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多克隆抗體的免疫電泳
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本文由 上海盈公生物技術(shù)有限公司 整理匯編
2018-09-27 10:00 691閱讀次數(shù)
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免疫電泳又稱為γ球蛋白電泳或免疫球蛋白電泳技術(shù),這是一種能夠判斷血液中三種免疫球蛋白IgM''IgG''IgA含量水平的實驗方法。在這項實驗技術(shù)中,首先利用蛋白質(zhì)的分子量和所帶電荷的比值運用水平瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)將蛋白質(zhì)進行分離,然后將特異性的抗體引入到與電泳方向平行的凹槽中,在抗原和抗體的擴散過程中,抗原和抗體適當(dāng)比例的結(jié)合會導(dǎo)致沉淀的產(chǎn)生(如圖)。0.85%鹽不僅可以終止擴散過程也可用于洗去未結(jié)合的蛋白,抗原和抗體結(jié)合所形成的沉淀線即可以肉眼觀察也可利用染色方法觀察。免疫電泳技術(shù)不僅可用于血清或尿樣中單克隆抗體的鑒定,也可用于其它方面,比如免疫復(fù)合物的篩選、各種異常丙種球蛋白血癥的識別和鑒定等。免疫電泳技術(shù)也是進行蛋白質(zhì)常規(guī)評價的一種可靠,極ng確的實驗方法,可觀察蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化和濃度的改變?!緦嶒灢牧稀竣睂嶒炂鞑乃诫娪緝x;打孔器;滴管;刀片;電源;水?。?5°C);蒸餾水;燒杯(400-600ml);加樣槍(5-100ul)。⒉實驗試劑⑴純化的抗體;蛋白質(zhì)混合物;1%瓊脂。⑵Tris-緩沖溶液:2.24g酸,4.43gTris,0.053g乳酸鈣及0.065g疊氮化鈉溶于100ml蒸餾水中。⑶電泳緩沖溶液:將Tris-緩沖溶液與蒸餾水按1:4的比例混合。【實驗方法】⒈準(zhǔn)備瓊脂糖凝膠將瓊脂和電泳緩沖溶液混合放入90°C水浴加熱至溶化,制成1%瓊脂,將瓊脂在冷卻前鋪在水平玻璃板上,待冷卻至室溫后,按圖用內(nèi)徑4毫米的打孔器打孔及制作凹槽。⒉電泳將用電泳緩沖溶液稀釋的4%-5%的抗原用滴管小心放入小孔中,將膠板放入電泳槽中并用潤濕的濾紙將膠板和電泳槽中的緩沖溶液相連。蓋上電泳槽蓋,接通電源,6V/cm通電至前沿移動約35mm,時間約為1小時,利用示蹤染料判斷移動距離。⒊擴散將膠板移出電泳槽并放在水平位置上''用濾紙潤干膠板凹槽中的緩沖溶液''在凹槽中加入適量的抗體(0.2ml~0.25ml),注意抗體不能溢出凹槽以避免污染.將膠板移至含有疊氮化鈉且有一定濕度的盒內(nèi)''加蓋密封后在30°C水浴擴散至少10小時后,移至0.85%鹽水中以終止擴散并洗去未結(jié)合的蛋白?!緦嶒灲Y(jié)果】觀察抗原和抗體之間所形成的沉淀線,并進行記錄。
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多克隆抗體的免疫電泳
- 免疫電泳又稱為γ球蛋白電泳或免疫球蛋白電泳技術(shù),這是一種能夠判斷血液中三種免疫球蛋白IgM''IgG''IgA含量水平的實驗方法。在這項實驗技術(shù)中,首先利用蛋白質(zhì)的分子量和所帶電荷的比值運用水平瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)將蛋白質(zhì)進行分離,然后將特異性的抗體引入到與電泳方向平行的凹槽中,在抗原和抗體的擴散過程中,抗原和抗體適當(dāng)比例的結(jié)合會導(dǎo)致沉淀的產(chǎn)生(如圖)。0.85%鹽不僅可以終止擴散過程也可用于洗去未結(jié)合的蛋白,抗原和抗體結(jié)合所形成的沉淀線即可以肉眼觀察也可利用染色方法觀察。免疫電泳技術(shù)不僅可用于血清或尿樣中單克隆抗體的鑒定,也可用于其它方面,比如免疫復(fù)合物的篩選、各種異常丙種球蛋白血癥的識別和鑒定等。免疫電泳技術(shù)也是進行蛋白質(zhì)常規(guī)評價的一種可靠,極ng確的實驗方法,可觀察蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化和濃度的改變?!緦嶒灢牧稀竣睂嶒炂鞑乃诫娪緝x;打孔器;滴管;刀片;電源;水浴(55°C);蒸餾水;燒杯(400-600ml);加樣槍(5-100ul)。⒉實驗試劑⑴純化的抗體;蛋白質(zhì)混合物;1%瓊脂。⑵Tris-緩沖溶液:2.24g酸,4.43gTris,0.053g乳酸鈣及0.065g疊氮化鈉溶于100ml蒸餾水中。⑶電泳緩沖溶液:將Tris-緩沖溶液與蒸餾水按1:4的比例混合?!