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犬狂犬病毒抗原(RV-Ag)的實驗原理以及試劑盒的組成
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本文由 上海信然實業(yè)有限公司 整理匯編
2015-05-07 00:00 316閱讀次數(shù)
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犬狂犬病毒抗原(RV-Ag)的實驗原理以及試劑盒的組成
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犬狂犬病毒抗原(RV-Ag)的實驗原理以及試劑盒的組成
- 犬狂犬病毒抗原(RV-Ag)的實驗原理以及試劑盒的組成[詳細]
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2015-05-07 00:00
期刊論文
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犬狂犬病毒抗原(RV-Ag)說明書.pdf
- 犬狂犬病毒抗原(RV-Ag)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T5IU/L-125IU/L使用目的:本試劑盒用于測定犬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中狂犬病毒抗原(RV-Ag)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中犬狂犬病毒抗原(RV-Ag)水平。用純化的犬狂犬病毒抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入狂犬病毒抗原(RV-Ag),再與HRP標記的狂犬病毒抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的狂犬病毒抗原(RV-Ag)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人狂犬病毒抗原(RV-Ag)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(240IU/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。120IU/L5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液60IU/L4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液30IU/L3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液15IU/L2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液7.5IU/L1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié):計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-11-15 10:03
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犬狂犬病毒ELISA試劑盒使用說明書
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2014-03-31 00:00
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犬狂犬病毒抗體ELISA試劑盒使用說明書
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2014-04-02 00:00
專利
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犬狂犬病毒抗體(RV-Ab)試劑盒說明書代測
- 犬(Canine)狂犬病毒抗體(RV-Ab)ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被狂犬病毒(RV)的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的狂犬病毒抗體(RV-Ab)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。3.細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。[詳細]
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2018-09-03 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人輪狀病毒抗原(RV-Ag)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
- 人輪狀病毒抗原(RV-Ag)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書[詳細]
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2015-05-12 00:00
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犬狂犬病抗原(RV Ag)ELISA試劑盒的使用說明
- 犬狂犬病抗原(RV Ag)ELISA試劑盒的使用說明[詳細]
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2024-09-29 09:29
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小鼠乙型肝炎e抗原elisa試劑盒實驗原理
- 實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平。用純化的抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入乙型肝炎e抗原(HBeAg),再與HRP標記的抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乙型肝炎e抗原(HBeAg)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(160IU/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個[詳細]
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2018-10-08 10:01
產(chǎn)品樣冊
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犬狂犬病毒抗體(RV-Ab)酶聯(lián)免疫分析
