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人5-羥色胺受體elisa試劑盒使用方法
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本文由 上海易利生物科技有限公司 整理匯編
2018-10-01 10:00 303閱讀次數(shù)
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本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T20ng/L-500ng/L使用目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中5-羥色胺受體(5-HTR)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人5-羥色胺受體(5-HTR)水平。用純化的人5-羥色胺受體(5-HTR)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入5-羥色胺受體(5-HTR),再與HRP標(biāo)記的5-羥色胺受體(5-HTR)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的5-羥色胺受體(5-HTR)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人5-羥色胺受體(5-HTR)濃度。
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人5-羥色胺受體elisa試劑盒使用方法
- 本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T20ng/L-500ng/L使用目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中5-羥色胺受體(5-HTR)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人5-羥色胺受體(5-HTR)水平。用純化的人5-羥色胺受體(5-HTR)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入5-羥色胺受體(5-HTR),再與HRP標(biāo)記的5-羥色胺受體(5-HTR)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的5-羥色胺受體(5-HTR)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人5-羥色胺受體(5-HTR)濃度。[詳細(xì)]
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2018-10-01 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白elisa試劑盒使用方法
- 本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T11pg/ml-400pg/ml使用目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(5-HTT)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(5-HTT)水平。用純化的人5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(5-HTT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(5-HTT),再與HRP標(biāo)記的5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(5-HTT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(5-HTT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(5-HTT)濃度。[詳細(xì)]
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2018-12-30 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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大鼠5-羥色胺受體2C(HTR2C)ELISA試劑盒
- 大鼠5-羥色胺受體2C(HTR2C)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2016-08-01 00:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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5-羥色胺受體1A抗體
- 產(chǎn)品中文名稱:5-羥色胺受體1A抗體英文名稱:Anti-5-HTR1A(5-HT1A(5-hydroxytryptamine/serotoninreceptor1A;5HT1a;ADRBRL1;ADRB2RL1;HTR1A)產(chǎn)品規(guī)格:100ug,200ug產(chǎn)品濃度:1mg/ml產(chǎn)品價(jià)格:電詢,021-62217165,18717813312產(chǎn)品類型:一抗抗體抗體來源:Mouse,Rabbit克隆類型:Monoclonal,Polyclonal交叉反應(yīng):Mouse,Rat,Human等等。(更多交叉反應(yīng)種屬,電詢。)性狀:LyophilizedorLiquid純化方法:AffinitypurifiedbyProteinA產(chǎn)品應(yīng)用:IP=1:20-100,ELISA=1:1000-5000,WB=1:100-1000,IHC-Fr=1:100-500IHC-P=1:100-500,ICC/IF=1:100-500(具體應(yīng)用方法,電詢。)保存:-20°5-羥色胺受體1A抗體抗體的溶解方法:1:用移液器加0.1ml雙蒸水到試管內(nèi),混勻,-20℃保存。若為其它規(guī)格(如:0.2ml)的凍干粉抗體,則加與標(biāo)簽上規(guī)格一致的(如:0.2ml)雙蒸水溶解,混勻,-20℃保存。2:用移液器加0.05ml(規(guī)格的50%)雙蒸水到試管內(nèi),再加0.05ml(規(guī)格的50%)的甘油到試管內(nèi),混勻,-20℃保存;若為其它規(guī)格(如:0.2ml)的凍干粉抗體,則加標(biāo)簽上規(guī)格的50%(如:0.1ml)雙蒸水,再加標(biāo)簽上規(guī)格的50%(如:0.1ml)甘油溶解,混勻,-20℃保存??