• 一種快速、高通量的病毒中和抗體檢測方法

  新冠病毒的出現(xiàn)導(dǎo)致了世界范圍內(nèi)的新冠大流行，為了理解病毒的發(fā)病機(jī)理并開發(fā)疫苗，亟需快速開發(fā)多種研究工具。檢測病毒感染和疫苗接種后的免疫反應(yīng)對新冠病毒的研究十分重要。由于中和抗體是免疫反應(yīng)和疫苗效價(jià)的關(guān)鍵生物標(biāo)志物，患者血清樣本中的中和性抗體水平是用于監(jiān)測有效性的重要參數(shù)。 人體血清中和抗體的鑒定常使用傳統(tǒng)方法例如蝕斑減少中和試驗(yàn) (PRNT) 來檢測。然而，該方法使用活的、具備感染性的病毒加入到靶細(xì)胞中，所以需要生物安全三級實(shí)驗(yàn)室以及耗時(shí)費(fèi)力的細(xì)胞培養(yǎng)。數(shù)據(jù)結(jié)果的分析耗費(fèi)時(shí)間并且不能自動化。此外，假病毒中和試驗(yàn) (pVNT) 方法使用改良型的病毒，可以在生物安全二級實(shí)驗(yàn)室完成，但此方法需要細(xì)胞培養(yǎng)和熒光成像來測得中和抗體活性，因此，也不適用于樣品的高通量篩選。[詳細(xì)]

  2022-03-23 16:41

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• 在血清樣品中通過化學(xué)發(fā)光免疫實(shí)驗(yàn)檢測 新冠 IgG 抗體

  作為新冠病毒免疫反應(yīng)的一部分，感染者體內(nèi)會產(chǎn)生病毒特 異性抗體，在出現(xiàn)癥狀后的一至三周內(nèi)，這些抗體可以在血液 中被檢測到。IgG 和 IgM 幾乎同時(shí)出現(xiàn)，而 IgG 在更長時(shí)間內(nèi)維持一個高水平。在血清中，由于感染病毒或接種疫苗而產(chǎn)生的可檢測到的抗體可以防范將來被新冠病毒感染。但這些抗體持續(xù)的時(shí)間長短和提供保護(hù)的程度是有關(guān)新冠病毒仍需密切調(diào)查的眾多問題之一。 在人體血清中，通過免疫實(shí)驗(yàn)來檢測新冠抗體是增進(jìn)我們了解 這 種 疾 病 以 及 疫 苗 研 究 的 重 要 工 具。Promega LumitTMDx SARS-CoV-2 免 疫 實(shí) 驗(yàn) 使 用了 帶 有 SmBiT 和 LgBiT ( 這 是 NanoLuc 熒光素酶的兩個亞基，只有當(dāng)它們通過結(jié)合相互靠近時(shí)，才具有功能 ) 標(biāo)記的新冠病毒刺突蛋白受體結(jié)合區(qū)域(RBD) 的一個片段。當(dāng)這些標(biāo)記過的病毒蛋白片段與含有新冠病毒抗體的樣品一起孵育時(shí)，他們將與抗體結(jié)合，將 SmBiT和 LgBiT 兩個亞基結(jié)合到一起，并產(chǎn)生功能性的熒光素酶。 添加 Lumit 檢測試劑，在微孔板光度計(jì)上測量產(chǎn)生的熒光信號。[詳細(xì)]

  2022-03-23 16:38

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• 在 FlexStation 3 多功能酶標(biāo)儀上使用 FLIPR 鉀離子通道檢測試劑 盒鑒定 hERG 通道阻滯劑

  藥物誘導(dǎo)的人類 hERG 離子通道阻滯與患者潛在的致死性室性快速心律失常的易感性有關(guān)。近年來，F(xiàn)DA 批準(zhǔn)的一些藥物由于對 hERG 的脫靶作用而退出市場。因此，在藥物發(fā)現(xiàn)過程的早期階段，迫切需要鑒定能夠阻斷 hERG 通道的化合物。 在此，我們展示在 FlexStation 3 多功能酶標(biāo)儀上，一種新的鉀離子通道檢測試劑盒研究 hERG 化合物活性的用途。這種分析方法利用了鉈離子 (Tl+) 的滲透性，通過鉀離子通道進(jìn)入胞質(zhì)，然后被一種新型熒光指示劑檢測到。7 種參照的 hERG阻滯劑在中等 通 量細(xì)胞試 驗(yàn)中進(jìn) 行檢 測，并將 FLIPR TetraSystem 和 IonWorks Barracuda Plus Automated PatchClamp System 收集的數(shù)據(jù)值進(jìn)行比較。[詳細(xì)]