- 犬狂犬病毒抗體(RV-Ab)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。48T使用目的:本試劑盒用于測定犬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中狂犬病毒抗體(RV-Ab)表達。計算和結(jié)果判定:試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10臨界值(CUTOFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定:樣品OD值<臨界值(CUTOFF)者為狂犬病毒抗體(RV-Ab)陰性陽性判定:樣品OD值≥臨界值(CUTOFF)者為狂犬病毒抗體(RV-Ab)陽性注意事項1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。5.底物請避光保存。6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-09-19 10:01
產(chǎn)品樣冊
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人(human)B組輪狀病毒抗原(RV-Ag)
- 人(human)B組輪狀病毒抗原(RV-Ag)本試劑盒僅供研究使用標本:糞便試劑組成精密度微孔板96孔(MicrotitrationStrips)1塊2~8℃干燥保存酶標偶合液(Conjugate)1瓶12.0毫升2~8℃冷藏保存標準品(Standard)5瓶各1.0毫升2~8℃冷藏保存呈色劑A(SubstrateA)1瓶6.0毫升2~8℃避光冷藏保存呈色劑B(SubstrateB)1瓶6.0毫升2~8℃避光冷藏保存終止液(StoppingSolution)1瓶6.0毫升室溫保存20倍濃縮洗滌液(RinsingBufferx20)1瓶60.0毫升2~8℃冷藏保存5倍濃縮樣品稀釋液(Diluentx5)1瓶15.0ml2~8℃冷藏保存英文說明書,中文說明書各一份室溫保存二、注意事項1.此試劑為體外檢測試劑,效期內(nèi)使用,試劑應(yīng)視為傳染物,不同總批號的試劑不能混用。使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出。室溫放置至少30分鐘,濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶后,請于37℃孵育15分鐘。濃縮樣品稀釋液出現(xiàn)結(jié)晶后,請于37℃孵育15分鐘若24小時內(nèi)進行實驗,標本可存放于2~8℃。不需及時實驗,標本-20℃保存,避免反復(fù)凍融。在反復(fù)清洗微孔板,并扣干微孔中的殘余液體,否則將降低極ng確度,造成吸光度偏離的假像。加樣完畢后,應(yīng)注意輕微搖動微孔反應(yīng)條,以便使孔中的液體充分混勻。試劑盒保存于2~8℃,請勿冷凍,有效期請見盒內(nèi)標示。三、實驗前準備1.使用前應(yīng)將盒內(nèi)各試劑取出,室溫放置至少30分鐘。2.準備各種實驗儀器及材料,如微量移液器,吸頭,醫(yī)用蒸餾水等3.濃縮洗液與醫(yī)用蒸餾水119倍稀釋后成為應(yīng)用洗滌液4.濃縮樣品稀釋液與醫(yī)用蒸餾水14倍稀釋成應(yīng)用樣品稀釋液5.用應(yīng)用樣品稀釋液來稀釋樣品,按照1:100的體積比來稀釋樣品如10μl的樣品加入到1ml的應(yīng)用樣品稀釋液中,充分混勻待用。)四、操作步驟1.取出酶標板,設(shè)空白孔,依照次序?qū)?yīng)分別加入100μl的標準品于空白微孔中(空白孔視為0號標準品,用醫(yī)用蒸餾水替代)2、分別標記樣品編號,加入100μl的稀釋樣品于空白微孔中(不同的樣本采用不同的吸頭)。3、將酶標板置于37℃溫育30分鐘;4、將酶標板板取出,將其中的液體甩去,每個孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,立即甩去液體;5、每個孔中加滿應(yīng)用洗滌液后,輕微振搖酶標板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去,在吸水紙上將酶標板拍干。6、重復(fù)第5個步驟5次,在吸水紙上將酶標板拍干。7、在標準品孔和樣品孔中加入100μl的酶標偶合溶液。8、將96孔板置于37℃溫育30分鐘。9、將酶標板取出,將其中的液體甩去,每個孔中全部加滿應(yīng)用洗滌液后,立即甩去液體。10、每個孔中再次加滿洗滌應(yīng)用液后,室溫輕微振搖酶標板30秒后將孔中的應(yīng)用洗滌液甩去,在吸水紙上將酶標板拍干。11、重復(fù)第5個步驟5次,在吸水紙上將酶標板拍干。12、在每個孔中加入底物A50μl后立即加入底物B50μl。輕輕振蕩混勻。(A液、B液采用不同的吸頭加樣)13、將酶標板置于37℃避光溫育反應(yīng)15分鐘。14、每個微孔中加入50μl的終止液,輕輕振蕩混勻。15、在酶標儀上,450nm處測定OD;顯色后,15分鐘內(nèi)進行測定。16、根據(jù)制備的標準曲線,計算樣本含量五、結(jié)果判斷1.儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值;2、檢測值范圍:0-80IU/ml3、敏感度:0.1IU/ml[詳細]
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2018-09-27 10:00
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人狂犬病毒抗原(RV)ELISA試劑盒使用說明書
- 人狂犬病毒抗原(RV)試劑盒(ELISA)使用說明書l本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細胞上清及相關(guān)液體樣本中人狂犬病毒抗原(RV)的含量。l有效期:6個月l保存條件:2-8℃l本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷實驗原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被人狂犬病毒抗原(RV)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人狂犬病毒抗原(RV)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。樣本處理及要求1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過一夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心20分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3.組織勻漿:用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶YZ劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復(fù)凍融。Z后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。