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食物總抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量檢測(cè)試劑盒

本文由 上??茖W(xué)儀器有限公司 整理匯編

2018-11-19 10:00 1285閱讀次數(shù)

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主要用途食物總抗氧化能力(TAC)比色法(DPPH)定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過有機(jī)氮自由基染料DPPH的參與,在抗氧化劑的存在下,通過分光光度儀,觀察其峰值下降的變化,來(lái)定量檢測(cè)對(duì)應(yīng)于標(biāo)準(zhǔn)水溶性生育酚Trolox的總抗氧化能力,即消除自由基等值濃度的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適用于各種新鮮組織(動(dòng)物、人體、昆蟲等)的總抗氧化能力檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)易,性能穩(wěn)定。技術(shù)背景超氧自由基陰離子(superoxideradical;O2-)、過氧化氫(hydrogenperoxide;H2O2)、羥自由基或氫氧基(hydroxylradical;OH-)、過氧化基(peroxylradical;ROO-)、氫過氧自由基(hydroperoxyl;HOO)、烷氧自由基(alcoxylradical)、氮氧基(nitricOxide;NO-)、過氧亞硝基陰離子(peroxynitriteanion;ONOO-)次氯酸(hypochlorousacid;HOCl)、半醌自由基(semiquinoneradical)、單線態(tài)氧氣(singletoxygen)等細(xì)胞內(nèi)活性氧族(ReactiveOxygenSpecies;ROS)的產(chǎn)生和增多,將導(dǎo)致細(xì)胞衰老或凋亡,甚而導(dǎo)致諸如冠心病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腫瘤、退行性病變等各種病理狀況。在生物系統(tǒng)內(nèi),通過抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、過氧化氫酶和谷胱甘肽過氧化物酶等,大分子,例如白蛋白、銅藍(lán)蛋白(ceruloplasmin;CER)、鐵蛋白(ferritin)和抗氧化因子,例如生育醇、類胡蘿卜素、抗壞血酸、還原性谷胱甘肽和尿酸膽紅素(bilirubin)等,產(chǎn)生抗氧化能力,即捕獲自由基的能力,達(dá)到消除或降低ROS的損害。通過穩(wěn)定的有機(jī)氮自由基染料1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-Dipheny1-2-picrylhydrazylradical;DPPH),受到抗氧化劑的去自由基作用,呈現(xiàn)深紫色轉(zhuǎn)化為黃色的變化,衡量體系中抗氧化劑捕獲自由基、消耗抗氧化劑的能力,在分光光度儀(515nm波長(zhǎng))的幫助下,觀察其峰值下降的變化,并與標(biāo)準(zhǔn)化抗氧化劑水溶性生育酚Trolox對(duì)照。保存方式保存在-20℃冰箱里,有效保證6月用戶自備50毫升燒杯:用于樣品操作的容器15毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器1.5毫升離心管:用于標(biāo)準(zhǔn)樣品配制的容器4℃臺(tái)式離心機(jī):用于樣品操作96孔板:用于比色的容器分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于比色分析實(shí)驗(yàn)步驟樣品準(zhǔn)備1、固態(tài)食品處理1.秤取1克固態(tài)食品或粉末到50毫升燒杯,杯口封口膜密封2.加入8毫升清理液(ReagentA)3.?dāng)嚢?0分鐘,充分混勻4.繼續(xù)加入清理液(ReagentA)到終容量為10毫升5.過濾紙過濾,去除不溶性固體顆粒6.封口膜封口備用2、液態(tài)食品處理1.移取5毫升待測(cè)液態(tài)食品到15毫升錐形離心管2.放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘,速度為1500g3.移取上清液到新的15毫升錐形離心管4.(選擇步驟)可以加入適量的清理液(ReagentA)5.(選擇步驟)過濾紙過濾(如果離心處理,樣品仍然不清澈)6.置于冰槽里備用或放進(jìn)-20冰箱里保存標(biāo)準(zhǔn)液準(zhǔn)備1.準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管,標(biāo)記為1至5號(hào)管2.移取50微升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)到1號(hào)管3.小心移取10微升緩沖液(ReagentB)和40微升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)到2號(hào)管,混勻4.小心移取20微升緩沖液(ReagentB)和30微升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)到3號(hào)管,混勻5.小心移取30微升緩沖液(ReagentB)和20微升標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)到4號(hào)管,混勻6.小心移取50微升緩沖液(ReagentB)到5號(hào)管7.將1至5號(hào)管放進(jìn)冰槽里備用,避免光照;標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表管號(hào)緩沖液(ReagentB)標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)測(cè)定體系標(biāo)準(zhǔn)Trolox濃度10微升50微升300微摩爾/升210微升40微升240微摩爾/升320微升30微升180微摩爾/升430微升20微升120微摩爾/升550微升0微升0三、樣品測(cè)讀實(shí)驗(yàn)開始前,將-20冰箱里的試劑置于室溫下融化,實(shí)驗(yàn)開始前,將-20℃冰箱里的試劑置于室溫下融化,移取5毫升染色液B(ReagentC2)到1瓶染色液A(ReagentC1)里,混勻,置于暗室里,標(biāo)記為染色工作液,避免光照。然后進(jìn)行下列操作。1.準(zhǔn)備1個(gè)96孔板,做好標(biāo)記:空白對(duì)照孔、標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照孔、樣品孔2.分別移取205微升緩沖液(ReagentB)到96孔板里的每個(gè)孔里3.分別加入25微升染色工作液4.加入20微升緩沖液(ReagentB)到空白對(duì)照孔5.加入20微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液(ReagentD)到相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照孔里6.加入20微升組織裂解樣品(100微克食品總量)到樣品孔里7.輕輕搖動(dòng)96孔板,使其混勻8.室溫下孵育15分鐘9.即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀里測(cè)讀:515nm波長(zhǎng)10.分析結(jié)果:1)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線:縱座標(biāo)(Y軸)為吸光單位(OD730nm);橫座標(biāo)(X軸)為標(biāo)準(zhǔn)Trolox濃度(微摩爾/升)2)空白對(duì)照孔為Zda吸光單位(OD515nm)讀數(shù)3)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照孔和樣品孔為實(shí)際吸光單位(OD515nm)讀數(shù)4)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)Trolox濃度(微摩爾/升)5)計(jì)算樣品實(shí)際總抗氧化能力【根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對(duì)應(yīng)Trolox濃度(微摩爾/升)×0.25(體系容量;毫升)×樣品稀釋倍數(shù)】÷0.02(樣品容量;毫升)=(微摩爾/升TROLOX等值)6)根據(jù)下列公式計(jì)算測(cè)定體系中樣品量的總抗氧化能力(實(shí)際YZ百分率)【(空白對(duì)照孔吸光單位讀數(shù)-實(shí)際吸光單位讀數(shù))÷空白對(duì)照孔吸光單位讀數(shù)】×1**%7)IC50:50%YZ率所需的樣品單位:TROLOX等值或樣品重量(毫克/毫升)或樣品容量(微升)×(所需樣品單位)=(已知樣品單位÷試劑YZ百分率)×50%

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