  2022-03-23 16:36

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• 采用重組 C 因子法在 Molecular Devices 四款不同型號多功能微孔板讀板機(jī)上進(jìn)行 定量檢測

  在制藥和YL器械生產(chǎn)過程中，對污染物樣品的監(jiān)測是一個關(guān)鍵步驟。內(nèi)毒素存在于革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁中，是一種常見的污染物，可引起發(fā)燒、炎癥、頭痛、惡心，甚至死亡。內(nèi)毒素的常規(guī)檢測方法是鱟試劑溶酶法 (LAL)，核心成分由鱟的血液中提取而來。在內(nèi)毒素存在的情況下，LAL 通過酶促級聯(lián)凝固，可以通過比濁法或顯色法定量 ( 圖 1A )。這些方法涉及多個酶的步驟，并取決于鱟的可用性。 2021 年 2 月 5 日，國家林業(yè)和草原局、農(nóng)業(yè)農(nóng)村部發(fā)布公告，調(diào)整后的的《 國家ZD保護(hù)野生動物名錄 》正式發(fā)布，將我國分布的鱟科動物 ( ZG鱟、圓尾蝎鱟 ) 升級為國家二級保護(hù)動物。ZG藥典 2020 年版 9251 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則中指出，目前新的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測方法不斷出現(xiàn)，以適應(yīng)特殊品種細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的需要，或減少鱟試劑的使用量。如重組 C因子法 ( 見附 )、微量凝膠法等。[詳細(xì)]

  2024-09-10 23:17

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• 采用 Quant-iT PicoGreen dsDNA 試劑盒對 DNA 進(jìn)行靈敏的熒光定量

  雙鏈 DNA 通常通過測定 DNA 溶液在 260 nm 處的吸光度在酶標(biāo)儀中進(jìn)行定量。然而，該方法在典型的光吸收酶標(biāo)儀上只能測量到約 250 ng/mL。對于涉及小樣本的生物應(yīng)用，如下一代測序和 DNA 擴(kuò)增產(chǎn)物的定量，需要更敏感的方法。來自Thermo Fisher Scientific 公司的 Quant-iT PicoGreen dsDNA檢測試劑盒對 DNA 更特異，比傳統(tǒng)光吸收方法的靈敏度高約1000 倍。 如產(chǎn)品手冊所述，此實(shí)驗(yàn)在微孔板格式中采用單一染料濃度的動態(tài)范圍從 250 pg/mL 到 1000 ng/mL。在這里，我們證明了使 用 Molecular Devices 公司 SpectraMax?酶標(biāo)儀和 Quant-iT PicoGreen 實(shí)驗(yàn)，用戶可以可靠地測量低 至 50 pg/mL 的雙鏈 DNA 濃度。為了ZD化實(shí)驗(yàn)的靈敏度，需要使用ZJ的激發(fā)和發(fā)射波長。[詳細(xì)]

  2024-09-10 22:41

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• 在 SpectraMax iD3 和 iD5 讀板機(jī)上開發(fā) 優(yōu)化的工作流程進(jìn)行鈣流檢測分析

  由于實(shí)驗(yàn)室的需求經(jīng)常會隨著研究的需要而變化，因此擁有一臺多功能微孔板讀板機(jī) ( 具備光吸收、發(fā)光和熒光等多種檢測模式 ) 已成為必需。擁有一個易于升級的讀板機(jī)是非常重要的，例如，提供一個分配選項(xiàng)以方便進(jìn)行基于細(xì)胞的分析測定，而不必購買多個專用儀器，可以在確保靈活性的同時(shí)，節(jié)省成本并減少占用工作臺空間。 對從生物化學(xué)到基于細(xì)胞的檢測感興趣的研究人員通常希望從每個微孔板中提取盡可能多的信息，Z常見的例子是 GPCR介導(dǎo)的鈣信號的動力學(xué)檢測和離子通道活性檢測。通常，在這些分析中，信號會在幾秒鐘內(nèi)達(dá)到ZD值并衰減，因此必須在化合物注入的同時(shí)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測。 在這里，我們展示了使用配備雙注射器系統(tǒng)的 SpectraMax?iD3 和 iD5 多功能微孔 板讀 板機(jī)開發(fā)信息豐富、基 于熒 光的分析方 法，以 監(jiān) 測 細(xì) 胞 內(nèi) 鈣 離子 的 變 化。此 外，使 用 免 洗 FLIPR? 鈣 6 和 6-QF 檢測試劑盒可以增強(qiáng)檢測信號窗口，提高檢測的穩(wěn)健性，并提供必要的靈活性，適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。[詳細(xì)]

