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萊克多巴胺(Rac)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)
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本文由 上海瓦蘭生物科技有限公司 整理匯編
2018-09-22 10:00 390閱讀次數(shù)
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www.biokanu.com萊克多巴胺(Rac)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)使用說明書一、概要β興奮劑是一種人和獸醫(yī)作為ZL哮喘的藥物。在牲畜中超劑量使用可以脂肪組織轉(zhuǎn)化為肌肉組織,由于能夠顯著改善脂肪率和生產(chǎn)效率,β興奮劑往往被濫用于畜牧養(yǎng)殖生產(chǎn)中。已經(jīng)有克倫特羅或其他β興奮劑中毒的病例報(bào)道,近來又有一些非法使用萊克多巴胺(Rac)來替代克倫特羅作為飼料添加,并存在濫用現(xiàn)象。通常情況下,HPLC或GC-MS是克倫特羅殘留檢測(cè)的確證方法,但是其前處理步驟繁瑣、費(fèi)用昂貴。酶聯(lián)免疫快速檢測(cè)試劑盒具有成本低廉、操作簡便、一次處理樣本量大等優(yōu)點(diǎn),已成為常規(guī)的初步篩查方法。本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)的新一代藥物殘留檢測(cè)產(chǎn)品,與儀器分析技術(shù)相比具有快速、簡便、準(zhǔn)確和靈敏度高等特點(diǎn),能Zda限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。二、用途定量檢測(cè)動(dòng)物尿液中萊克多巴胺(Rac)的殘留。三、檢測(cè)原理本試劑盒采用競(jìng)爭酶聯(lián)免疫試驗(yàn)。檢測(cè)的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),微孔板預(yù)包被羊抗鼠IgG捕獲抗體,加入鼠抗萊克多巴胺抗體后,會(huì)與捕獲抗體連接。經(jīng)過孵育及洗板后,加入標(biāo)準(zhǔn)品、樣品及萊克多巴胺酶標(biāo)記物(Rac-HRP),游離的萊克多巴胺(Rac)與萊克多巴胺酶標(biāo)記物(Rac-HRP)競(jìng)爭萊克多巴胺抗體結(jié)合位點(diǎn)。經(jīng)過孵育及洗板后,加入底物并孵育。結(jié)合的酶連接物將底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物。加入反應(yīng)終止液后使顏色由藍(lán)轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在450nm處測(cè)量,吸光度值與樣品中的萊克多巴胺濃度成反比,與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得出樣品中萊克多巴胺的含量。四、檢測(cè)限檢測(cè)限:0.05ng/ml(0.05ppb)五、特異叉物交叉率(%)Dobutamine……………………………………5.3Ritodrine………………………………………3.6RactopamineGluc.A…………………………1.0RactopamineGlucB……………………………384(1S,3S)Ractopamine…………………………2.1(1R,3S)-Ractopamine……………………………0.9Isoxsuprine………………………………………0.3Salmeterol…………………………………………0.3Fenoterol…………………………………………0.1Clenbuterol……………………………………<0.01Salbutamol………………………………………<0.01六、試劑盒組成每一個(gè)盒中的試劑足夠進(jìn)行96個(gè)試驗(yàn)(包括標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定),試劑盒中的組份如下:1、96孔酶標(biāo)板1塊(12孔×8條):預(yù)包被羊抗鼠IgG2、標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶(1ml/瓶):0ng/mL、0.1ng/mL、0.3ng/mL、0.9ng/mL、2.7ng/mL、8.1ng/mL3、酶連接物(6mL):辣根過氧化物酶標(biāo)記的萊克多巴胺工作液4、萊克多巴胺抗體(6mL):鼠抗萊克多巴胺單克隆抗體工作液5、底物液A(6mL):過氧化脲6、底物液B(6mL):四甲基聯(lián)苯胺(TMB)7、終止液(6mL):2NH2SO48、濃縮洗滌液(25×)(25mL):含Tween-20的磷酸鹽緩沖液(PBST)9、其他:封板膜3張,自封袋1個(gè),說明書1份七、樣本處理處理任何樣本,必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。取50μL清亮尿樣直接測(cè)定,如尿樣渾濁3000轉(zhuǎn)離心10min,取上層清亮尿液測(cè)定,暫不使用的樣本應(yīng)于-20℃冷凍保存。八、檢測(cè)步驟仔細(xì)的洗滌非常重要。避免在操作過程中微孔出現(xiàn)干燥。1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(20-25℃)平衡30min以上。2、準(zhǔn)備:取出需要數(shù)量的微孔板,將用剩的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。將微孔板條插入微孔架,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做兩個(gè)平行實(shí)驗(yàn),記錄下標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置。3、加抗體:每孔加入100μL稀釋后的抗體溶液,37℃恒溫箱孵育30分鐘。4、洗板:倒出孔中的液體,將微孔架倒置在干凈吸水紙上拍打,以保證完全除去孔中的液體。每孔加滿稀釋后的洗滌工作液,靜置20秒鐘,甩去液體,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次。5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品:加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品或處理好的樣品到各自的微孔中,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做兩個(gè)平行實(shí)驗(yàn),然后加入50μL稀釋后的酶連接物到微孔,小心地充分混合,37℃恒溫箱孵育30分鐘。6、重復(fù)3的操作。7、顯色:每孔先加入底物液A50μL,再加入底物液B50μL,37℃避光孵育15min(如果顯色過淺,可適當(dāng)延長孵育時(shí)間,反之亦然)。8、測(cè)定:每孔加入終止液50μL,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處,測(cè)定每孔OD值。九、結(jié)果判定(1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以1**%,即百分吸光度值(%)=B×1**%B0B標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B00ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ppb)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中萊克多巴胺的實(shí)際濃度。若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來電索?。┦?、注意事項(xiàng)1、嚴(yán)格按照說明書操作時(shí)間,每加一種試劑前需要將其搖勻,各操作步驟緊湊進(jìn)行。2、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20-25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。3、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。4、試劑變質(zhì)的跡象底物有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。5、不要使用過了有效日期的試劑盒;也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。6、在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色20min即可。若顏色較淺,可延長反應(yīng)時(shí)間到25min(或更長),但不得超過30min。反之,則減短反應(yīng)時(shí)間。7、反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。十一、貯存條件及有效期貯存條件:2-8℃、干燥避光防潮。有效期:在正確貯存條件下,有效期為12個(gè)月。
