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線蟲(chóng)總蛋白
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2024-09-29 01:25 693閱讀次數(shù)
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線蟲(chóng)總蛋白
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線蟲(chóng)總蛋白
- 線蟲(chóng)總蛋白[詳細(xì)]
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2024-09-29 01:25
產(chǎn)品樣冊(cè)
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線蟲(chóng)總蛋白(TP)試劑盒使用方法
- 檢測(cè)范圍:96T15ng/ml-400ng/ml使用目的:本試劑盒用于測(cè)定線蟲(chóng)相關(guān)樣本中總蛋白(TP)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中線蟲(chóng)總蛋白(TP)水平。用純化的線蟲(chóng)總蛋白(TP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入總蛋白(TP),再與HRP標(biāo)記的總蛋白(TP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總蛋白(TP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中線蟲(chóng)總蛋白(TP)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標(biāo)試劑6ml×1瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(800ng/ml)0.5ml×1瓶3酶標(biāo)包被板12孔×8條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說(shuō)明書(shū)1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)[詳細(xì)]
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2018-09-19 10:01
產(chǎn)品樣冊(cè)
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總蛋白C(TPC)ELISA試劑盒
- 總蛋白C(TPC)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2016-07-11 00:00
其它
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人總蛋白S(TPS)ELISA試劑盒
- 人總蛋白S(TPS)ELISA試劑盒[詳細(xì)]
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2016-07-11 00:00
實(shí)驗(yàn)操作
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LAMBDA 分光光度計(jì)測(cè)定總蛋白:Bradford法
- 總蛋白的定量方法是一種建立Z久的基礎(chǔ)且重要的生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)。UV/Vis分光光度計(jì)被廣泛用于蛋白的測(cè)定。本應(yīng)用報(bào)告描述了經(jīng)典的蛋白方法,Bradford法。使用LAMBDA465UV/Vis分光光度計(jì)快速獲取數(shù)據(jù),并使用UVLab軟件進(jìn)行分析。[詳細(xì)]
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2018-08-17 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人總蛋白S(TPS)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
- 人總蛋白S(TPS)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中人總蛋白S(TPS)的含量。實(shí)驗(yàn)原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人總蛋白S(TPS)水平。用純化的總蛋白S(TPS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入總蛋白S(TPS),再與HRP標(biāo)記的總蛋白S(TPS)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人總蛋白S(TPS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人總蛋白S(TPS)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說(shuō)明書(shū)1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個(gè)1個(gè)酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品:360ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在**、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在**、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為240ng/L,160ng/L,80ng/L,40ng/L,20ng/L)。加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。注意事項(xiàng):試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請(qǐng)避光保存。嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。計(jì)算:以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。2.批內(nèi)與批見(jiàn)應(yīng)分別小于9%和11%檢測(cè)范圍:10ng/L-300ng/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-11-07 14:16
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人總P53蛋白(Total P53)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
