本文由 上海哈靈生物科技有限公司 整理匯編

2015-08-31 00:00 497閱讀次數(shù)

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• 人核因子_b-p65(NF_b-p65)說明書

  人核因子_b-p65(NF_b-p65)說明書[詳細(xì)]

  2015-08-31 00:00

  期刊論文

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• 人核因子b-p65(NF?b-p65)說明書

  人核因子b-p65(NF?b-p65)說明書[詳細(xì)]

  2024-09-11 17:48

  實(shí)驗(yàn)操作

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• 人核轉(zhuǎn)錄因子（NF-）ELISA試劑盒說明書

  電話：021-6533363955229872網(wǎng)址：http://www.westang.com人核轉(zhuǎn)錄因子（NF-kB）ELISA試劑盒原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人NF-kB單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的NF-kB與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人NF-kB，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，Z后加終止液硫酸，在450nm處測(cè)OD值，NF-kB濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中NF-kB濃度。試劑盒組成（2-8℃保存）酶標(biāo)板（CoatedWells）96孔酶標(biāo)抗體工作液（EnzymeConjugate）12ml10×標(biāo)本稀釋液（SampleBuffer）12ml20×濃縮洗滌液（WashBuffer）50ml標(biāo)準(zhǔn)品（Standards）：10ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗體工作液（BiotinylatedAntibody）12ml終止液（StopSolution）12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml蒸餾水混勻，配成20ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管，**管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入20ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。4.洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）標(biāo)本激活方法1.將450ul標(biāo)本稀釋液加入到一支1.5ml進(jìn)口聚丙烯管中,再加10ul血清或血漿標(biāo)本。2.加20ul1NHCI,蓋緊，上下混勻。2－8℃放置60±2分鐘。3.加20ul1NNaOH,蓋緊，上下混勻。4.即用，或放-20/-70℃保存3天。計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以稀釋倍數(shù)50。（注意：不同的標(biāo)本NF-kB的水平可能有較大差異，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握稀釋度）5.細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿10倍稀釋（410ul的標(biāo)本稀釋液＋50ul樣本＋20ul的1NHCI+20ul的1NNaOH）。檢測(cè)程序1.加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品（已激活）100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板：同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)NF-kB含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度：Z小的NF-kB檢測(cè)濃度小于15pg/ml。2.特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人NF-kB。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9％。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！[詳細(xì)]

  2018-09-13 10:01

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 人核因子κB(NF-κB)ELISA Kit說明書

  人核因子κB(NF-κB)ELISA Kit說明書[詳細(xì)]

  2014-08-21 00:00

  實(shí)驗(yàn)操作

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• 人核轉(zhuǎn)錄因子p65（NF-p65）ELISA試劑盒說明書

  電話：021-6533363955229872網(wǎng)址：http://www.westang.com人核轉(zhuǎn)錄因子p65（NF-kBp65）ELISA試劑盒原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人NF-kBp65單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的NF-kBp65與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人NF-kBp65，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，Z后加終止液硫酸，在450nm處測(cè)OD值，NF-kBp65濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中NF-kBp65濃度。試劑盒組成（2-8℃保存）酶標(biāo)板（CoatedWells）96孔酶標(biāo)抗體工作液（EnzymeConjugate）12ml10×標(biāo)本稀釋液（SampleBuffer）12ml20×濃縮洗滌液（WashBuffer）50ml標(biāo)準(zhǔn)品（Standards）：10ng/瓶2瓶底物工作液（TMBSolution）12ml**抗體工作液（BiotinylatedAntibody）12ml終止液（StopSolution）12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml蒸餾水混勻，配成20ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管，**管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入20ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。4.洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）標(biāo)本激活方法1.將450ul標(biāo)本稀釋液加入到一支1.5ml進(jìn)口聚丙烯管中,再加10ul血清或血漿標(biāo)本。2.加20ul1NHCI,蓋緊，上下混勻。2－8℃放置60±2分鐘。3.加20ul1NNaOH,蓋緊，上下混勻。4.即用，或放-20/-70℃保存3天。計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以稀釋倍數(shù)50。（注意：不同的標(biāo)本NF-kBp65的水平可能有較大差異，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握稀釋度）5.細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿10倍稀釋（410ul的標(biāo)本稀釋液＋50ul樣本＋20ul的1NHCI+20ul的1NNaOH）。檢測(cè)程序1.加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品（已激活）100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板：同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板：同前。7.每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0pg/ml為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)NF-kBp65含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度：Z小的NF-kBp65檢測(cè)濃度小于15pg/ml。2.特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人NF-kBp65。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于8.9％。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！[詳細(xì)]

  2018-09-13 10:01

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 人核因子κB（NF-κB）elisa試劑盒

  人核因子κB（NF-κB）elisa試劑盒[詳細(xì)]

  2014-07-08 00:00

  期刊論文

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• 人核轉(zhuǎn)錄因子（NF-kB）試劑盒產(chǎn)品供應(yīng)

  人核轉(zhuǎn)錄因子（NF-kB）試劑盒產(chǎn)品供應(yīng)[詳細(xì)]

  2015-04-23 00:00

  報(bào)價(jià)單

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• 人核因子kb受體活化因子配基酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

  檢測(cè)范圍：96T30pmol/L-1000pmol/L使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中核因子kb受體活化因子配基（RANKL）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人核因子kb受體活化因子配基（RANKL）水平。用純化的人核因子kb受體活化因子配基（RANKL）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入核因子kb受體活化因子配基（RANKL），再與HRP標(biāo)記的核因子kb受體活化因子配基（RANKL）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核因子kb受體活化因子配基（RANKL）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人核因子kb受體活化因子配基（RANKL）濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（2000pmol/L）0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)[詳細(xì)]