  2021-07-08 16:00

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• 使用 SpectraMax 微孔板讀板機(jī)進(jìn)行 HTRF IP-One Gq 檢測

  HTRF? 是 Cisbio 公司開發(fā) 的用于檢 測 生物 分子相互作用的實(shí)驗(yàn)技術(shù) 1。它將熒光共振能量轉(zhuǎn)移 (FRET) 技術(shù)與時(shí)間分辨(TR) 熒光技術(shù)相結(jié)合，可以消除熒光壽命較短的背景熒光。該 檢 測方法 使 用銪 (Eu3+) 或 鋱 (Lumi4 ? -Tb) 的穴狀 化合 物作為供體，熒光團(tuán) ( XL665 或小分子 d2 ) 作為受體。當(dāng)供體和受體距離足夠近時(shí)，供體被一個能量源激發(fā)，可以引發(fā)能量轉(zhuǎn)移到受體，使其在特定波長發(fā)出熒光。 在 這 里， 我 們 展 示 了 如 何 使 用 SpectraMax?i3x 和SpectraMax?iD5 多功能微孔 板讀 板機(jī) 應(yīng) 用 HTRF 技術(shù)進(jìn) 行Gq- 偶聯(lián)受體的分析。G 蛋白偶聯(lián)受體的分析主要通過檢測cAMP 和 IP3 這兩條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平的升高。Cisbio 公司的 IP-One Gq 試劑盒通過檢測 IP3 的穩(wěn)定下游代謝產(chǎn)物——磷酸肌醇 (IP1) 的積累，為鈣離子檢測提供了一種替代方法。[詳細(xì)]

  2024-09-10 22:51

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• 用 cAMP-Gs HiRange HTRF 法檢測 GPCR 活性

  HTRF? 是由 Cisbio 開發(fā)的用于檢測生物分子相互作用的通用技術(shù)。它將熒光共振能量轉(zhuǎn)移 (FRET) 技術(shù)與熒光的時(shí)間分辨(TR) 測量相結(jié)合，可以消除短壽命的背景熒光。該測定使用供體和受體熒光團(tuán)，它們用于標(biāo)記要研究其結(jié)合的蛋白質(zhì)或其他生物分子。 當(dāng)兩個生物分子相互結(jié)合時(shí)，供體和受體就靠 在一起了。能量源 ( 例如閃光燈 ) 對供體的激發(fā)觸發(fā)能量轉(zhuǎn)移到受體，受體繼而在給定波長發(fā)射特定熒光。 HTRF 使 用四種特定的熒光團(tuán)，它們可以組合形成相容的供體 - 受體 TR-FRET 對。 供體是穴狀銪 (Eu3+) 和鋱穴狀化合物(Lumi4 ? -Tb)，它們的長壽命熒光使其可用于時(shí)間分辨熒光分析。已經(jīng)開發(fā)了兩種受體用于 HTRF 分析，XL665 和 d2。兩者的激發(fā)光譜都與 HTRF 供體的發(fā)射光譜重疊，在 665 nm處的發(fā)射峰落在供體不顯著發(fā)射的區(qū)域內(nèi)。Z初的 HTRF 受體 XL665 是一種從紅藻中純化的藻膽蛋白色素。 第二代受體d2 是改良的別藻藍(lán)蛋白，比 XL665 小 100 倍，旨在緩解基于XL665 的檢測可能出現(xiàn)的空間位阻問題。[詳細(xì)]

  2021-07-08 15:56

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• 利用基于 HTRF 的 Tag-lite 技術(shù)檢測胰高血糖 素 GLP-1 受體的 Kd 值

  Cisbio 的 Tag-lite HTRF 平臺能 夠 有效 地 用 HTRF 熒 光團(tuán)標(biāo)記目標(biāo)位點(diǎn)上感興趣的蛋白。細(xì)胞表面受體可以插入 SNAP-tag 質(zhì)粒中，然后用這種結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)染細(xì)胞并表達(dá)標(biāo)記的受體。通過添加 snap -lumi4-Tb 底物，用鋱 (Tb)穴狀化合物標(biāo)記受體。為了進(jìn)行結(jié)合試驗(yàn)，受體的配體用 HTRF 受體熒光團(tuán)標(biāo)記，例如 d2。當(dāng) d2 配體與鋱標(biāo)記的受體結(jié)合時(shí)，可以使用具備 HTRF 功能的微孔板讀板機(jī)檢測受體到配體的時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移 (TRFRET)[詳細(xì)]

  2024-09-10 21:48

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