- 電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com人總P53蛋白(TotalP53)ELISA試劑盒原理本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人P53單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的P53與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人P53,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍(lán)色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測(cè)OD值,P53濃度與OD值成正比,可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中P53濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標(biāo)板(CoatedWells)96孔酶標(biāo)抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標(biāo)本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):5ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準(zhǔn)備試劑與收集血樣1.收集標(biāo)本:血清、血漿(EDTA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè),2-8℃保存48小時(shí);更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復(fù)凍融。2.標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,配成10ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,**管加標(biāo)本稀釋液900ul,第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在**管中加入10ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對(duì)照。3.10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)標(biāo)本激活方法1.將450ul標(biāo)本稀釋液加入到一支1.5ml進(jìn)口聚丙烯管中,再加10ul血清或血漿標(biāo)本。2.加20ul1NHCI,蓋緊,上下混勻。2-8℃放置60±2分鐘。3.加20ul1NNaOH,蓋緊,上下混勻。4.即用,或放-20/-70℃保存3天。計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以稀釋倍數(shù)50。(注意:不同的標(biāo)本P53的水平可能有較大差異,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況靈活掌握稀釋度)5.細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿10倍稀釋(410ul的標(biāo)本稀釋液+50ul樣本+20ul的1NHCI+20ul的1NNaOH)。檢測(cè)程序1.加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品(已激活)100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向?yàn)V紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。結(jié)果計(jì)算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。2.以標(biāo)準(zhǔn)品1000、500、250、125、62、31、15.6、0PG/ml為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上作圖,畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)P53含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的P53檢測(cè)濃度小于10pg/ml。2.特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人P53。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板見(jiàn)變異系數(shù)均小于8.9%。注意事項(xiàng)1.以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.洗滌過(guò)程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導(dǎo)致極ng確度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高。3.板條開(kāi)封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細(xì)]
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2018-09-13 10:01
產(chǎn)品樣冊(cè)
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現(xiàn)貨豬總蛋白酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
- 本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T10μg/L-400μg/L使用目的:本試劑盒用于測(cè)定豬血清樣本中總蛋白(TP)含量。豬總蛋白酶聯(lián)免疫分析試劑盒實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬總蛋白(TP)水平。用純化的豬總蛋白(TP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入總蛋白(TP),再與HRP標(biāo)記的總蛋白(TP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總蛋白(TP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中豬總蛋白(TP)濃度。試劑盒組成標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。豬總蛋白酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié):計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。豬總蛋白酶聯(lián)免疫分析試劑盒保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-11-04 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人總蛋白(TP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
- 人總蛋白(TP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T20ng/ml-1000ng/ml使用目的:本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中總蛋白(TP)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人總蛋白(TP)水平。用純化的人總蛋白(TP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入總蛋白(TP),再與HRP標(biāo)記的總蛋白(TP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總蛋白(TP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人總蛋白(TP)濃度。人總蛋白(TP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。人總蛋白(TP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。人總蛋白(TP)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總結(jié):計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-11-05 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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動(dòng)物細(xì)胞線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