  2018-10-03 10:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 人抗核周因子抗體(APF)ELISA試劑盒

  人抗核周因子抗體(APF)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2013-12-06 00:00

  實(shí)驗(yàn)操作

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• 人抗核周因子抗體(APF)ELISA試劑盒

  人抗核周因子抗體(APF)ELISA試劑盒[詳細(xì)]

  2013-12-05 00:00

  報(bào)價(jià)單

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• 人抗核周因子抗體(APF)檢測(cè)試劑盒

  人抗核周因子抗體(APF)檢測(cè)試劑盒[詳細(xì)]

  2015-03-12 00:00

  選購(gòu)指南

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• 人核因子κB(NF-κB)ELISA Kit文獻(xiàn)

  人核因子κB(NF-κB)ELISA Kit文獻(xiàn)[詳細(xì)]

  2014-08-21 00:00

  應(yīng)用文章

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• 人核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)ELISA Kit說明書

  人核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)ELISA Kit說明書[詳細(xì)]

  2014-08-21 00:00

  其它

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• 核因子kBElisa試劑盒操作步驟

  核因子kBElisa試劑盒操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1500ng/L，1000ng/L，500ng/L，250ng/L，125ng/L）。2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm核因子kBElisa試劑盒操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1500ng/L，1000ng/L，500ng/L，250ng/L，125ng/L）。2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品Z終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm核因子kBElisa試劑盒操作步驟[詳細(xì)]

  2018-10-23 10:30

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 大鼠核因子kb受體活化因子配體試劑盒使用說明書

  大鼠核因子kb受體活化因子配體試劑盒使用說明書[詳細(xì)]

  2015-04-08 00:00

  產(chǎn)品樣冊(cè)

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• 犬核因子?b （NF?b）酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書

  犬核因子?b （NF?b）酶聯(lián)免疫分析試劑盒說明書[詳細(xì)]

  2015-03-11 00:00

  其它

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• NF-κB,原裝豬核因子κBELISA試劑盒使用說明書

  NF-κB,原裝豬核因子κBELISA試劑盒使用說明書l本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中豬核因子κB（NF-κB）的含量。l有效期：6個(gè)月l保存條件：2-8℃l本試劑盒僅供體外研究使用，不用于臨床診斷實(shí)驗(yàn)原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被豬核因子κB（NF-κB）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的豬核因子κB（NF-κB）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。樣本處理及要求1.血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過一夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶YZ劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。Z后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。4.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注：標(biāo)本溶血會(huì)影響Z后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。標(biāo)本處理1.本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。2.實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)標(biāo)本含量，如果標(biāo)本濃度過高，應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋，使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。3.若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性，并注意留存樣本。4.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。5.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等，所以可能存在檢測(cè)不出的情況。6.某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測(cè)出。7.建議使用新鮮樣本，保存時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。需要而未提供的試劑和器材酶標(biāo)儀（450nm）高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱蒸餾水或去離子水試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標(biāo)板8孔×12條8孔×6條無(wú)標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無(wú)樣本稀釋液6mL3mL無(wú)檢測(cè)抗體-HRP10mL5mL無(wú)20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進(jìn)行稀釋底物A6mL3mL無(wú)底物B6mL3mL無(wú)終止液6mL3mL無(wú)封板膜2張2張無(wú)說明書1份1份無(wú)自封袋1個(gè)1個(gè)無(wú)備注：1.標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：1200、600、300、150、75、0pg/mL2.經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn)，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過Zda標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí)，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。注意事項(xiàng)嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。不能使用過期產(chǎn)品。如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。試劑準(zhǔn)備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計(jì)算出樣品的濃度。試劑盒性能1.檢測(cè)范圍：37.5pg/mL1200pg/mL。2.靈敏度：Zdi檢測(cè)濃度小于1.0pg/mL。3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。4.重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10%，板間變異系數(shù)小于15%。說明1.由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析，本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。2.Z終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān)，請(qǐng)務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別，如：檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等，請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，網(wǎng)站電子版說明書僅作參考。4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測(cè)效果，不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說明才會(huì)得到**的檢測(cè)結(jié)果。問題解答若實(shí)驗(yàn)效果不好，請(qǐng)及時(shí)對(duì)顯色結(jié)果拍照，保留所用板條及未使用試劑，并妥善保存，然后聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。同時(shí)您也可以參考以下資料：?jiǎn)栴}可能原因解決方案標(biāo)準(zhǔn)曲線差吸取及洗滌不充分充分的吸取及洗滌移液不極ng確檢查和校正移液器精密度低洗滌不充分按說明書要求充分洗滌和浸泡混勻不充分和吸取試劑不足充分混勻和吸取試劑重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的容器和覆膜加樣不極ng確檢查和校正移液器O.D值低每孔加的試劑量不極ng確校正移液器，極ng確加入試劑溫育時(shí)間不正確保證充足的溫育時(shí)間溫育溫度不正確試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度酶標(biāo)記物或底物失效通過混合酶標(biāo)記物和底物，顏色應(yīng)迅速顯現(xiàn)來(lái)檢查沒有加入終止液按照說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟加入終止液超出讀數(shù)時(shí)間讀數(shù)在說明書推薦的讀數(shù)時(shí)間內(nèi)讀數(shù)樣本值不正確的樣本儲(chǔ)存方式正確儲(chǔ)存樣本，使用新鮮樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)不正確的樣本收集和處理方法采取正確的樣本收集和處理方法待測(cè)物質(zhì)在樣本中含量低使用新鮮樣本，重復(fù)實(shí)驗(yàn)[詳細(xì)]

  2018-11-16 10:02

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