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即用型(兔IgG)SABC免疫組化染色試劑盒 (2)

本文由 上海瓦蘭生物科技有限公司 整理匯編

2018-09-22 10:00 222閱讀次數(shù)

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www.biokanu.com即用型SABC免疫組化染色試劑盒兔IgG使用說(shuō)明書產(chǎn)品編號(hào):QD82102試劑的保存:短期4℃可保存,長(zhǎng)期-20℃。工作原理S-Avidin(鏈霉親和素)是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質(zhì),分子量47000。同親和素一樣,對(duì)生物素分子有極高的親和力,是一般抗原抗體親和力的一百萬(wàn)倍。親和素是一個(gè)堿性蛋白質(zhì)(IP=10),經(jīng)改造后可以轉(zhuǎn)變成中性蛋白質(zhì)。鏈霉親和素等電點(diǎn)接近中性,IP=6.0~6.5,對(duì)組織和細(xì)胞的非特異吸附很低,基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。SABC即StreptAvidinBiotinComplex,。根據(jù)研究,SABC大約可形成上百個(gè)左右的過(guò)氧化物酶和數(shù)十個(gè)左右的鏈霉親和素所構(gòu)成的復(fù)合物。SABC兼具高敏感性,低背景和操作簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)。應(yīng)用范圍適用于免疫組織化學(xué)方法以顯示待測(cè)抗原的分布,本試劑盒適用于常規(guī)石蠟包埋切片、冰凍切片,培養(yǎng)固定的細(xì)胞切片以及新鮮制備的血涂片、爬片等。試劑盒中內(nèi)容山羊血清封閉液:1ml(效價(jià)1:10,臨用前用TBS或PBS稀釋10倍)。用于組織切片的封閉。二抗:1ml(效價(jià)1:10,臨用前用抗體稀釋液稀釋10倍)。親和純化抗體,標(biāo)記長(zhǎng)臂生物素,生物素標(biāo)記抗兔IgG。SABC:1ml(效價(jià)1:10,臨用前用SABC稀釋液稀釋10倍)。鏈酶親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物。用戶自備試劑:粘片劑APES或Poly-L-Lysine。0.01MPBS,0.01M枸櫞酸鹽緩沖液。DAB顯色試劑盒。免疫組化染色程序的選擇:用戶需根據(jù)抗原/抗體的特點(diǎn)確定程序,多數(shù)情況下要先比較各程序染色結(jié)果。石蠟切片染色程序:載玻片防脫片劑處理:可選擇APES或Poly-Lysine。撈片后置烤箱58-60℃30-60分以使切片緊密粘附。切片常規(guī)脫蠟至水。3%H2O21份+蒸餾水10份混合,室溫5-10分鐘以滅活內(nèi)源性酶。蒸餾水洗3次。酶消化程序:滴加復(fù)合消化液5-10分鐘。蒸餾水洗3次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。熱修復(fù)抗原:將切片浸入0.01M枸櫞酸鹽緩沖液(PH6.0),電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5-10分鐘后,反復(fù)1-2次。冷卻后PBS(pH7.2-7.6)洗滌1-2次。滴加封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體,不洗。適當(dāng)稀釋的一抗(兔IgG),37℃2小時(shí)左右或4℃夜。PBS(pH7.2-7.6)洗2分鐘×3次。(一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來(lái)說(shuō),陽(yáng)性染色強(qiáng)度不夠時(shí),可提高一抗?jié)舛群脱娱L(zhǎng)孵育時(shí)間;背景過(guò)高時(shí),可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。)加生物素化抗兔IgG,37℃30分鐘。PBS(pH7.2-7.6)洗2分鐘×3次。滴加試劑SABC,37℃30分鐘。PBS(pH7.2-7.6)洗5分鐘×4次。DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒。取1ml蒸餾水,加試劑盒中A,B,C試劑各50ul,混勻后加至切片。室溫顯色,顯微鏡下觀察顯色反應(yīng),時(shí)間一般在3-30分鐘之間。達(dá)到合適著色強(qiáng)度時(shí)(陽(yáng)性較強(qiáng),背景較低),即可終止反應(yīng)(用蒸餾水洗滌切片)。蘇木素輕度復(fù)染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。注意事項(xiàng):如果染色背景過(guò)高,在SABC反應(yīng)之后,DAB顯色之前,用加有0.010.02%TWEEN20的PBS(pH7.2-7.6)洗滌切片4次,單純PBS洗2次,然后DAB顯色。警告:DAB為可疑致癌物,請(qǐng)采取必要的防范措施。熱修復(fù)抗原可選0.01M枸櫞酸鹽緩沖液(PH6.0);也可以使用PBS、TBS等多種緩沖液。脫蠟不徹底,容易出現(xiàn)非特異性背景染色,建議免疫組化切片脫蠟與常規(guī)H.E脫蠟分開。如果將本試劑盒用于肝臟與腎臟等含內(nèi)源性生物素含量豐富的組織切片,需要進(jìn)行封閉的特殊處理。在超過(guò)有效期的試劑盒中一種或多種試劑活性可能降低,因此不得使用過(guò)期的試劑盒,不同批號(hào)間的試劑盒也不能交叉混用。

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