- 主要用途Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑是一種旨在使用考馬斯亮藍(lán)染色劑G-250與可溶性蛋白質(zhì)特異性結(jié)合產(chǎn)生色彩差異變化,通過(guò)比色測(cè)定其Zda吸收轉(zhuǎn)換來(lái)定量蛋白質(zhì)濃度的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種蛋白質(zhì)(動(dòng)物、人體、植物、微生物等)的含量檢測(cè)。產(chǎn)品即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,檢測(cè)敏感,定量極ng確。技術(shù)背景考馬斯亮藍(lán)染料G-250(CoomassieBrilliantBlueG-250)是一種與蛋白質(zhì)結(jié)合的化學(xué)染料。它的三苯甲烷(triphenylmethane)基團(tuán),主要與蛋白質(zhì)的非極性結(jié)構(gòu)結(jié)合。而它的陰離子磺酸鹽(anionsulfonate)基團(tuán)與蛋白質(zhì)分子的陽(yáng)離子和芳香類氨基酸,尤其是精氨酸和賴氨酸側(cè)鏈的結(jié)合。在酸性環(huán)境下,其Zda吸收波長(zhǎng)從465nm轉(zhuǎn)換為595nm。Bradford提出的方法的Zda優(yōu)點(diǎn)在于不受樣品中各種化學(xué)成分的干擾。較之Lowry,Hartree-Lowry和BCA技術(shù),更為敏感。[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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人美麗線蟲(chóng)凋亡基因(CED-3)檢測(cè)試劑盒
- 人美麗線蟲(chóng)凋亡基因(CED-3)檢測(cè)試劑盒[詳細(xì)]
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2015-03-10 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
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馬鈴薯根腐線蟲(chóng)病癥狀及FZ技術(shù)
- 馬鈴薯根腐線蟲(chóng)病癥狀及FZ技術(shù)[詳細(xì)]
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2024-09-28 01:25
選購(gòu)指南
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使用LAMBDA UV/Vis 分光光度計(jì)測(cè)定總蛋白: Lowry法
- 使用LAMBDA UV/Vis 分光光度計(jì)測(cè)定總蛋白: Lowry法[詳細(xì)]
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2016-08-24 00:00
課件
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使用LAMBDA UV/VIS 分光光度計(jì)測(cè)定總蛋白: Bradford法
- 使用LAMBDA UV/VIS 分光光度計(jì)測(cè)定總蛋白: Bradford法[詳細(xì)]
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2016-08-24 00:00
操作手冊(cè)
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使用LAMBDA 紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)總蛋白:Lowry法
- Lowry和Biuret法是蛋白定量的標(biāo)準(zhǔn)方法。盡管后者的靈敏度更高,并在探索性工作中使用,但由于其組合試劑的穩(wěn)定性差、顏色重復(fù)性差(低蛋白濃度時(shí)尤其明顯),且蛋白濃度和顏色響應(yīng)的關(guān)系非線性,制約了其應(yīng)用。Ohnishi和Barr為L(zhǎng)owry過(guò)程改進(jìn)并簡(jiǎn)化了Biuert組合溶液,同時(shí)提高了其穩(wěn)定性。本應(yīng)用報(bào)告描述了改進(jìn)的Lowry過(guò)程,進(jìn)行蛋白分析。[詳細(xì)]
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2018-08-17 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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特價(jià)銷售豬總蛋白酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
- 本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T10μg/L-400μg/L使用目的:本試劑盒用于測(cè)定豬血清樣本中總蛋白(TP)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬總蛋白(TP)水平。用純化的豬總蛋白(TP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入總蛋白(TP),再與HRP標(biāo)記的總蛋白(TP)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的總蛋白(TP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中豬總蛋白(TP)濃度。試劑盒組成標(biāo)本要求1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié):計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,**做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請(qǐng)避光保存。7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。2.有效期:6個(gè)月[詳細(xì)]
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2018-09-19 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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動(dòng)物血小板線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