贵w的溶解要求:抗體溶解后,將其分裝成5-10支(以0.1ml抗體為例,20ulx5支或10ulx10支),-20℃保存,用一支取一支,避免反復(fù)凍溶。另:預(yù)試驗(yàn)可做幾個(gè)梯度1:100、1:200、1:400稀釋,如果背景高,還可再稀釋,選一個(gè)**的稀釋比例,再正式做,效果**。5-羥色胺受體1A抗體QuantitySize:100ug(1mg/ml,Constituents:0.01MPBS,pH7.4with10mg/mlBSAand0.1%Sodiumazide.Reconstitutewith0.1mlsteriledistilledwater.)Productname:Anti-5-HTR1AantibodyDescription:Rabbitpolyclonalto5-HTR1ATestedapplications:IP,ELISA,WB,IHC-Fr,IHC-P,ICC/IFSpeficity:RabbitpolyclonalIgG,affinitypurifiedbyProteinA.Reactswith:Mouse,Rat,Chicken,Humanandsoon.Predictedmolecularweight:Application:IP=1:20-100,ELISA=1:1000-5000WB=1:100-1000,IHC-Fr=1:100-500IHC-P=1:100-500,ICC/IF=1:100-500notyettestedinotherapplications.optimaldilutions/concentrations首ldbedeterminedbytheenduser.Storage:Storeat-20°Cforoneyear.Avoidrepeatedfreeze/thawcycles.Thelyophilizedantibodyisstableatroomtemperatureforatleastonemonthandforgreaterthanayearwhenkeptat-20°C.WhenreconstitutedinsterilepH7.40.01MPBSordiluentofantibodytheantibodyisstableforatleasttwoweeksat2-4°C.ImportantNote:Thisproductassuppliedisintendedforresearchuseonly,notforuseinhuman,therapeuticordiagnosticapplications.[詳細(xì)]
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2018-10-19 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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5-羥色胺
- 5-羥色胺[詳細(xì)]
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2024-10-08 05:22
報(bào)價(jià)單
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人gp2b3a受體elisa試劑盒使用方法
- 本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T0.3pg/ml-15pg/ml使用目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中g(shù)p2b3a受體含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人gp2b3a受體水平。用純化的人gp2b3a受體抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入gp2b3a受體,再與HRP標(biāo)記的gp2b3a受體抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的gp2b3a受體呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人gp2b3a受體濃度。[詳細(xì)]
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2018-10-01 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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小鼠5-羥色胺(5-HT)ELISA檢測(cè)試劑盒說明書
- 小鼠5-羥色胺(5-HT)ELISA檢測(cè)試劑盒說明書[詳細(xì)]
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2015-05-20 00:00
其它
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小鼠5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白(SERT)ELISA試劑盒
- 小鼠5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白(SERT)ELISA試劑盒檢測(cè)范圍:96T3.5ng/L-160ng/L使用目的:本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白(SERT)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中小鼠5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白(SERT)水平。用純化的小鼠5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白(SERT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白(SERT),再與HRP標(biāo)記的5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白(SERT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白(SERT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中小鼠5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白(SERT)濃度。標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-12-06 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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河蟹5-羥色胺(5-HT)elisa檢測(cè)試劑盒說明書
