本文由 上海信裕生物技術(shù)有限公司 整理匯編

2024-09-18 18:09 147閱讀次數(shù)

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  小鼠（Mouse）百日咳IgG（PT-IgG）ELISA檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書檢測(cè)原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被百日咳全菌的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的百日咳IgG呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1.血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。3.細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。5.保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品酶標(biāo)儀（450nm）高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱操作注意事項(xiàng)試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說(shuō)明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，Z終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。嚴(yán)格按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標(biāo)板12孔×8條12孔×4條無(wú)標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無(wú)樣本稀釋液6mL3mL無(wú)檢測(cè)抗體-HRP10mL5mL無(wú)20×洗滌緩沖液25mL15mL按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋底物A6mL3mL無(wú)底物B6mL3mL無(wú)終止液6mL3mL無(wú)封板膜2張2張無(wú)說(shuō)明書1份1份無(wú)自封袋1個(gè)1個(gè)無(wú)注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、75、150、300、600、1200ng/L試劑的準(zhǔn)備20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。洗板方法手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。操作步驟從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。結(jié)果判斷繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。試劑盒性能準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9500。靈敏度：檢測(cè)范圍50-1200ng/L，Zdi檢測(cè)濃度小于5.0ng/L。特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。貯藏：2-8℃，避光防潮保存。有效期：6個(gè)月免責(zé)聲明試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。[詳細(xì)]

  2018-11-18 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 人布魯氏菌抗體IgG(Brucella Ab IgG)檢測(cè)試劑盒

  人布魯氏菌抗體IgG(Brucella Ab IgG)檢測(cè)試劑盒[詳細(xì)]

  2024-09-18 11:04

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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  2024-09-20 22:51

  操作手冊(cè)

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• 豬O型口蹄疫IgG（FMDV-O IgG）試劑盒使用說(shuō)明書

  實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬O型口蹄疫IgG（FMDV-OIgG）表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中O型口蹄疫IgG（FMDV-OIgG）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中豬O型口蹄疫IgG（FMDV-OIgG）的存在與否。豬O型口蹄疫IgG（FMDV-OIgG）試劑盒使用說(shuō)明書試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8陽(yáng)性對(duì)照0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9陰性對(duì)照0.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說(shuō)明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。豬O型口蹄疫IgG（FMDV-OIgG）試劑盒使用說(shuō)明書操作步驟1.編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）2.加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。計(jì)算和結(jié)果判定：試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00;陰性對(duì)照平均值≤0.10臨界值（CUTOFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15陰性判定：樣品OD值<臨界值（CUTOFF）者為豬O型口蹄疫IgG（FMDV-OIgG）陰性陽(yáng)性判定：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為豬O型口蹄疫IgG（FMDV-OIgG）陽(yáng)性。豬O型口蹄疫IgG（FMDV-OIgG）試劑盒使用說(shuō)明書注意事項(xiàng)1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5．底物請(qǐng)避光保存。6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個(gè)月[詳細(xì)]

  2018-09-27 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 人抗副流感病毒IgG抗體(anti-PIV IgG )檢測(cè)試劑盒

  人抗副流感病毒IgG抗體(anti-PIV IgG )檢測(cè)試劑盒[詳細(xì)]

  2024-09-16 05:13

  實(shí)驗(yàn)操作

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• 人流行性乙型腦炎抗體IgG(JE IgG)檢測(cè)試劑盒

  人流行性乙型腦炎抗體IgG(JE IgG)檢測(cè)試劑盒[詳細(xì)]

  2024-09-19 03:55

  實(shí)驗(yàn)操作

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• 人EB病毒IgG(EBv IgG)ELISA試劑盒

  人EB病毒IgG(EBv IgG)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2013-12-06 00:00

  選購(gòu)指南

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• 豬IgG（Brucella IgG）ELISA試劑盒使用說(shuō)明書

  南京森貝伽現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量保證，價(jià)格優(yōu)惠，試劑盒森貝伽。本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于檢測(cè)豬血清，血漿中豬布魯氏菌抗體IgG(BrucellaIgG)水平。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測(cè)定標(biāo)本中豬布魯氏菌抗體IgG(BrucellaIgG)。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中布魯氏菌抗體IgG(BrucellaIgG)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中豬布魯氏菌抗體IgG(BrucellaIgG)的存在與否。試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說(shuō)明書1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存陰性對(duì)照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存陽(yáng)性對(duì)照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟：編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。溫育：操作同3。洗滌：操作同5。顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。結(jié)果判定：試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00;陰性對(duì)照平均值≤0.10臨界值（CUTOFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15陰性判定：樣品OD值<臨界值（CUTOFF）者為人布魯氏菌抗體IgG(BrucellaIgG)陰性陽(yáng)性判定：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為人布魯氏菌抗體IgG(BrucellaIgG)陽(yáng)性注意事項(xiàng)1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5．底物請(qǐng)避光保存。6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個(gè)月[詳細(xì)]

  2018-11-07 14:16

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 人IgG（HSV-2 IgG）ELISA試劑盒使用說(shuō)明書

  本試劑僅供研究使用目的：本試劑盒用于檢測(cè)人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中單純皰疹2病毒抗體IgG(HSV-2IgG)水平。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒采用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測(cè)定標(biāo)本中人單純皰疹2病毒抗體IgG(HSV-2IgG)。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中單純皰疹2病毒抗體IgG(HSV-2IgG)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的流行性出血熱抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中人單純皰疹2病毒抗體IgG(HSV-2IgG)的存在與否。試劑盒組成：試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說(shuō)明書1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存陰性對(duì)照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存陽(yáng)性對(duì)照0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求：1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。3.尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟：編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。溫育：操作同3。洗滌：操作同5。顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。結(jié)果判定：試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00;陰性對(duì)照平均值≤0.10臨界值（CUTOFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15陰性判定：樣品OD值<臨界值（CUTOFF）者為人單純皰疹2病毒抗體IgG(HSV-2IgG)陰性陽(yáng)性判定：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為人單純皰疹2病毒抗體IgG(HSV-2IgG)陽(yáng)性注意事項(xiàng)1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5．底物請(qǐng)避光保存。6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為630nm7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時(shí)必須注意安全。保存條件及有效期1．試劑盒保存：；2-8℃。2．有效期：6個(gè)月[詳細(xì)]

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