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萊克多巴胺(Rac)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)
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2024-10-07 04:58
應(yīng)用文章
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大鼠多巴胺ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟
- 大鼠多巴胺ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟[詳細(xì)]
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2015-04-21 00:00
操作手冊(cè)
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飼料中沙丁胺醇、萊克多巴胺和鹽酸克侖特羅的測(cè)定
- 本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、濃縮飼料和添加劑預(yù)混合飼料中沙丁胺醇、萊克多巴胺和鹽酸克侖特羅的測(cè)定。
具體詳見瀏覽文件[詳細(xì)]
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2020-04-26 17:54
標(biāo)準(zhǔn)
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人 (Human) 多巴胺 (Dopamine) ELISA 檢測(cè)試劑盒說明書
- 人(Human)多巴胺(Dopamine)ELISA檢測(cè)試劑盒本試劑僅供研究使用標(biāo)本:血清或血漿試驗(yàn)原理:Dopamine試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知Dopamine濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將Dopamine和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Dopamine的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標(biāo)板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品:800nmol/L1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進(jìn)行稀稀空白對(duì)照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素標(biāo)記的抗Dopamine抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進(jìn)行稀釋底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型標(biāo)本稀釋液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型自備材料1.蒸餾水。2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3.振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。2.實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項(xiàng)1.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。3.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6.洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。7.底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。8.加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。9.按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液5、保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準(zhǔn)備1.標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:800nmol/L(6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。400nmol/L(5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液200nmol/L(4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100nmol/L(3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50nmol/L(2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液25nmol/L(1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0nmol/L(空白對(duì)照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。操作步驟1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。2.根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。[詳細(xì)]
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2018-09-14 10:01
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人NFkBp65定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)
- 上海金穗生物科技有限公司專業(yè)銷售各種生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、透析袋。本公司所有產(chǎn)品主要用于科研方面,不用于臨床診斷。歡迎來電洽詢!全國免費(fèi)客服熱線:400-021-1237本公司多年專業(yè)酶免服務(wù),質(zhì)量保證,價(jià)格低,超過5萬家科研單位、10萬家工廠的合作經(jīng)驗(yàn),讓我們的elisa試劑盒、生化試劑更具有競(jìng)爭力。期待您的來電合作![詳細(xì)]
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2018-10-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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大鼠多巴胺(DA)ELISA試劑盒
- 大鼠多巴胺(DA)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2013-12-10 00:00
實(shí)驗(yàn)操作
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人多巴胺(DA)ELISA試劑盒
- 人多巴胺(DA)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-28 00:31
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