- 實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中河蟹5-羥色胺(5-HT)水平。用純化的河蟹5-羥色胺(5-HT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入5-羥色胺(5-HT),再與HRP標(biāo)記的5-羥色胺(5-HT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的5-羥色胺(5-HT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中河蟹5-羥色胺(5-HT)濃度。河蟹5-羥色胺(5-HT)elisa檢測(cè)試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(640pg/ml)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。河蟹5-羥色胺(5-HT)elisa檢測(cè)試劑盒操作步驟標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。320pg/ml5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液160pg/ml4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液80pg/ml3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液40pg/ml2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20pg/ml1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié):計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。河蟹5-羥色胺(5-HT)elisa檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2024-09-29 06:43
產(chǎn)品樣冊(cè)
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5-羥色胺ELISA Kit使用說明書
- Normal07.8磅02falsefalsefalseMicrosoftInternetExplorer45-羥色胺ELISAKit使用說明書(德國(guó)IBL:RE59121)1、應(yīng)用范圍此試劑盒可用于人血清、血漿、血小板和尿液中五羥色胺的體外定量檢測(cè)。進(jìn)一步的研究表明:此試劑盒還可用于組織勻漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液的研究。2、前言說明五羥色胺是色氨酸代謝的中間產(chǎn)物,它主要存在于腸嗜鉻細(xì)胞、血清素激活的神經(jīng)元和血小板中,它已被確定為是神經(jīng)系統(tǒng)的一種神經(jīng)遞質(zhì)。循環(huán)血液中的五羥色胺幾乎都集中于血小板內(nèi)。循環(huán)五羥色胺濃度的變化可反映出人體的一些病理變化,這些病理變化包括:慢性肌緊張性頭痛、精神分裂癥、高血壓、舞蹈癥、杜氏肌肉萎縮癥和早期急性闌尾炎。血清五羥色胺的檢測(cè)對(duì)類癌綜合征的檢測(cè)具有重要臨床意義。人們預(yù)計(jì):在不久的將來,人們對(duì)血小板內(nèi)五羥色胺的研究興趣(包括五羥胺的吸收及釋放動(dòng)力學(xué)研究)應(yīng)該會(huì)不斷增長(zhǎng)。3、實(shí)驗(yàn)原理樣品準(zhǔn)備(將五羥色胺轉(zhuǎn)變?yōu)镹-乙酰五羥色胺)是樣品的稀釋的一部分,將每一份樣品分別于?;噭┮黄饻赜涂梢缘玫锦;奈辶u色胺。此實(shí)驗(yàn)采用的是競(jìng)爭(zhēng)性ELISA的原理,生物素標(biāo)記的和非生物素標(biāo)記的抗原競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合到一定數(shù)量的抗體結(jié)合位點(diǎn)上。Z后,結(jié)合到抗體上的生物素標(biāo)記抗原的量于樣品中被分析物的濃度成反比。當(dāng)反應(yīng)系統(tǒng)達(dá)到平衡后,洗板除去未結(jié)合的生物素標(biāo)記抗原,用抗生物素堿性磷酸酶做標(biāo)記、對(duì)硝基苯磷酸做底物來檢測(cè)結(jié)合到抗體上的生物素標(biāo)記抗原的量。用已知標(biāo)準(zhǔn)品做一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,將未知樣品的酶活性在標(biāo)準(zhǔn)曲線上進(jìn)行定標(biāo)就可以得到未知樣品中五羥色胺的濃度。4、貯存與穩(wěn)定性試劑盒和運(yùn)輸環(huán)境和儲(chǔ)存環(huán)境溫度為2-8℃,避免熱源或太陽直射。樣品的儲(chǔ)存與穩(wěn)定性及試劑的準(zhǔn)備將在相關(guān)章節(jié)中闡述。打開了的試劑盒在有效期內(nèi)穩(wěn)定,前提是要將試劑盒用袋子密封并儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下。5、樣品的采集與儲(chǔ)存注意有些食物會(huì)含有一定量的五羥色胺,另外,有些藥物也會(huì)刺激五羥色胺的釋放,從而導(dǎo)致五羥色胺的濃度升高。病人應(yīng)當(dāng)禁食富含五羥色胺的食物,如:阿司匹林、促腎上腺皮質(zhì)激素、MAOYZ劑、phenazetin、兒茶酚氨、利血平和煙堿。血清注意靜脈穿刺采集全血的常規(guī)注意事項(xiàng)。從采集到血液樣品的那一刻起到檢測(cè)時(shí)都應(yīng)保持血液樣品的化學(xué)整體性。不要使用明顯溶血、黃疸血和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁,則在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)當(dāng)離心以除去所有的微粒物質(zhì)。