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大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)ELISA試劑盒
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2024-09-28 11:47 256閱讀次數(shù)
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大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)ELISA試劑盒
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大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)ELISA試劑盒
- 大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-28 11:47
實驗操作
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大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
- 大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)水平。用純化的大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT),再與HRP標(biāo)記的糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)濃度。大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。1.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。2.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。3.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用4.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。5.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。6.溫育:操作同3。7.洗滌:操作同5。8.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.9.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。10.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總結(jié):計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。1.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。2.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細(xì)]
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2018-09-27 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)檢測試劑盒
- 人糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)檢測試劑盒[詳細(xì)]
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2015-03-10 00:00
操作手冊
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二0一三年酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒人糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)說明書
- 二0一三年人糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)酶聯(lián)免疫ELISA說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)的含量。高品質(zhì)ELISA試劑盒供應(yīng)商,品質(zhì)zhuo越,售后完善。歡迎垂詢,并提供免費(fèi)代檢測服務(wù)。實驗原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)酶免ELISA試劑盒水平。用純化的人糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT),再與HRP標(biāo)記的糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:1350ng/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為900ng/ml,600ng/ml,300ng/ml,150ng/ml,75ng/ml)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項:1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。[詳細(xì)]
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2018-09-14 10:01
產(chǎn)品樣冊
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大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒
- 大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2016-08-03 00:00
實驗操作
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大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒
- 大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-20 21:06
產(chǎn)品樣冊
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大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)檢測試劑盒
- 大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)檢測試劑盒[詳細(xì)]
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2014-09-29 00:00
專利
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大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFRCD71)ELISA試劑盒實驗使用說明書
- 大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFRCD71)ELISA試劑盒實驗使用說明書本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創(chuàng)美好的未來。本生試劑盒[詳細(xì)]
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2023-11-24 13:15
應(yīng)用文章
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大鼠己糖激酶(HK)ELISA試劑盒
- 大鼠己糖激酶(HK)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-10-10 16:31
操作手冊
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大鼠己糖激酶(HK)ELISA試劑盒
- 大鼠己糖激酶(HK)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-29 11:08
產(chǎn)品樣冊
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大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)檢測試劑盒
- 大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)檢測試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-20 03:55
報價單
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大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)檢測試劑盒
- 大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)檢測試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-29 04:17
期刊論文
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豬轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒
- 豬轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2015-05-18 00:00
報價單
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豬轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒
- 豬轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2015-05-05 00:00
應(yīng)用文章
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豬轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒
- 電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com豬轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗豬TFR單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的TFR與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗豬TFR,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,TFR濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中TFR濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):4000ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清可能需要稀釋,請先做預(yù)實驗,以確定稀釋倍數(shù)。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成4000ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入4000ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品400、200、100、50、25、12.5、6.25、0ng/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)TFR含量,再乘上稀釋倍數(shù)。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的TFR檢測濃度小于3ng/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的豬TFR。不與豬其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。注意事項1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測樣品均建議做復(fù)孔,每次測定應(yīng)同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:00