緦嶒灧椒ā竣睖?zhǔn)備瓊脂糖凝膠將瓊脂和電泳緩沖溶液混合放入90°C水浴加熱至溶化,制成1%瓊脂,將瓊脂在冷卻前鋪在水平玻璃板上,待冷卻至室溫后,按圖用內(nèi)徑4毫米的打孔器打孔及制作凹槽。⒉電泳將用電泳緩沖溶液稀釋的4%-5%的抗原用滴管小心放入小孔中,將膠板放入電泳槽中并用潤濕的濾紙將膠板和電泳槽中的緩沖溶液相連。蓋上電泳槽蓋,接通電源,6V/cm通電至前沿移動約35mm,時間約為1小時,利用示蹤染料判斷移動距離。⒊擴散將膠板移出電泳槽并放在水平位置上''用濾紙潤干膠板凹槽中的緩沖溶液''在凹槽中加入適量的抗體(0.2ml~0.25ml),注意抗體不能溢出凹槽以避免污染.將膠板移至含有疊氮化鈉且有一定濕度的盒內(nèi)''加蓋密封后在30°C水浴擴散至少10小時后,移至0.85%鹽水中以終止擴散并洗去未結(jié)合的蛋白。【實驗結(jié)果】觀察抗原和抗體之間所形成的沉淀線,并進行記錄。[詳細(xì)]
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2018-09-27 10:00
產(chǎn)品樣冊
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多克隆抗體的定義
- 多克隆抗體:1964年,世界衛(wèi)生組織舉行專門會議,將具有抗體活性以及與抗體相關(guān)的球蛋白統(tǒng)稱為免疫球蛋白(Ig),如瘤蛋白,巨球蛋白血癥、冷球蛋白血癥等患者血清中存在的異常免疫球蛋白以及正常人天然存在的免疫球蛋白亞單位等。因而免疫球蛋白是結(jié)構(gòu)化學(xué)的概念,而抗體是生物學(xué)功能的概念。可以說,幾乎所有抗體都是免疫球蛋白(極少數(shù)抗體為RNA),但并非所有免疫球蛋白都是抗體。定義1:由多個B細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體,可與不同抗原表位結(jié)合且免疫球蛋白類別各異。所屬學(xué)科:免疫學(xué)(一級學(xué)科);免疫系統(tǒng)(二級學(xué)科);免疫分子(三級學(xué)科)定義2:對特定抗原所產(chǎn)生的一組免疫球蛋白混合物,每種免疫球蛋白能識別抗原分子上的一個表位。所屬學(xué)科:生物化學(xué)與分子生物學(xué)(一級學(xué)科);總論(二級學(xué)科)定義3:多種抗原表位刺激機體免疫系統(tǒng)后,機體產(chǎn)生的針對不同抗原表位的混合抗體。所屬學(xué)科:細(xì)胞生物學(xué)(一級學(xué)科);細(xì)胞免疫(二級學(xué)科)Z初有人用電泳證明血清中抗體活性在γ球蛋白部分,故曾把抗體統(tǒng)稱為丙種(γ)球蛋白。后來發(fā)現(xiàn),抗體并不都在γ區(qū);并且位于γ區(qū)的球蛋白,也不一定都具有抗體活性。[詳細(xì)]
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2018-10-03 10:00
產(chǎn)品樣冊
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免疫電泳(IEP)
- 免疫電泳(IEP)[詳細(xì)]
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2024-09-28 07:01
產(chǎn)品樣冊
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大觀霉素人工抗原的合成及其多克隆抗體制備
- 大觀霉素人工抗原的合成及其多克隆抗體制備[詳細(xì)]
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2024-09-30 21:43
標(biāo)準(zhǔn)
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紅外光譜研究的物體的的性質(zhì)
- 紅外光譜研究的物體的的性質(zhì)[詳細(xì)]
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2008-07-31 00:00
期刊論文
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差熱分析的的基本原理
- 差熱分析的的基本原理[詳細(xì)]
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2018-09-17 10:00
產(chǎn)品樣冊
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潤滑油的性能指示指的的什么?
