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萊克多巴胺(Rac)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)

本文由 上海瓦蘭生物科技有限公司 整理匯編

2018-09-22 10:00 390閱讀次數(shù)

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www.biokanu.com萊克多巴胺(Rac)定量檢測(cè)試劑盒(ELISA)使用說明書一、概要β興奮劑是一種人和獸醫(yī)作為ZL哮喘的藥物。在牲畜中超劑量使用可以脂肪組織轉(zhuǎn)化為肌肉組織,由于能夠顯著改善脂肪率和生產(chǎn)效率,β興奮劑往往被濫用于畜牧養(yǎng)殖生產(chǎn)中。已經(jīng)有克倫特羅或其他β興奮劑中毒的病例報(bào)道,近來又有一些非法使用萊克多巴胺(Rac)來替代克倫特羅作為飼料添加,并存在濫用現(xiàn)象。通常情況下,HPLC或GC-MS是克倫特羅殘留檢測(cè)的確證方法,但是其前處理步驟繁瑣、費(fèi)用昂貴。酶聯(lián)免疫快速檢測(cè)試劑盒具有成本低廉、操作簡便、一次處理樣本量大等優(yōu)點(diǎn),已成為常規(guī)的初步篩查方法。本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)的新一代藥物殘留檢測(cè)產(chǎn)品,與儀器分析技術(shù)相比具有快速、簡便、準(zhǔn)確和靈敏度高等特點(diǎn),能Zda限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。二、用途定量檢測(cè)動(dòng)物尿液中萊克多巴胺(Rac)的殘留。三、檢測(cè)原理本試劑盒采用競(jìng)爭酶聯(lián)免疫試驗(yàn)。檢測(cè)的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),微孔板預(yù)包被羊抗鼠IgG捕獲抗體,加入鼠抗萊克多巴胺抗體后,會(huì)與捕獲抗體連接。經(jīng)過孵育及洗板后,加入標(biāo)準(zhǔn)品、樣品及萊克多巴胺酶標(biāo)記物(Rac-HRP),游離的萊克多巴胺(Rac)與萊克多巴胺酶標(biāo)記物(Rac-HRP)競(jìng)爭萊克多巴胺抗體結(jié)合位點(diǎn)。經(jīng)過孵育及洗板后,加入底物并孵育。結(jié)合的酶連接物將底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物。加入反應(yīng)終止液后使顏色由藍(lán)轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。在450nm處測(cè)量,吸光度值與樣品中的萊克多巴胺濃度成反比,與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得出樣品中萊克多巴胺的含量。四、檢測(cè)限檢測(cè)限:0.05ng/ml(0.05ppb)五、特異叉物交叉率(%)Dobutamine……………………………………5.3Ritodrine………………………………………3.6RactopamineGluc.A…………………………1.0RactopamineGlucB……………………………384(1S,3S)Ractopamine…………………………2.1(1R,3S)-Ractopamine……………………………0.9Isoxsuprine………………………………………0.3Salmeterol…………………………………………0.3Fenoterol…………………………………………0.1Clenbuterol……………………………………<0.01Salbutamol………………………………………<0.01六、試劑盒組成每一個(gè)盒中的試劑足夠進(jìn)行96個(gè)試驗(yàn)(包括標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定),試劑盒中的組份如下:1、96孔酶標(biāo)板1塊(12孔×8條):預(yù)包被羊抗鼠IgG2、標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶(1ml/瓶):0ng/mL、0.1ng/mL、0.3ng/mL、0.9ng/mL、2.7ng/mL、8.1ng/mL3、酶連接物(6mL):辣根過氧化物酶標(biāo)記的萊克多巴胺工作液4、萊克多巴胺抗體(6mL):鼠抗萊克多巴胺單克隆抗體工作液5、底物液A(6mL):過氧化脲6、底物液B(6mL):四甲基聯(lián)苯胺(TMB)7、終止液(6mL):2NH2SO48、濃縮洗滌液(25×)(25mL):含Tween-20的磷酸鹽緩沖液(PBST)9、其他:封板膜3張,自封袋1個(gè),說明書1份七、樣本處理處理任何樣本,必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。取50μL清亮尿樣直接測(cè)定,如尿樣渾濁3000轉(zhuǎn)離心10min,取上層清亮尿液測(cè)定,暫不使用的樣本應(yīng)于-20℃冷凍保存。八、檢測(cè)步驟仔細(xì)的洗滌非常重要。避免在操作過程中微孔出現(xiàn)干燥。1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出,置于室溫(20-25℃)平衡30min以上。2、準(zhǔn)備:取出需要數(shù)量的微孔板,將用剩的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。將微孔板條插入微孔架,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做兩個(gè)平行實(shí)驗(yàn),記錄下標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置。3、加抗體:每孔加入100μL稀釋后的抗體溶液,37℃恒溫箱孵育30分鐘。4、洗板:倒出孔中的液體,將微孔架倒置在干凈吸水紙上拍打,以保證完全除去孔中的液體。每孔加滿稀釋后的洗滌工作液,靜置20秒鐘,甩去液體,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次。5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣品:加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品或處理好的樣品到各自的微孔中,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做兩個(gè)平行實(shí)驗(yàn),然后加入50μL稀釋后的酶連接物到微孔,小心地充分混合,37℃恒溫箱孵育30分鐘。6、重復(fù)3的操作。7、顯色:每孔先加入底物液A50μL,再加入底物液B50μL,37℃避光孵育15min(如果顯色過淺,可適當(dāng)延長孵育時(shí)間,反之亦然)。8、測(cè)定:每孔加入終止液50μL,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處,測(cè)定每孔OD值。九、結(jié)果判定(1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以1**%,即百分吸光度值(%)=B×1**%B0B標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B00ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ppb)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中萊克多巴胺的實(shí)際濃度。若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來電索?。┦?、注意事項(xiàng)1、嚴(yán)格按照說明書操作時(shí)間,每加一種試劑前需要將其搖勻,各操作步驟緊湊進(jìn)行。2、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20-25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。3、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。4、試劑變質(zhì)的跡象底物有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。5、不要使用過了有效日期的試劑盒;也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。6、在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色20min即可。若顏色較淺,可延長反應(yīng)時(shí)間到25min(或更長),但不得超過30min。反之,則減短反應(yīng)時(shí)間。7、反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。十一、貯存條件及有效期貯存條件:2-8℃、干燥避光防潮。有效期:在正確貯存條件下,有效期為12個(gè)月。

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該會(huì)員其他資料
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