貯存18-25℃2-8℃≤-20℃避免熱源或太陽直射,避免反復(fù)凍融,冷凍狀態(tài)下運(yùn)輸樣品。穩(wěn)定性2小時(shí)6小時(shí)3個(gè)月尿液可以是自然尿液也可使用24h尿液。收集病人24h內(nèi)的所有尿液,之后將其加入到10-15ml6N的HCl防腐劑中。確定用于結(jié)果結(jié)算的總體積。使用前請(qǐng)將所有樣品混合并離心。貯存≤-20℃避免熱源或太陽直射,避免反復(fù)凍融。穩(wěn)定性6個(gè)月血漿、血小板98%以上的循環(huán)五羥色胺都位于血小板內(nèi),在血液凝集時(shí)就可以釋放出來。用靜脈穿刺的方法將全血收集到含EDTA或檸檬酸的塑料試管中(如10mlMonovetteNC試管中加入1ml檸檬酸溶液)。室溫下,將全血樣品以200×g的速率離心10分鐘得到富含血小板的血漿(PRP)。將PRP-上清轉(zhuǎn)移到另一試管中。為了獲得血小板乳糜微粒,我們將200ulPRP(350000~500000個(gè)血小板/ul)加入到800ul生理鹽水中,之后4℃下以4500×g的速率離心10分鐘(或4℃下10000×g的速率離心2分鐘)。離心后棄取上清。在血小板乳糜微粒中加入200ul雙蒸水,之后樣品就可以在-20℃以下的環(huán)境下凍存數(shù)周了。將凍融的樣品在室溫下以1000×g的速率離心2分鐘。整個(gè)實(shí)驗(yàn)需要使用20ul上清液(見?;H绻霚y(cè)無血小板血漿(PFP)中五羥色胺的濃度,我們可以將PRP在4℃以4500×g的速率離心10分鐘(或4℃下10000×g的速率離心2分鐘)就可以獲得無血小板血漿(PFP)。游離五羥色胺的ELISA實(shí)驗(yàn)要使用50ul上清液(見?;?。注意:PRP中五羥色胺的直接檢測(cè)實(shí)驗(yàn)表明:大約10%的PRP樣品可以檢測(cè)到不可預(yù)知的高濃度五羥色胺(結(jié)果用GX液相層析和流氏細(xì)胞術(shù)獲得)。為了避免這種差異性,我們建議您即檢測(cè)血小板中五羥色胺,也檢測(cè)無血小板血漿中的五羥色胺。無血小板血漿血小板微粒(從血漿中分離得到)避免熱源或太陽直射,避免反復(fù)凍融,冷凍狀態(tài)下運(yùn)輸樣品。儲(chǔ)存≤-20℃≤-20℃≤-80℃穩(wěn)定性2周4周1年組織勻漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清使用組織勻漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清作樣品,一般無特殊注意事項(xiàng)注意:細(xì)胞培養(yǎng)基可能含有一定量的五羥色胺!儲(chǔ)存≤-20℃避免熱源或太陽直射,避免反復(fù)凍融。穩(wěn)定性6個(gè)月6、試劑盒成分注意試劑盒有足夠做96份單孔檢測(cè)或48份雙孔檢測(cè)所需的試劑成分。數(shù)量標(biāo)記成分1×12×8MTP包被板,可拆,微孔中包被了羊抗兔抗血清。1×5mlANTISERUM組胺抗血清,藍(lán)色,即用,內(nèi)含:兔抗血清、Tris緩沖液和0.01%的NaN3。1×5mlBIOTIN五羥色胺生物素,黃色,即用,內(nèi)含0.1%的NaN3。1×0.2mlENZCONJCONC酶聯(lián)物,10倍濃縮,內(nèi)含堿性磷酸酶標(biāo)記的抗生物素抗體、Tris緩沖液、HCl和0.01%的NaN3。1×7×0.5mlCALA-G標(biāo)準(zhǔn)品A-G,0;0.08;0.24;0.73;2.2;6.6;19.8ng/ml,0;0.45;1.4;4.1;12.5;37.4;112.3nmol/l,即用,內(nèi)含?;奈辶u色胺、磷酸鹽緩沖液和0.1%的NaN3。1×2×0.5mlCONTROL1+2LYO質(zhì)控品1+2,凍干,內(nèi)含人血清和0.02%的NaN3。具體濃度及可允許范圍請(qǐng)見試劑瓶標(biāo)簽。1×3mlACYLREAG?;噭﹥?nèi)含乙酸酐和丙酮,即用1×50mlASSAYBUFCONC檢測(cè)緩沖液,10倍濃縮,內(nèi)含磷酸緩沖液、BSA和1%的NaN3。1×50mlWASHBUFCONC洗滌液,20倍濃縮,內(nèi)含磷酸緩沖液、吐溫和0.1%的硫柳汞。1×9×PNPPSUBSPNPP底物片,密封于鋁鉑金屬袋內(nèi),內(nèi)含對(duì)硝基苯酚磷酸鹽。1×27mlPNPPBUFPNPP底物緩沖液,即用,內(nèi)含二乙醇胺、水和0.05%的NaN3。1×15mlPNPPSTOPPNPP終止液,即用,內(nèi)含1M的NaOH和0.25M的EDTA。3×FOIL粘性金屬板7、實(shí)驗(yàn)所需器材但試劑盒不提供1)移液器,體積:20;25;50;100;1000ul2)玻璃試管(12×75mm)3)試管架4)振蕩器(500rpm)5)旋渦混合器6)水浴箱,37℃7)帶儲(chǔ)器的8道移液器8)洗滌瓶,自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)9)離心機(jī):≥1500×g10)可在405nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀(參考波長(zhǎng):600-650nm)11)雙蒸水或去離子水12)吸水紙、取樣吸頭和計(jì)時(shí)器8、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說明供手動(dòng)和自動(dòng)操作參考用注意用于96孔檢測(cè)的試劑成分可分成3次用。下述體積是使用4條(32孔)時(shí)所需要的體積。如果客戶想將標(biāo)準(zhǔn)品從7支減為6支的話,我們可以省掉標(biāo)準(zhǔn)品G。則檢測(cè)范圍相應(yīng)的減少到155ug/l(血漿)或706ug/l(血清,尿液,組織勻漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清)。血清、尿液、組織勻漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清樣品可以選擇簡(jiǎn)短操作步驟進(jìn)行,只需溫育3.5個(gè)小時(shí)(但血漿樣品不能采用簡(jiǎn)短操作步驟進(jìn)行),以上樣品也可以選擇可選操作步驟進(jìn)行檢測(cè)(將樣品溫育一整夜),血漿樣品必須按照溫育一整夜進(jìn)行檢測(cè)。