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人狂犬病毒抗原(RV)ELISA試劑盒使用說明書
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本文由 上海滬鼎生物科技有限公司 整理匯編
2018-11-18 10:00 290閱讀次數(shù)
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人狂犬病毒抗原(RV)試劑盒(ELISA)使用說明書l本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中人狂犬病毒抗原(RV)的含量。l有效期:6個月l保存條件:2-8℃l本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷實驗原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被人狂犬病毒抗原(RV)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人狂犬病毒抗原(RV)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。樣本處理及要求1.血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過一夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3.組織勻漿:用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶YZ劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。Z后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。4.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注:標(biāo)本溶血會影響Z后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。標(biāo)本處理1.本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé),不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。2.實驗前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量,如果標(biāo)本濃度過高,應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。3.若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進(jìn)行預(yù)實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。4.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差。5.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。6.某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。7.建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏差。需要而未提供的試劑和器材酶標(biāo)儀(450nm)高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱蒸餾水或去離子水試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標(biāo)板8孔×12條8孔×6條無標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測抗體-HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進(jìn)行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無備注:1.標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:120、60、30、15、7.5、0IU/L2.經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗,標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過Zda標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實驗。注意事項嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。在儲存和溫育時避免強光直接照射。平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。不能使用過期產(chǎn)品。如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。試劑準(zhǔn)備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。實驗結(jié)果計算以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。試劑盒性能1.檢測范圍:3.75IU/L120IU/L。2.靈敏度:Zdi檢測濃度小于0.1IU/L。3.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。4.重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于15%。說明1.由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。2.Z終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實驗操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到**的檢測結(jié)果。問題解答若實驗效果不好,請及時對顯色結(jié)果拍照,保留所用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料:問題可能原因解決方案標(biāo)準(zhǔn)曲線差吸取及洗滌不充分充分的吸取及洗滌移液不極ng確檢查和校正移液器精密度低洗滌不充分按說明書要求充分洗滌和浸泡混勻不充分和吸取試劑不足充分混勻和吸取試劑重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜加樣不極ng確檢查和校正移液器O.D值低每孔加的試劑量不極ng確校正移液器,極ng確加入試劑溫育時間不正確保證充足的溫育時間溫育溫度不正確試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度酶標(biāo)記物或底物失效通過混合酶標(biāo)記物和底物,顏色應(yīng)迅速顯現(xiàn)來檢查沒有加入終止液按照說明書實驗操作步驟加入終止液超出讀數(shù)時間讀數(shù)在說明書推薦的讀數(shù)時間內(nèi)讀數(shù)樣本值不正確的樣本儲存方式正確儲存樣本,使用新鮮樣本進(jìn)行實驗不正確的樣本收集和處理方法采取正確的樣本收集和處理方法待測物質(zhì)在樣本中含量低使用新鮮樣本,重復(fù)實驗
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人狂犬病毒抗原(RV)ELISA試劑盒使用說明書
- 人狂犬病毒抗原(RV)試劑盒(ELISA)使用說明書l本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中人狂犬病毒抗原(RV)的含量。l有效期:6個月l保存條件:2-8℃l本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷實驗原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被人狂犬病毒抗原(RV)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人狂犬病毒抗原(RV)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。樣本處理及要求1.血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過一夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3.組織勻漿:用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶YZ劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。Z后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。4.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注:標(biāo)本溶血會影響Z后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。標(biāo)本處理1.本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé),不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。2.實驗前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量,如果標(biāo)本濃度過高,應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。3.若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中,建議進(jìn)行預(yù)實驗驗證其有效性,并注意留存樣本。4.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差。5.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。6.某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。7.建議使用新鮮樣本,保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏差。需要而未提供的試劑和器材酶標(biāo)儀(450nm)高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱蒸餾水或去離子水試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標(biāo)板8孔×12條8孔×6條無標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無樣本稀釋液6mL3mL無檢測抗體-HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進(jìn)行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無備注:1.