4.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注:標本溶血會影響Z后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。標本處理1.本公司只對試劑盒本身負責,不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負責,請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。2.實驗前應(yīng)預(yù)測標本含量,如果標本濃度過高,應(yīng)對標本進行稀釋,使稀釋后的標本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。3.若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進行預(yù)實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。4.使用化學裂解液制備的組織勻漿或細胞提取液可能會由于某些化學物質(zhì)的引入導致ELISA實驗結(jié)果偏差。5.若樣本為細胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。6.某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。7.建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導致實驗結(jié)果偏差。需要而未提供的試劑和器材酶標儀(450nm)高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱蒸餾水或去離子水試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標板8孔×12條8孔×6條無標準品0.3mL*6管0.3mL*6管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測抗體-HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無備注:1.標準品濃度依次為:120、60、30、15、7.5、0IU/L2.經(jīng)過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過Zda標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。注意事項嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。洗板不正確可以導致不準確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍的底物液不能使用。避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。在儲存和溫育時避免強光直接照射。平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。不能使用過期產(chǎn)品。如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。試劑準備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。實驗結(jié)果計算以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關(guān)軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。試劑盒性能1.檢測范圍:3.75IU/L120IU/L。2.靈敏度:Zdi檢測濃度小于0.1IU/L。3.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。4.重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于15%。說明1.由于現(xiàn)有條件及科學技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風險。2.Z終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務(wù)必準備充足的標本備份。3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進行實驗操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到**的檢測結(jié)果。問題解答若實驗效果不好,請及時對顯色結(jié)果拍照,保留所用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料:問題可能原因解決方案標準曲線差吸取及洗滌不充分充分的吸取及洗滌移液不極ng確檢查和校正移液器精密度低洗滌不充分按說明書要求充分洗滌和浸泡混勻不充分和吸取試劑不足充分混勻和吸取試劑重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜加樣不極ng確檢查和校正移液器O.D值低每孔加的試劑量不極ng確校正移液器,極ng確加入試劑溫育時間不正確保證充足的溫育時間溫育溫度不正確試劑要平衡至室溫并保證準確的溫育溫度酶標記物或底物失效通過混合酶標記物和底物,顏色應(yīng)迅速顯現(xiàn)來檢查沒有加入終止液按照說明書實驗操作步驟加入終止液超出讀數(shù)時間讀數(shù)在說明書推薦的讀數(shù)時間內(nèi)讀數(shù)樣本值不正確的樣本儲存方式正確儲存樣本,使用新鮮樣本進行實驗不正確的樣本收集和處理方法采取正確的樣本收集和處理方法待測物質(zhì)在樣本中含量低使用新鮮樣本,重復(fù)實驗[詳細]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊
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犬狂犬病毒抗體酶聯(lián)免疫分析(ELISA) 試劑盒使用說明書
- 犬狂犬病毒抗體酶聯(lián)免疫分析(ELISA) 試劑盒使用說明書[詳細]
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2014-03-07 00:00
產(chǎn)品樣冊
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2023-08-07 17:21
應(yīng)用文章
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2023-09-07 10:50
應(yīng)用文章
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豬偽狂犬病毒抗原雙抗夾心法實驗檢測說明
- 豬偽狂犬病毒抗原雙抗夾心法實驗檢測說明[詳細]
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2016-08-16 00:00