8.1凍干或濃縮成分的準(zhǔn)備稀釋/溶解成分加入稀釋劑比例備注儲(chǔ)存穩(wěn)定性15ml檢測(cè)緩沖液150ml雙蒸水1:10出現(xiàn)黃褐色并不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果2-8℃2周15ml洗滌液300ml雙蒸水1:202-8℃4周質(zhì)控品0.5ml雙蒸水靜置15min,混合時(shí)無泡沫≤-20℃有效期內(nèi)穩(wěn)定60ul酶聯(lián)物6ml稀釋的檢測(cè)緩沖液1:101臨時(shí)配置,只能使用一次18-25℃2小時(shí)3PNPP底物片8mlPNPP底物緩沖液臨時(shí)配置,只能使用一次18-25℃5小時(shí)8.2樣品的稀釋樣品五羥色胺濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品的必須用檢測(cè)緩沖液進(jìn)行進(jìn)一步的稀釋。8.3樣品和質(zhì)控品的酰化樣品A:血清,尿液,血小板提取物,組織勻漿和質(zhì)控品樣品B:無血小板血漿注意請(qǐng)不要酰化標(biāo)準(zhǔn)品,標(biāo)準(zhǔn)品已經(jīng)酰化了。樣品準(zhǔn)備可使血清、尿液、血小板乳糜微粒、組織勻漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清被稀釋107倍,而血漿樣品則被稀釋23.5倍。結(jié)果計(jì)算時(shí)必須將此稀釋因子考慮進(jìn)去。8.3.1樣品A:血清、尿液、血小板提取物、組織勻漿和質(zhì)控品1將質(zhì)控品和樣品A分別20ul加入到玻璃試管中。2在每一試管中加入100ul稀釋好的檢測(cè)緩沖液,旋渦混合。3在每一試管中加入25ul?;噭?(3%),加入后立即旋渦混合。4將試管蓋好,將試管放到37℃水浴箱內(nèi)溫育15分鐘。5在每一試管中加入2ml已稀釋好的檢測(cè)緩沖液,旋渦混合61500×g下離心10分鐘注意準(zhǔn)備好的樣品必須立即檢測(cè)。其上清可在18-25℃下穩(wěn)定存放1小時(shí)。8.3.2樣品B:無血小板血漿1將50ul樣品B加入到玻璃試管中。2在每一試管中加入100ul稀釋好的檢測(cè)緩沖液,旋渦混合。3在每一試管中加入25ul酰化試劑,加入后立即旋渦混合。4將試管蓋好,將試管放到37℃水浴箱內(nèi)溫育15分鐘。5在每一試管中加入1ml已稀釋好的檢測(cè)緩沖液,旋渦混合61500×g下離心10分鐘注意準(zhǔn)備好的樣品必須立即檢測(cè)。其上清可在18-25℃下穩(wěn)定存放1小時(shí)。9、實(shí)驗(yàn)步驟9.1簡(jiǎn)短操作步驟(僅供樣品A使用,不能應(yīng)用于血漿)1將標(biāo)準(zhǔn)品、?;玫馁|(zhì)控品和?;玫臉悠犯?0ul加入到相應(yīng)的微孔中。2在每一微孔中加入50ul五羥色胺生物素。3在每一微孔中加入50ul五羥色胺抗血清。4蓋板,室溫(18-25℃)下振蕩(500rpm)溫育90min。5移去粘性金屬板,棄取孔內(nèi)反應(yīng)液,每孔用250ul稀釋好的洗滌液洗板3次,吸水紙上拍干以除去殘余液體。6在每一微孔中加入150ul臨時(shí)準(zhǔn)備好的酶聯(lián)物。7蓋板,室溫(18-25℃)下振蕩(500rpm)溫育60min。8移去粘性金屬板,棄取孔內(nèi)反應(yīng)液,每孔用250ul稀釋好的洗滌液洗板3次,吸水紙上拍干以除去殘余液體。9如果有條件的話,可以用8道移液器加底物液和終止液。加底物液和終止液時(shí),每孔間的時(shí)間間隔應(yīng)當(dāng)相同。使用主動(dòng)置換型移液器并避免氣泡產(chǎn)生。10在每一微孔中加入200ul臨時(shí)配置好的PNPP底物液。11室溫(18-25℃)下振蕩(500rpm)溫育60min。12在每一微孔中加入50ulPNPP終止液以終止底物反應(yīng),輕輕振板以使溶液混合均勻。13加終止液后60min內(nèi)405nm處讀取OD值。9.2可選操作步驟(溫育一整夜,樣品A和樣品B均適用)9.2.1**天1將標(biāo)準(zhǔn)品、?;玫馁|(zhì)控品和樣品分別50ul加入到相應(yīng)的微孔中。2在每一微孔中加入50ul五羥色胺生物素。3在每一微孔中加入50ul五羥色胺抗血清。4蓋板,輕輕振板,2-8℃下溫育16-20小時(shí)(一整夜)。9.2.2第二天1移去粘性金屬板,棄取孔內(nèi)反應(yīng)液,每孔用250ul稀釋好的洗滌液洗板3次,吸水紙上拍干以除去參與液體。2在每一微孔中加入150ul臨時(shí)配置好的酶聯(lián)物。3蓋板,室溫振蕩器上(500rpm)溫育60分鐘。4移去粘性金屬板,棄取孔內(nèi)反應(yīng)液,每孔用250ul稀釋好的洗滌液洗板3次,吸水紙上拍干以除去殘余液體。5如果有條件的話,可以用8道移液器加底物液和終止液。加底物液和終止液時(shí),每孔間的時(shí)間間隔應(yīng)當(dāng)相同。使用主動(dòng)置換型移液器并避免氣泡產(chǎn)生。6在每一微孔中加入200ul臨時(shí)配置好的PNPP底物液。7室溫振蕩器上(500rpm)溫育30分鐘。8在每一微孔中加入50ulPNPP終止液,振板以混合孔內(nèi)成分。9加終止液后60min內(nèi)405nm處讀取OD值。(參考波長(zhǎng):600-650nm)10、結(jié)果計(jì)算將所有標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品的OD值減去空白孔的OD值。在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上,以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值(Y軸,線性)對(duì)其濃度(X軸,對(duì)數(shù))繪制出一條標(biāo)準(zhǔn)曲線,或采用自動(dòng)計(jì)算的方法繪制出一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。用Cubicspline、4參數(shù)或雙對(duì)數(shù)可以得到較好的曲線圖。在計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),應(yīng)當(dāng)應(yīng)用到每一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)值(兩個(gè)數(shù)值中,明顯逸出的數(shù)值應(yīng)當(dāng)被忽略掉,采用更加合理的一個(gè)數(shù)值用)。樣品的濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上定量得到。由于樣品被稀釋了,所以Z終樣品結(jié)果必須乘以相應(yīng)的稀釋因子,單位為ng/ml。