標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:120、60、30、15、7.5、0IU/L2.經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗,標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過Zda標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實驗。注意事項嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。在儲存和溫育時避免強光直接照射。平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。不能使用過期產(chǎn)品。如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。試劑準(zhǔn)備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。實驗結(jié)果計算以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。試劑盒性能1.檢測范圍:3.75IU/L120IU/L。2.靈敏度:Zdi檢測濃度小于0.1IU/L。3.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。4.重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于15%。說明1.由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險。2.Z終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會有少許差別,如:檢測限、靈敏度以及顯色時間等,請依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實驗操作,網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實驗說明才會得到**的檢測結(jié)果。問題解答若實驗效果不好,請及時對顯色結(jié)果拍照,保留所用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時您也可以參考以下資料:問題可能原因解決方案標(biāo)準(zhǔn)曲線差吸取及洗滌不充分充分的吸取及洗滌移液不極ng確檢查和校正移液器精密度低洗滌不充分按說明書要求充分洗滌和浸泡混勻不充分和吸取試劑不足充分混勻和吸取試劑重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜加樣不極ng確檢查和校正移液器O.D值低每孔加的試劑量不極ng確校正移液器,極ng確加入試劑溫育時間不正確保證充足的溫育時間溫育溫度不正確試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度酶標(biāo)記物或底物失效通過混合酶標(biāo)記物和底物,顏色應(yīng)迅速顯現(xiàn)來檢查沒有加入終止液按照說明書實驗操作步驟加入終止液超出讀數(shù)時間讀數(shù)在說明書推薦的讀數(shù)時間內(nèi)讀數(shù)樣本值不正確的樣本儲存方式正確儲存樣本,使用新鮮樣本進(jìn)行實驗不正確的樣本收集和處理方法采取正確的樣本收集和處理方法待測物質(zhì)在樣本中含量低使用新鮮樣本,重復(fù)實驗[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
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2015-03-17 00:00
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小鼠狂犬病毒抗體(RV)Elisa試劑盒說明書
- 小鼠狂犬病毒抗體(RV)Elisa試劑盒說明書本試劑盒僅供研究使用。96T使用目的:本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中狂犬病毒抗體(RV-Ab)表達(dá)。實驗原理小鼠狂犬病毒抗體(RV)Elisa試劑盒說明書本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中小鼠狂犬病毒抗體(RV-Ab)表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中狂犬病毒抗體(RV-Ab)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-抗原復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中小鼠狂犬病毒抗體(RV-Ab)的存在與否。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8陽性對照0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9陰性對照0.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié):計算和結(jié)果判定:試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10臨界值(CUTOFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定:樣品OD值<臨界值(CUTOFF)者為狂犬病毒抗體(RV-Ab)陰性陽性判定:樣品OD值≥臨界值(CUTOFF)者為狂犬病毒抗體(RV-Ab)陽性。小鼠狂犬病毒抗體(RV)Elisa試劑盒說明書注意事項1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號組分不得混用。2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。5.底物請避光保存。6.試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測時,參考波長為630nm7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月小鼠狂犬病毒抗體(RV)Elisa試劑盒說明書[詳細(xì)]
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2018-12-06 10:00
產(chǎn)品樣冊
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豬狂犬病毒 (RV) 試劑盒說明書
- 本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷豬(Porcine)狂犬病毒(RV)ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被豬狂犬病毒蛋白IgG抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗原,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中豬狂犬病毒的存在與否。樣品收集、處理及保存方法1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。3.細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。[詳細(xì)]
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2018-09-03 10:00
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人輪狀病毒抗原(RV Ag)ELISA試劑盒
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2014-07-24 00:00
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犬狂犬病毒抗體ELISA試劑盒使用說明書
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2024-09-23 23:20
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- 犬狂犬病毒抗原(RV-Ag)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T5IU/L-125IU/L使用目的:本試劑盒用于測定犬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中狂犬病毒抗原(RV-Ag)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中犬狂犬病毒抗原(RV-Ag)水平。用純化的犬狂犬病毒抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入狂犬病毒抗原(RV-Ag),再與HRP標(biāo)記的狂犬病毒抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的狂犬病毒抗原(RV-Ag)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人狂犬病毒抗原(RV-Ag)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(240IU/L)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。120IU/L5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液60IU/L4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液30IU/L3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液15IU/L2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液7.5IU/L1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié):計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細(xì)]
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2018-11-15 10:03
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