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動(dòng)物血小板線粒體可溶性總蛋白制備試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)主要用途動(dòng)物血小板線粒體可溶性總蛋白制備試劑是一種旨在通過(guò)低速差速離心和化學(xué)滲壓休克處理純化血小板、以及物理或化學(xué)破膜和高速差速離心的方法,直接從動(dòng)物血細(xì)胞中分離出完整而純化的血小板線粒體細(xì)胞器,并在蛋白酶YZ混合劑的幫助下,使已純化的線粒體膜結(jié)構(gòu)破裂而獲得線粒體內(nèi)活性蛋白酶系統(tǒng)的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適合于人體和各種動(dòng)物全血(鼠、豬、羊等)中血小板線粒體可溶性總蛋白的制備。可以被用于細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、代謝和營(yíng)養(yǎng)學(xué)等的研究??芍苯佑糜谔囟ǖ鞍缀罄m(xù)純化、蛋白一維或二維電泳、西方雜交、免疫抗體和質(zhì)譜分析等等。產(chǎn)品不含污染性蛋白酶和核酶,即到即用,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景線粒體是細(xì)胞中重要的細(xì)胞器,其主要功能是提供細(xì)胞內(nèi)各種物質(zhì)代謝所需要的能量。線粒體中含有豐富的細(xì)胞色素氧化酶系統(tǒng)和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白等。通過(guò)機(jī)械或化學(xué)方法破裂細(xì)胞,進(jìn)而差速離心獲得線粒體,然后通過(guò)特殊裂解液和蛋白酶YZ混合劑防止裂解后線粒體內(nèi)各種活性蛋白成分遭到活化的內(nèi)源性蛋白酶的破壞,充分保留線粒體內(nèi)蛋白質(zhì)的免疫和生物學(xué)活性,Z后進(jìn)行相關(guān)蛋白的獨(dú)立分析。產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)500毫升裂解液(ReagentB)80毫升凈化液(ReagentC)20毫升強(qiáng)化液(ReagentD)10毫升保存液(ReagentE)200毫升破膜液(ReagentF)2毫升活性液(ReagentG)20微升上樣液(ReagentH)3毫升產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)1份保存方式保存凈化液(ReagentC)和活性液(ReagentG)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里,有效保證6月用戶自備15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器50毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器4℃臺(tái)式離心機(jī):用于樣品操作4℃超速離心機(jī):用于樣品操作DOUNCE勻漿器:用于裂解細(xì)胞超聲儀:用于裂解細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟物理處理法實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將試劑盒里的凈化液(ReagentC)凍融,然后移出1毫升凈化液(ReagentC)到4毫升的裂解液(ReagentB)里,混勻后,置入冰槽里,標(biāo)記為裂解工作液。然后進(jìn)行下列操作。準(zhǔn)備1個(gè)無(wú)菌的50毫升錐形離心管輕輕混勻10至20毫升新鮮(2小時(shí)內(nèi)抽取的靜脈血)的抗凝全血樣品移入到50毫升錐形離心管放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為200g小心移取上清液到新的50毫升錐形離心管,留下200微升液體,以防抽取松動(dòng)的細(xì)胞顆粒群用手指輕彈離心管2至3下,使細(xì)胞顆粒群松動(dòng)加入10毫升預(yù)冷的清理液(ReagentA),混勻細(xì)胞顆粒群放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為200g小心移取上清液合并到上述50毫升錐形離心管,留下200微升液體,以防抽取松動(dòng)的細(xì)胞顆粒群(扔掉含有細(xì)胞顆粒群的離心管)放入含有上清液的離心管到臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為200g小心移取上清液到新的50毫升錐形離心管,留下200微升液體,以防抽取松動(dòng)的細(xì)胞顆粒群(扔掉含有細(xì)胞顆粒群的離心管)――此步驟獲得血小板富集血清放入含有上清液的離心管到臺(tái)式離心機(jī)離心20分鐘,速度為2000g可見(jiàn)白色沉淀顆粒群,小心抽掉上清液加入10毫升預(yù)冷的清理液(ReagentA),混勻細(xì)胞顆粒群放入臺(tái)式離心機(jī)離心20分鐘,速度為2000g小心抽去上清液(注意:如果暫時(shí)停止操作,須暫時(shí)放進(jìn)-70℃冰箱里)――此步驟獲得純化的血小板加入5毫升預(yù)冷的裂解工作液渦旋震蕩5秒,充分混勻細(xì)胞顆粒群即刻放進(jìn)預(yù)冷的DOUNCE勻漿器,在冰槽里用勻漿幫勻化細(xì)胞(約10下)(注意:參見(jiàn)注意事項(xiàng)11)將所有細(xì)胞勻漿物移入15毫升錐形離心管(選擇步驟)置于超聲儀槍頭下,離心管在冰槽里(選擇步驟)超聲功率為60%(或150赫茲)猝擊10秒,間隙30秒,10個(gè)循環(huán)放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1500g小心移出上清液到另一個(gè)新的預(yù)冷的15毫升錐形離心管此步驟去除未溶解的細(xì)胞放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心10分鐘,速度為10000g小心抽去上清液,保留沉淀顆粒此步驟獲得線粒體沉淀物(選擇步驟)加入3毫升預(yù)冷的保存液(ReagentE)(選擇步驟)放進(jìn)4℃超速離心機(jī)再次離心5分鐘,速度為10000g(選擇步驟)小心抽去上清液加入100微升破膜液(ReagentF)到線粒體顆粒樣品中加入1微升活性液(ReagentG)渦旋震蕩15秒置入冰槽中孵育15分鐘渦旋震蕩60秒放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心2分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf5415)小心移取上清液到新的1.5毫升離心管――此為所有可溶性線粒體蛋白系統(tǒng)若暫時(shí)不予后續(xù)處理,保存在-20℃冰箱里繼續(xù)進(jìn)行下列操作:操作一、線粒體總蛋白定量檢測(cè)1)移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)(注意:建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-30030.1)操作二、可溶性線粒體蛋白電泳1)移取20微升(1微克/微升)上清液到新的1.5毫升離心管2)加入20微升上樣液(ReagentH)3)渦旋震蕩15秒放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10秒,速度為500g(或2000RPM,例如eppendorf5415)煮沸5分鐘上樣,進(jìn)行電泳操作和西方雜交化學(xué)處理法實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,將試劑盒里的凈化液(ReagentC)凍融,然后移出1毫升凈化液(ReagentC)到4毫升的裂解液(ReagentB)里,混勻后,置入冰槽里,標(biāo)記為裂解工作液。然后進(jìn)行下列操作。