zhì)組分。

總結(jié)

本文采用配PTV進(jìn)樣口的氣相色譜-電子轟擊-串聯(lián)質(zhì)譜儀（GC-EI-MS/MS）建立了食品中NDMA的分析方法，方法學(xué)驗證結(jié)果表 明，NDMA在0.25~20 ng/mL濃度范圍內(nèi)線性判定系數(shù)為0.9995。0.5 ng/mL NDMA 標(biāo)準(zhǔn)品魚肉與豬肉的加標(biāo)溶液（各三份平行樣 品）進(jìn)樣峰面積RSD（n=6）值為3.60%，定量限為0.125 ng/mL?？疾炝唆~肉與豬肉兩種基質(zhì)的加標(biāo)回收率，加標(biāo)濃度0.5 ng/mL與 5 ng/mL的回收率均在85~105%。該方法可很好地滿足食品中NDMA分析的需求。

標(biāo)簽：TSQ 9610三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