血清、尿液、血小板、組織勻漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、質(zhì)控品:×107無血小板血漿:×23.5進(jìn)行了進(jìn)一步稀釋的樣品結(jié)果應(yīng)當(dāng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。實(shí)驗(yàn)必須滿足如下標(biāo)準(zhǔn)才符合要求:50%OD/Odmax():0.60-1.00ng/ml(平均0.8ng/ml)△OD標(biāo)準(zhǔn)品A-標(biāo)準(zhǔn)品G≥0.80OD轉(zhuǎn)換系數(shù):五羥色胺(ng/ml)×5.67=nmol/l如果樣品中五羥色胺濃度高于Z高標(biāo)準(zhǔn)品,則此樣品必須按照實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備說明進(jìn)行稀釋并重新檢測(cè)。11、期望值實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能當(dāng)作任何ZL結(jié)果的**原因,疾病的判斷還應(yīng)當(dāng)與其它臨床觀察和診斷檢測(cè)相結(jié)合。以下結(jié)果為正常人群的正常值(97.5%):樣品數(shù)量單位平均值建議每個(gè)實(shí)驗(yàn)室讀確定自己的正常值范圍范圍血清99ng/ml88.630-200無血小板血漿35ng/ml3.71.8-7.5血小板35ng/109血小板490217-86124小時(shí)尿液49μg/d83.1≤200本譯文僅供參考,詳情請(qǐng)以原文為準(zhǔn)。ZGdu家總代理:深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司辦公地址:深圳市蛇口太子路18號(hào)海景廣場(chǎng)11C研發(fā)ZX:深圳市蛇口沿山路10號(hào)6層電話:0755-26814430,26680196郵政編碼:518067免費(fèi)電話:800-8306296傳真:0755-26814431[詳細(xì)]
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2018-11-14 10:00
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人5羥色胺酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用方法
- 本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T[詳細(xì)]
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2018-12-30 10:00
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大鼠5-羥色胺(5-HT)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)
- 大鼠5-羥色胺(5-HT)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中5-羥色胺(5-HT)的含量。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠5-羥色胺(5-HT)水平。用純化的大鼠5-羥色胺(5-HT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入5-羥色胺(5-HT)再與HRP標(biāo)記的ET-1抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠5-羥色胺(5-HT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠5-羥色胺(5-HT)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:225pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為150pg/ml,100pg/ml,50pg/ml,25pg/ml,12.5pg/ml)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng):1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和15%檢測(cè)范圍:5pg/ml-180pg/ml保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月www.biokanu.com[詳細(xì)]
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2018-09-22 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒
- 人5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2013-12-06 00:00
操作手冊(cè)
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人5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒
- 人5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-29 11:41
課件
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硫酸-5-羥色胺肌酐說明書,硫酸-5-羥色胺肌酐產(chǎn)品資料
- CAS號(hào):61-47-2中文名稱:硫酸-5-羥色胺肌酐其他中文名稱:5-羥色胺肌酸酐硫酸鹽;5-羥色胺肌氨酸酐硫酸鹽一水合物英文名稱:5-HT其他英文名稱:Serotonincreatininesulfatesaltmonohydrate;5-Hydroxytryptaminecreatininesulfatecomplex產(chǎn)品規(guī)格:BRwww.shjsbio.com[詳細(xì)]
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2018-10-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人過氧化物酶體增殖物激活受體αELISA試劑盒使用方法