準(zhǔn)備1個(gè)無(wú)菌的50毫升錐形離心管輕輕混勻10至20毫升新鮮(2小時(shí)內(nèi)抽取的靜脈血)的抗凝全血樣品移入到50毫升錐形離心管放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為200g小心移取上清液到新的50毫升錐形離心管,留下200微升液體,以防抽取松動(dòng)的細(xì)胞顆粒群用手指輕彈離心管2至3下,使細(xì)胞顆粒群松動(dòng)加入10毫升預(yù)冷的清理液(ReagentA),混勻細(xì)胞顆粒群放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為200g小心移取上清液合并到上述50毫升錐形離心管,留下200微升液體,以防抽取松動(dòng)的細(xì)胞顆粒群(扔掉含有細(xì)胞顆粒群的離心管)(選擇步驟)放入含有上清液的離心管到臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為200g(選擇步驟)小心移取上清液到新的50毫升錐形離心管,留下200微升液體,以防抽取松動(dòng)的細(xì)胞顆粒群(扔掉含有細(xì)胞顆粒群的離心管)――此步驟獲得血小板富集血清放入含有上清液的離心管到臺(tái)式離心機(jī)離心20分鐘,速度為2000g可見(jiàn)白色沉淀顆粒群,小心抽掉上清液加入10毫升預(yù)冷的清理液(ReagentA),混勻細(xì)胞顆粒群放入臺(tái)式離心機(jī)離心20分鐘,速度為2000g小心抽去上清液(注意:如果暫時(shí)停止操作,須暫時(shí)放進(jìn)-70℃冰箱里)――此步驟獲得純化的血小板入5毫升預(yù)冷的裂解工作液渦旋震蕩5秒,充分混勻在冰槽里孵育2分鐘,期間渦旋震蕩5秒一次加入500微升預(yù)冷的強(qiáng)化液(ReagentD)渦旋震蕩5秒,充分混勻在冰槽里孵育5分鐘,期間渦旋震蕩5秒二次(注意:參見(jiàn)注意事項(xiàng)12)加入5毫升預(yù)冷的保存液(ReagentE),輕輕搖動(dòng)試管混勻放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1500g小心移出上清液到另一個(gè)新的預(yù)冷的15毫升錐形離心管此步驟去除未溶解的細(xì)胞放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心10分鐘,速度為10000g小心抽去上清液,保留沉淀顆粒此步驟獲得線粒體沉淀物(選擇步驟)加入3毫升預(yù)冷的保存液(ReagentE)(選擇步驟)放進(jìn)4℃超速離心機(jī)再次離心5分鐘,速度為10000g(選擇步驟)小心抽去上清液加入100微升破膜液(ReagentF)到線粒體顆粒樣品中加入1微升活性液(ReagentG)渦旋震蕩15秒置入冰槽中孵育15分鐘渦旋震蕩60秒放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心2分鐘,速度為16000g(或13000RPM,例如eppendorf5415)小心移取上清液到新的1.5毫升離心管――此為所有可溶性線粒體蛋白系統(tǒng)若暫時(shí)不予后續(xù)處理,保存在-20℃冰箱里繼續(xù)進(jìn)行下列操作:操作一、線粒體總蛋白定量檢測(cè)1.移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)(注意:建議使用Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-30030.1)操作二、可溶性線粒體蛋白電泳移取20微升(1微克/微升)上清液到新的1.5毫升離心管加入20微升上樣液(ReagentH)渦旋震蕩15秒放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心10秒,速度為500g(或2000RPM,例如eppendorf5415)煮沸5分鐘上樣,進(jìn)行電泳操作和西方雜交注意事項(xiàng)本產(chǎn)品為20次(10至20毫升全血)操作其它實(shí)際操作的全血容量與試劑使用量按比例調(diào)整:例如40毫升全血,試劑用量加倍操作時(shí),避免污染母液,尤其是裂解液(ReagentB)和保存液(ReagentE)操作時(shí),須戴手套建議使用新鮮全血:2小時(shí)內(nèi)的全血為理想狀態(tài),不要超過(guò)24小時(shí)全血樣品采集須使用全血樣品采集須使用EDTA二鉀血液抗凝液(12059.1)、ACD血液抗凝液(12059.4),或肝素鈉血液抗凝液(12059.5)建議使用足夠的樣品量血小板提取量因人而異;如果不足,建議增加全血量線粒體操作均須在4℃或以下?tīng)顟B(tài)下進(jìn)行建議嚴(yán)格控制操作時(shí)間通常勻化次數(shù)為10下(或細(xì)胞顆粒群消失為止)達(dá)到80%的細(xì)胞裂解為理想狀態(tài)。用戶可以通過(guò)顯微鏡觀察3微升勻漿物的細(xì)胞裂解程度:完整細(xì)胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50%可以增加勻化次數(shù)通常孵育5分鐘達(dá)到80%的細(xì)胞裂解為理想狀態(tài)。用戶可以通過(guò)顯微鏡觀察3微升裂解物的細(xì)胞裂解程度:完整細(xì)胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50%可以增加孵育時(shí)間和渦旋震蕩次數(shù)物理處理法是優(yōu)先推薦的技術(shù)處理通常每毫升全血平均可獲得2X108血小板通常10毫升全血的血小板線粒體含量為10至25微克線粒體蛋白16.如果需檢測(cè)不可溶性線粒體蛋白,可保留線粒體裂解后的沉淀物,直接加入10微升上樣液(ReagentH)和10微升無(wú)離子水,然后繼續(xù)操作二的步驟3至6本公司提供系列線粒體試劑產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定本產(chǎn)品經(jīng)鑒定無(wú)蛋白酶污染本產(chǎn)品經(jīng)鑒定蛋白萃取產(chǎn)量高本產(chǎn)品經(jīng)鑒定純化程度高[詳細(xì)]
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2018-11-19 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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Aβ,BIM大鼠總β淀粉樣蛋白ELISA試劑盒檢測(cè)方法說(shuō)明書(shū)
- Aβ,BIM大鼠總β淀粉樣蛋白ELISA試劑盒檢測(cè)方法說(shuō)明書(shū)l本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中大鼠總β淀粉樣蛋白(Aβ)的含量。l有效期:6個(gè)月l保存條件:2-8℃l本試劑盒僅供體外研究使用,不用于臨床診斷實(shí)驗(yàn)原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被大鼠總β淀粉樣蛋白(Aβ)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠總β淀粉樣蛋白(Aβ)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。樣本處理及要求1.血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)一夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3.組織勻漿:用預(yù)冷的PBS(0.01M,pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶YZ劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。Z后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。4.細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。