標準
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探測器的原理以及激發(fā)光源
- 探測器的原理以及激發(fā)光源[詳細]
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2014-11-25 00:00
實驗操作
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Elisa試劑盒抗原對整個實驗的操作影響
- 在Elisa實驗過程中,關(guān)鍵步驟的操作要領(lǐng)需要熟練掌握。在實驗的影響因素中,使用儀器要求、試驗的重復(fù)性、樣品的稀釋等,在后面的技術(shù)內(nèi)容中,上海恒遠生物公司會為大家逐一介紹。今天我們來看一看,論Elisa試劑盒抗原對整個實驗的操作影響:Elisa中,包被于固相載體表面的抗原或抗體的來源和制備方法對試驗結(jié)果都有影響。包被所用的抗原必須是可溶性的,而且要求是優(yōu)質(zhì)和穩(wěn)定的制劑,純度和免疫原性要高。如果不純,由于抗原中所含雜質(zhì)就會競爭固相載體上的有限位置,降低敏感性和特異性。此外還應(yīng)考慮到制備包被抗原不應(yīng)破壞其免疫學活性。經(jīng)試驗證明,適用于其他血清學試驗的抗原并非均適合用于Elisa法。因此,對某一疾病的診斷,必須通過實踐,才能選出適用的優(yōu)質(zhì)抗原。對大多數(shù)傳染病和寄生蟲病的血清學診斷中所用的抗原并非要求十分嚴格,一般能用于補體結(jié)合試驗的可溶性抗原均可用于Elisa,例如超聲波抗原、凍融抗原、細菌的外膜抗原、脂多糖(LPS)、細菌的外毒素以及用表面活性劑(如SDS)所提取的抗原等,在作Elisa時,必須要有1-2種試劑、要求純化,但用表面活性劑提取的抗原在包被前必須透析除去表面活性劑,否則就不易吸附到固相載體上去。此外,對某些抗原必須進行提純,如病毒的組織培養(yǎng)和雞胚培養(yǎng)物以及病毒接種動物的臟器等,它們當中存在著許多非抗原的蛋白質(zhì),必須設(shè)法除去,常用梯度超速離心或親和層析法提純,不經(jīng)提純是不能使用的。在用特異性抗體包被固相載體時也要提純。用抗原或抗體蛋白包被固相載體時選擇的濃度要適當。如濃度太高,則低效價抗體可能測不出來,或包被過量形成多層抗原吸附,故在操作過程中可能脫落從而降低敏感性和可重復(fù)性。用Z適稀釋度抗原,包被固相載體不僅經(jīng)濟,而且可以克服前帶現(xiàn)象。那么用多大濃度抗原進行包被Z為合適呢?可通過棋盤滴定法進行測定,但用單項滴定法更為簡便,其方法是將抗原進行一系列稀釋包被微量反應(yīng)板,再用一定稀釋度的陽性參考血清和陰性參考血清進行孵育后洗滌,再加酶結(jié)合物進行反應(yīng),經(jīng)孵育洗滌后,加底物溶液顯色,終止反應(yīng)后分別測定O.D值,選擇O.D值≥1.0的那個抗原稀釋度為Z適包被濃度。一般總是要選擇那個O.D值稍大于1.0,而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求陽性參考血清和陰性參考血清的O.D值有明顯差別。抗原包被固相載體除濃度外,對時間、溫度、PH均有關(guān)系。溫度高(如37℃、45℃、或56℃),包被時間可縮短,溫度低可延長包被時間。但為了方便起見,通常采用4℃包被過一夜,可使抗原吸附得更加完全且均勻。在用聚苯乙烯或聚乙烯微量反應(yīng)板或塑料管作固相載體時,在堿性條件下(如0.1mol/L、PH9.6碳酸鹽緩沖液稀釋抗原)4℃包被過一夜較為合適。但在某些試驗中,如用LPS或毒素蛋白包被時,用PH7.2-7.4PBS稀釋才是滿意的。包被特異蛋白質(zhì)的濃度為1-10ug/ml,而對某些病原微生物抗原以5-20ug/ml較為合適,但均應(yīng)通過滴定。血清、血漿或其他體液,均可作為Elisa試驗樣品(標本)。但應(yīng)注意分離血清時,血液要求放置室溫中凝固收縮,不宜置冰箱(4℃)中凝固,否則會使大部分IgM和少量IgG喪失活性。關(guān)于人血清在保存過程中抗體的穩(wěn)定性報導尚不多。但一般認為作Elisa血清**要新鮮,若要貯藏,必須少量分裝保存于低溫冰箱,并防止反復(fù)凍融。血漿可用肝素毛細管法采血,而血清可用濾紙片法采血。我公司Elisa試劑盒僅供科研使用。產(chǎn)品質(zhì)量過硬,價格優(yōu)惠,歡迎廣大客戶電詢我司業(yè)務(wù)員。[詳細]
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2018-11-16 10:02
產(chǎn)品樣冊
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數(shù)顯溫控表的組成及原理
- 數(shù)顯溫控表的組成及原理[詳細]
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2011-05-13 00:00
實驗操作
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原子吸收光譜分析儀器的原理及組成
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2011-08-26 00:00
其它
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豬瘟病毒抗原ELISA試劑盒實驗方法
- 豬瘟病毒抗原(CSFV-Ag)酶聯(lián)免疫分析試劑盒僅供研究使用實驗原理采用雙抗體夾心法測定血清或血漿中豬瘟病毒抗原(CSFV-Ag)。用純化的豬瘟病毒抗原(CSFV-Ag)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中瘟病毒抗原(CSFV-Ag)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的瘟病毒抗原(CSFV-Ag)k抗體結(jié)合,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中豬瘟病毒抗原(CSFV-Ag)的存在與否。實驗注意事項1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請避光保存。5.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm6.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月注:以上信息僅供參考,具體參考步驟以隨貨說明書為準。上海華壹生物科技有限公司ShanghaiHuaYiBioTechnologyCo.,Ltd網(wǎng)址:http://www.huayi-bio.com電話:021-24209195,13661674336[詳細]
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2018-11-15 10:00
產(chǎn)品樣冊
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