- 檢測(cè)范圍:96T10ng/L-320ng/L使用目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)水平。用純化的人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α),再與HRP標(biāo)記的過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(640ng/L)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)[詳細(xì)]
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2018-09-19 10:01
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人五羥色胺(Serotonin)ELISA試劑盒說明書
- 電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com人五羥色胺(Serotonin)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人Serotonin單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的Serotonin與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人Serotonin,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測(cè)OD值,Serotonin濃度與OD值成正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中Serotonin濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):16ug/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè),2-8℃保存48小時(shí);更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成16ug/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,每管加入標(biāo)本稀釋液300ul。在**管中加入16ug/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul,移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七管中吸出300ul棄去。第八管為空白對(duì)照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測(cè)程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品8000、4000、2000、1000、500、250、125、0ng/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)Serotonin含量。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的Serotonin檢測(cè)濃度小于50ng/ml。2.特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人Serotonin。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:01
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人五-羥色胺 (5-HT) ELISA 檢測(cè)試劑盒
- 人(Human)五-羥色胺(5-HT)ELISA檢測(cè)試劑盒本試劑僅供研究使用標(biāo)本:血清或血漿試驗(yàn)原理:5-HT試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知5-HT濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將5-HT和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中5-HT的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標(biāo)板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品:80umol/L1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進(jìn)行稀稀空白對(duì)照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素標(biāo)記的抗5-HT抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進(jìn)行稀釋底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型標(biāo)本稀釋液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型自備材料1.蒸餾水。2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3.振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。2.實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。人(Human)五-羥色胺(5-HT)ELISA檢測(cè)試劑盒操作注意事項(xiàng)1.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。3.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6.洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。7.底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。8.加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。9.按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液5、保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準(zhǔn)備1.