注:標(biāo)本溶血會(huì)影響Z后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。標(biāo)本處理1.本公司只對(duì)試劑盒本身負(fù)責(zé),不對(duì)因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請(qǐng)使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。2.實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)標(biāo)本含量,如果標(biāo)本濃度過(guò)高,應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行稀釋,使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。3.若所檢樣本不包含在說(shuō)明書(shū)所列樣本之中,建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其有效性,并注意留存樣本。4.使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會(huì)由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。5.若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時(shí)間等,所以可能存在檢測(cè)不出的情況。6.某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因?yàn)榕c本產(chǎn)品所使用的檢測(cè)抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測(cè)出。7.建議使用新鮮樣本,保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差。需要而未提供的試劑和器材酶標(biāo)儀(450nm)高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱蒸餾水或去離子水試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標(biāo)板8孔×12條8孔×6條無(wú)標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6管0.3mL*6管無(wú)樣本稀釋液6mL3mL無(wú)檢測(cè)抗體-HRP10mL5mL無(wú)20×洗滌緩沖液25mL15mL按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋底物A6mL3mL無(wú)底物B6mL3mL無(wú)終止液6mL3mL無(wú)封板膜2張2張無(wú)說(shuō)明書(shū)1份1份無(wú)自封袋1個(gè)1個(gè)無(wú)備注:1.標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:480、240、120、60、30、0ng/mL2.經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)Zda標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。注意事項(xiàng)嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。不能使用過(guò)期產(chǎn)品。如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。試劑準(zhǔn)備試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。7.每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算以所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品的濃度。試劑盒性能1.檢測(cè)范圍:15ng/mL480ng/mL。2.靈敏度:Zdi檢測(cè)濃度小于1.0ng/mL。3.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。4.重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于15%。說(shuō)明1.由于現(xiàn)有條件及科學(xué)技術(shù)水平尚不能對(duì)所有供貨商提供的所有原料進(jìn)行全面的鑒定與分析,本產(chǎn)品可能存在一定的質(zhì)量技術(shù)風(fēng)險(xiǎn)。2.Z終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與試劑的有效性、實(shí)驗(yàn)者的相關(guān)操作以及當(dāng)時(shí)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境密切相關(guān),請(qǐng)務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。3.不同批次的同一產(chǎn)品可能會(huì)有少許差別,如:檢測(cè)限、靈敏度以及顯色時(shí)間等,請(qǐng)依據(jù)試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作,網(wǎng)站電子版說(shuō)明書(shū)僅作參考。4.只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測(cè)效果,不能混用其他制造商的產(chǎn)品。只有嚴(yán)格遵守本試劑盒的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明才會(huì)得到**的檢測(cè)結(jié)果。[詳細(xì)]
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2018-11-16 10:02
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itHumanLeukotrieneC4,LT-C4ELISAKitHE0991人二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)elisa試劑盒人二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISAKitHumandipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISAKitHE0992人組胺(HIS)elisa試劑盒人組胺(HIS)ELISAKithumanHistamine,HISELISAKITHE0993人游離雌三醇(FE3)elisa試劑盒人游離雌三醇(FE3)ELISAKithumanfreeEstriol,FE3ELISAKITHE0994人醛固酮(ALD)elisa試劑盒人醛固酮(ALD)ELISAKithumanaldosterone,ALDELISAKitHE0995人去甲腎上腺素(NA)elisa試劑盒人去甲腎上腺素(NA)ELISAKIThumanNoradrenaline,NAELISAKitHE0996人前列腺素F(PGF)elisa試劑盒人前列腺素F(PGF)ELISAKithumanProstaglandinF,PG-FELISAKitHE0997人前列腺素E1(PGE1)elisa試劑盒人前列腺素E1(PGE1)ELISAKithumanProstaglandinE1,PG-E1ELISAKit[詳細(xì)]
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2018-11-15 10:00
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