- 游離水,使用壽命不長,會使?jié)櫥土鲃有宰儾?、?nèi)燃機油等,破壞正常潤滑?;曳忠话闶且恍┙饘僭丶捌潲}類,而是不得低于某個指標(biāo)。氧化的速度受溫度的影響Zda。此外,沉淀物多,它是潤滑油的重要指標(biāo)之一;T8022-87規(guī)定的方法進行測定,發(fā)生氧化。當(dāng)使用溫度高時,或由添加劑帶來的一些難溶于溶劑的有機金屬鹽、壓縮機油。熱安定性 它表示油品的耐高溫能力,在很大程度上取決于基礎(chǔ)油的組成和餾分,就必須盡可能地提高基礎(chǔ)油的精制深度、使用過程中。凝點和傾點 凝點是指在規(guī)定的冷卻條件下油品停止流動的Z高溫度 潤滑油的顏色與基礎(chǔ)油的精制深度及所加的添加劑有關(guān),為保證油品有良好的抗乳化性,潤滑性能變差,一般可按GB/T260-88的規(guī)定進行,實際使用性比凝點好。潤滑油在使用過程中,酸值表示油品精制的深度或添加劑的加入量(當(dāng)加有酸性添加劑時)、汽接觸的油品容易腐蝕機械設(shè)備,降低潤滑性能,發(fā)生水解反應(yīng)而失效??谷榛浴櫥偷目谷榛允侵阜乐谷榛铀儆袡C酸對金屬的腐蝕作用。這是一項定性試驗,會加速油品氧化變質(zhì),堵塞油路,有利于承受高負(fù)荷;顏色變深,為此常要加入防銹添加劑。為提高潤滑油的抗腐蝕性、油嘴和過濾器,在調(diào)[詳細(xì)]
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2018-12-04 09:00
產(chǎn)品樣冊
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掃描電鏡的電子槍的選擇
- 掃描電鏡的電子槍的選擇[詳細(xì)]
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2012-03-07 00:00
期刊論文
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水的電導(dǎo)率的概念
- 水的電導(dǎo)率的概念[詳細(xì)]
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2011-07-14 00:00
選購指南
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酒花的香味的表征
- 酒花是啤酒中至關(guān)重要的成分,其提供了許多啤酒中麥芽味道的重要平衡,同時其也有助于在釀造過程中,煮沸時沉淀蛋白等。酒花也有防腐的性能,可以幫助啤酒保持新鮮,防止細(xì)菌的侵?jǐn)_。酒花的種類非常多,其釋放的味道也很豐富。酒花必須小心保存,使用時必須保持新鮮,因為香味會隨著酒花老化而降低。由此,有必要對酒花的質(zhì)量進行表征,以便使釀造師能夠開發(fā)和提供所需的產(chǎn)品。酒花的香味表征非常復(fù)雜,酒花中許多化合物有味道。傳統(tǒng)評估酒花質(zhì)量的方法是根據(jù)經(jīng)驗豐富釀造師的嗅覺體驗,將一些酒花置于釀造師的手指上壓碎,由其聞酒花釋放的香味。該方法有效,但是不客觀,且對如何正確利用酒花缺少定量的信息。本應(yīng)用文獻描述了一種氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀的操作系統(tǒng),該系統(tǒng)可客觀的分析酒花中的芳香化合物,同時當(dāng)每種成分從色譜柱洗脫后,用戶可對其味覺特征監(jiān)測。該方法使得用戶可對特別的酒花樣品進行更全面的表征。[詳細(xì)]
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2018-08-17 10:00
產(chǎn)品樣冊
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harlan的TD01064的說明書
- 美國HarlanLaboratorieswww.harlan.com訂貨電話4006551678Harlan實驗室是美國的家族公司,成立于1931年,總部設(shè)在印第安納波利斯,在12個國家設(shè)有運營子公司,從2008年11月10號起統(tǒng)一使用HarlanLaboratoriesLtd為公司的Logo,目的就是:以一個旗幟,一個理想,一種價值觀,以及Harlan全公司科學(xué)英才的熱情,為客戶的成功提供我們世界yi流的合同研究經(jīng)驗、質(zhì)量服務(wù)。Harlan是一家必不可少的領(lǐng)xian的臨床前和非臨床合同研究機構(gòu),是研究模型、動物食物,和服務(wù)于制藥、生物技術(shù)、YL器械、農(nóng)藥、化學(xué)工業(yè)以及大學(xué)、政府和其他的研究組織?! ?004年瑞士RCCLtd,歐洲Zda的合約研究機構(gòu),被Harlan合并成為其旗下的一全資子公司。 2004年8月,漢德森與瑞士RCC公司簽署合作協(xié)議,現(xiàn)在已過渡為與HarlanLaboratories的合作協(xié)議關(guān)系,將一如既往的共同努力,共同開發(fā)ZG醫(yī)藥、農(nóng)藥以及化學(xué)品市場,為ZG企業(yè)走上國際市場提供了Z高標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)服務(wù)。 在長達30年的時間里,數(shù)目眾多的產(chǎn)品曾經(jīng)在RCC實驗室里進行過完全符合GLP標(biāo)準(zhǔn)的測試。在多年的時間里,RCC的科學(xué)家、技術(shù)人員、風(fēng)險評估人員和法規(guī)專家積累的廣博的知識和經(jīng)驗.以此為基石,RCC得以成為醫(yī)藥、農(nóng)藥以及化學(xué)品領(lǐng)域首屈yi指的合約研究機構(gòu)?! 〖婧隙嗉页墝嵙嶒炇液蟮腍arlanLaboratories業(yè)務(wù)能力得到進一步的提升.Harlan的科學(xué)家在新藥臨床前研究領(lǐng)域擁有很深的行業(yè)經(jīng)驗,這使得Harlan可以為客戶提供整套的專業(yè)服務(wù),從項目立項到為臨床實驗或產(chǎn)品注冊要求的文件準(zhǔn)備,Harlan的服務(wù)貫徹整個流程的操作。[詳細(xì)]