標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:80umol/L(6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。40umol/L(5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20umol/L(4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10umol/L(3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液5.0umol/L(2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.5umol/L(1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0umol/L(空白對(duì)照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。操作步驟1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。2.根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。8.取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。9.在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。建議使用的實(shí)驗(yàn)方案標(biāo)準(zhǔn)品濃度(umol/L)A8080樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品局限6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到極ng確的結(jié)果。人(Human)五-羥色胺(5-HT)ELISA檢測(cè)試劑盒性能1.靈敏度:Z小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。結(jié)果判斷與分析1、儀器值:于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的5-HT標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的5-HT含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。3、檢測(cè)值范圍:0-80umol/L4、敏感度:0.1umol/L[詳細(xì)]
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2018-09-19 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人CC趨化因子受體7elisa試劑盒使用方法
- 本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T0.3pg/ml-16pg/ml使用目的:本試劑盒用于測(cè)定人痰液中樹突狀細(xì)胞中CC趨化因子受體7(CCR-7)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人CC趨化因子受體7(CCR-7)水平。用純化的人CC趨化因子受體7(CCR-7)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入CC趨化因子受體7(CCR-7),再與HRP標(biāo)記的CC趨化因子受體7(CCR-7)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的CC趨化因子受體7(CCR-7)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人CC趨化因子受體7(CCR-7)濃度。[詳細(xì)]
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2018-10-01 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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大鼠5-羥色胺(5-HT)酶聯(lián)免疫分析
- 大鼠5-羥色胺(5-HT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中5-羥色胺(5-HT)的含量。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠5-羥色胺(5-HT)水平。用純化的大鼠5-羥色胺(5-HT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入5-羥色胺(5-HT)再與HRP標(biāo)記的ET-1抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠5-羥色胺(5-HT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠5-羥色胺(5-HT)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:225pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟:1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為150pg/ml,100pg/ml,50pg/ml,25pg/ml,12.5pg/ml)。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng):1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%檢測(cè)范圍:5pg/ml-180pg/ml保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月www.biokanu.com[詳細(xì)]
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2018-09-22 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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