產(chǎn)品樣冊
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轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)ELISA試劑盒分析說明
- 轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)ELISA試劑盒分析說明說明該試劑盒以HRP標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物(HRPStreptavidinConjugate,HRP-SA)為基礎(chǔ),可用于檢測血液,細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性CD40抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所用的CD40一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后,用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合,Z后加入HRP-SA,形成抗原特異一抗生物素化二抗HRP-SA復(fù)合物,顯微鏡下觀察成像。試劑盒所含試劑:試劑A通透液:0.1%Triton-X10010mL(選用)試劑B封閉緩沖液(封閉用)20mL試劑C(原裝進(jìn)口分裝)已稀釋的即用型CD40一抗(2.5ml)試劑D(原裝進(jìn)口分裝)生物素化羊抗兔IgG1支(濃度1.5mg/mL,稀釋比為1:300~1:500)50μL+抗體稀釋液20ml試劑EHRP-SA復(fù)合物1支(濃度1μM,稀釋比1:50~1:200)100μL試劑FDAB顯色液5ml用戶自備試劑:1.10mMTBS(pH7.2~7.4)三羥基氨基甲烷1.21g加蒸餾水800mL,濃鹽酸調(diào)pH值至7.2~7.4,Z后定容至1000mLTBS-T:TBS+Tween20(0.05%體積比)2.抗原修復(fù)液(依檢測抗原不同而選擇不同的修復(fù)液)10mMpH6.0檸檬酸緩沖檸檬酸0.38g檸檬酸三鈉2.45g加蒸餾水900mL,濃鹽酸調(diào)pH值至6.0,Z后定容至1000mL或:0.5MEDTA修復(fù)液(pH8.0)EDTA2H2O186.1g蒸餾水700mL,用10mMNaOH調(diào)pH值至8.0,Z后定容至1000Ml3.緩沖甘油封固劑10mL4.Tween205mL石蠟包埋組織切片免疫染色實驗步驟(建議方案):石蠟包埋組織切片3~4μm厚度1.烤片:將待做切片置于切片架上,于60℃恒溫烤箱中至少烤1hr;2.脫蠟:切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10min;3.水化:切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇5min,95%乙醇2次(每次2min),85%乙醇2mi75乙醇2min,自來水沖洗,ddH2O洗2×2min;4.抗原修復(fù):根據(jù)抗體說明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫度達(dá)到98~100℃)或消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O洗2×2min,TBS洗滌(2×2min)(具體修法見附1)*注:有些抗原勿需修復(fù),直接進(jìn)入第5步封閉。5.封閉:滴加試劑B,37℃濕盒孵育30min;6.加一抗:滴加用試劑C(即用型一抗),37℃濕盒孵育2hr;7.洗滌:TBS-T洗滌(3×5min);8.封閉:滴加試劑B,37℃濕盒孵育10min;9.加二抗:滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑D),37℃濕盒中孵育30min;10.洗滌:TBS-T洗滌(3×5min);11.封閉:滴加試劑Tween20,37℃濕盒孵育封閉20min;12.加HRP-SA:滴加用試劑C稀釋的試劑E(1:50~200,終濃度5~20nM),37℃濕盒中孵育30min;13.洗滌:TBS-T洗滌(3×5min),TBS洗滌(2×5min);14.顯色:應(yīng)用DAB溶液(試劑F)顯色;15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;16.封片:待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片17.觀察成像:顯微鏡下觀察成像。注意事項:1.修復(fù)后緩沖液須自然冷卻,自來水沖洗后方能把切片取出,驟冷有可能導(dǎo)致結(jié)晶或抗原封閉。2.緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到,用過的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使用。3.若試劑為微量濃縮液,用前應(yīng)低速離心,將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。4.封片前一定要換用TBS充分洗滌,以便洗去組織上殘留的Tween20,否則會影響結(jié)果觀察。5.如須復(fù)染細(xì)胞核,則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進(jìn)行封片。附1:抗原修法常用抗原修復(fù)液:檸檬酸緩沖液(0.01MpH6.0)、EDTA抗原修復(fù)液(pH8.0或9.0)等等。一、酶消化修復(fù)法酶消化修復(fù)切片脫蠟水化處理,TBS沖洗,在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育20~30min后TBS沖洗即可。二、微波抗原修復(fù)法微波盒中加入抗原修復(fù)液微波加熱至沸騰,將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,中檔或繼續(xù)微波10~15min,取出微波盒冷卻至室溫后,自來水沖洗,取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異,須自行調(diào)整。三、直接高壓抗原修復(fù)法取修復(fù)液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰,將組織切片置于耐高溫切片架上,修復(fù)液沸騰后放入切片架,蓋上鍋蓋,待噴氣后計時1.5~2.5min即可脫離熱源,自然冷卻至室溫后自來水沖洗,取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復(fù)。四、隔水式高壓抗原修復(fù)法不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰,微波盒中加入修復(fù)液于微波爐中加熱至沸騰,將切片放入微波盒中,再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋,待噴氣后計時4~8min即可關(guān)閉熱源,自然冷卻至室溫后自來水沖洗,取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復(fù)。[詳細(xì)]
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2024-09-28 13:11
產(chǎn)品樣冊
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人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)ELISA試劑盒
- 人微量轉(zhuǎn)鐵蛋白(MTF)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-29 12:47
操作手冊
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5-3 Beacon記憶缺失性貝毒檢測試劑盒說明書
- 記憶缺失性貝類毒素(軟骨藻酸)檢測試劑盒適用Beacon記憶缺失性貝類毒素檢測試劑盒是利用酶聯(lián)免疫吸附測定法用于食品中記憶缺失性貝類毒素的定量測定。檢測原理酶聯(lián)免疫吸附測定法定量測定記憶缺失性貝類毒素殘留。利用萃取液通過均質(zhì)及振蕩的方式提取樣品中的記憶缺失性貝類毒素,再用緩沖液稀釋,然后進(jìn)行免疫測定。先將標(biāo)準(zhǔn)及樣品加入到微孔中,再加入酶標(biāo)記物進(jìn)行反應(yīng)。孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒有結(jié)合的分子。每孔中加入清澈的底物溶液,結(jié)合的酶標(biāo)記物將無色的底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的物質(zhì)。孵育30分鐘后停止此反應(yīng),根據(jù)各孔顏色深淺進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的顏色得出樣品的濃度值。特異性Beacon記憶缺失性貝類毒素檢測試劑盒能檢測軟骨藻酸及其相似物,它們的結(jié)合程度是不同,以下表格中展示的是相關(guān)值及交叉反映率(%CR),以下所有濃度均為ppb級。與麻痹性、腹瀉性、神經(jīng)性貝類毒素等貝毒均無交叉反應(yīng)。[詳細(xì)]
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2018-12-15 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠D-木糖(D-xylose) ELISA檢測試劑盒說明書
- 檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被D-木糖(D-xylose)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的D-木糖(D-xylose)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。3.細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。[詳細(xì)]
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2018-09-03 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠己酮糖激酶(KHK)ELISA試劑盒使用說明書
- 南京森貝伽現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量保證,價格優(yōu)惠,試劑盒森貝伽。本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中己酮糖激酶(KHK)的活性。實驗原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠己酮糖激酶(KHK)水平。用純化的大鼠己酮糖激酶(KHK)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入己酮糖激酶(KHK),再與HRP標(biāo)記的己酮糖激酶(KHK)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的己酮糖激酶(KHK)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠己酮糖激酶(KHK)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:450ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為300ng/L,200ng/L,100ng/L,50ng/L,25ng/L)。加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項:試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。計算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%檢測范圍:12ng/L-400ng/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細(xì)]
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2018-11-07 14:16
產(chǎn)品樣冊
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