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2018-09-29 10:03
產(chǎn)品樣冊
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棱鏡的接觸角的測量
- 棱鏡的接觸角的測量[詳細(xì)]
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2024-09-14 00:01
實驗操作
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關(guān)于長期施肥的草地的營養(yǎng)成份的研究
- 關(guān)于長期施肥的草地的營養(yǎng)成份的研究[詳細(xì)]
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2008-02-20 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
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基于電子鼻的對摻假的“伊利”牛奶的檢測
- 將電子鼻應(yīng)用于對摻假牛奶的檢測,旨在尋求一種快速有效的方法以實現(xiàn)對牛奶的質(zhì)量監(jiān)控。實驗過程是:純牛奶中摻入不同比例的奶粉奶,并用電子鼻檢測17d的氣味;純牛奶中摻入不同體積的蒸餾水并用電子鼻檢測。將檢測結(jié)果用LDA和PCA方法分析。在LDA和PCA分析圖中可以得出如下結(jié)論:電子鼻可以準(zhǔn)確地區(qū)分純牛奶與奶粉奶。當(dāng)純牛奶與奶粉奶以不同的比例混合后,電子鼻根據(jù)氣味的濃度區(qū)分它們。在第1~3天,LDA分析圖中各組樣品根據(jù)純牛奶和奶粉奶的混合比例有規(guī)律地分布;當(dāng)純牛奶中摻入不同體積水時,電子鼻能準(zhǔn)確地區(qū)分它們。在PCA分析圖中.高濃度奶與低濃度奶被明顯地區(qū)分.可以籍此來判別牛奶的濃度。電子鼻能區(qū)分存放1~4d的牛奶.不能區(qū)分存放5~7d的牛奶。隨著存放時間的延長,電子鼻可以根據(jù)牛奶氣味的變化,在LDA和PCA分析圖中反映牛奶的新鮮度。[詳細(xì)]
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2018-08-16 10:00
產(chǎn)品樣冊
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基于電子鼻的對摻假的伊利牛奶的檢測
- 基于電子鼻的對摻假的伊利牛奶的檢測[詳細(xì)]
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2024-09-26 02:45
專利
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H13的組織在熱處理前后的變化的跟蹤
- H13的組織在熱處理前后的變化的跟蹤[詳細(xì)]
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2024-09-20 13:38
操作手冊
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常見的半自動型頂空進樣器的技術(shù)參數(shù)的相關(guān)問題
- 常見的半自動型頂空進樣器的技術(shù)參數(shù)的相關(guān)問題[詳細(xì)]
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2024-09-29 11:18
實驗操作
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我們的機遇---火星的選擇
- 我們的機遇---火星的選擇[詳細(xì)]
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2004-08-17 00:00
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延長色譜柱的使用壽命的方法
- 延長色譜柱的使用壽命的方法[詳細(xì)]
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2011-01-13 00:00
選購指南
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制備色譜的一次革命性的創(chuàng)新!
- 制備色譜的一次革命性的創(chuàng)新![詳細(xì)]
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2007-08-15 00:00
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