資料庫
大鼠乙酰膽堿酯酶(AChE)ELISA試劑盒
-
本文由 整理匯編
2013-12-09 00:00 204閱讀次數(shù)
文檔僅可預覽首頁內(nèi)容,請下載后查看全文信息!
-
立即下載
大鼠乙酰膽堿酯酶(AChE)ELISA試劑盒
登錄或新用戶注冊
請用手機微信掃描下方二維碼
快速登錄或注冊新賬號
微信掃碼,手機電腦聯(lián)動
更多資料
-
大鼠乙酰膽堿酯酶(AChE)ELISA試劑盒
- 大鼠乙酰膽堿酯酶(AChE)ELISA試劑盒[詳細]
-
2013-12-09 00:00
期刊論文
-
人乙酰膽堿酯酶(AChE)ELISA試劑盒
- 人乙酰膽堿酯酶(AChE)ELISA試劑盒[詳細]
-
2013-12-06 00:00
課件
-
裸鼠乙酰膽堿酯酶(AChE) ELISA試劑盒操作方法
- 裸鼠乙酰膽堿酯酶(AChE) ELISA試劑盒操作方法[詳細]
-
2015-06-10 00:00
產(chǎn)品樣冊
-
裸鼠乙酰膽堿酯酶(AChE) ELISA試劑盒操作方法
- 裸鼠乙酰膽堿酯酶(AChE) ELISA試劑盒操作方法[詳細]
-
2015-04-20 00:00
選購指南
-
裸鼠乙酰膽堿酯酶(AChE) ELISA試劑盒操作方法
- 裸鼠乙酰膽堿酯酶(AChE) ELISA試劑盒操作方法[詳細]
-
2015-03-23 00:00
操作手冊
-
人乙酰膽堿酯酶(AchE)ELISA試劑盒使用說明書
- 人乙酰膽堿酯酶(AchE)ELISA試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中乙酰膽堿酯酶(AchE)含量。實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人乙酰膽堿酯酶(AchE)水平。用純化的人乙酰膽堿酯酶(AchE)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被的微孔中依次加入乙酰膽堿酯酶(AchE),再與HRP標記的乙酰膽堿酯酶(AchE)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乙酰膽堿酯酶(AchE)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人乙酰膽堿酯酶(AchE)含量。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存標準品:2250nmol/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐3?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。操作步驟標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在**、第二孔中分別加標準品100μl,然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為1500nmol/L,1000nmol/L,500nmol/L,250nmol/L,125nmol/L)。加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。注意事項:試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。2.批內(nèi)與批間應分別小于9%和11%檢測范圍:100nmol/L-2000nmol/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
-
2018-11-07 14:16
產(chǎn)品樣冊
-
大鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒
- 大鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒[詳細]
-
2024-09-30 11:45
選購指南
-
大鼠煙堿型乙酰膽堿受體(N-AChR)ELISA試劑盒
- 大鼠煙堿型乙酰膽堿受體(N-AChR)ELISA試劑盒[詳細]
-
2013-12-09 00:00
標準
-
大鼠毒蕈堿型乙酰膽堿受體(M-AChR)ELISA試劑盒
- 大鼠毒蕈堿型乙酰膽堿受體(M-AChR)ELISA試劑盒[詳細]
-
2013-12-09 00:00
應用文章
-
大鼠磷酸化乙酰輔酶A羧化酶(pACCase)ELISA試劑盒
- 大鼠磷酸化乙酰輔酶A羧化酶(pACCase)ELISA試劑盒[詳細]
-
2024-09-28 00:51
選購指南
-
組織乙酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)
- 組織乙酰膽堿酯酶活性比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品說明書(中文版)[詳細]
-
2015-05-28 00:00
期刊論文
-
Fluoro AChE檢測試劑盒
- 貨號品名規(guī)格2017年價格AChE100-2FluoroAChE-100tests100Tests7225產(chǎn)品描述:保存溫度:2-8度主要優(yōu)點:無需放射性物質(zhì)。應用-流式細胞儀或熒光顯微鏡。檢測細胞水平的細胞溶解活性。適用于多種類型的哺乳動物細胞系。技術(shù)測量CMC/ADCCZ常用的方法是放射性鉻-51(51Cr)釋放試驗(2)。該測定有幾個缺點:昂貴的,難以加載某些細胞類型,由于嚴格的環(huán)境規(guī)定而處置昂貴,并且具有51Cr自發(fā)釋放的高背景。使用流式細胞儀,現(xiàn)在可以消除對放射性物質(zhì)的需要,并增加在單個細胞基底上定量細胞溶解活性的能力。各組已經(jīng)證明通過流式細胞術(shù)測量CMC/ADCC活性與傳統(tǒng)的51Cr釋放測定(3,4,5,6)具有強烈(95%)的相關(guān)性。測定原理細胞跟蹤染料CFSE(7,8,9)用于標記靶細胞群體。在測定完成實驗方案后,加入7AAD(活/死)(10,11)以測量細胞死亡。7AAD僅進入膜受損細胞并與DNA結(jié)合。流式細胞術(shù)用于門靶細胞并測量7AAD陰性對7AAD后細胞。%細胞毒性通過以下等式計算(參見下面的實驗例):7AAD正(右上象限)=R1/7AADPostitve(右上象限)=R1+7AAD負(右下象限)=R2×100ACT1為了測試豬gd淋巴細胞的自然殺傷能力,將K562細胞染色并調(diào)整至含有10%FBS的1×104個細胞/100μlPRMI的終濃度。以25:1,50:1和100:1的E/T比加入gd淋巴細胞,調(diào)節(jié)至400μlRPMI的總體積,然后在37℃,無菌封蓋的面管中孵育4小時。孵育后,將活/死染色劑直接加入每個管中,在冰上孵育15分鐘并通過流式細胞術(shù)分析。引用文獻a.Perussia,B.,(1998).CurrentTopicsinMicrobiologyandImmunology230,p63.b.Whiteside,T.L.,Rinaldo,C.R.andHerberman,R.B.(1992)CytolyticCellfunctions.In:N.R.Rose,E.C.deMacario(Eds.),ManualofClinicalLaboratoryImmunology.AmericanSocietyforMicrobiology.Washington,DC,p.220.Brunner,K.T.,Manuel,J.,Cerotini,J.C.,Chapuis,B.,(1968).QuantitativeAssayoftheLyticActionofImmuneLymphoidCellsonCr-labelledAllogenicTargetCellsin-vitro;InhibitionbyIso-antibodyandbyDrugs,Immunology14,181.Lee-MacAry,A.E.,Ross,E.L,Davies,D.,andWilkinson,R.W.,(2001).DevelopmentofaNovelFlowCytometricCell-mediatedCytotoxcityAssayUsingtheFluorophoresPKH-26andTO-PRO-3Iodide.J.Immunology.Met252,83-92.Gogoy-Ramirez,K.,Franck,K.,andGains,H.,(2000).ANovelMethodfortheSimultaneousAssessmentofNaturalKillerCellConjugateFormationandCytotoxicityattheSingle-cellLevelbyMulti-parameterFlowCytometry.JournalofImmunology.Met239,35-44.Goldberg,J.E.,Sherwood,S.W.,Clayberger,C.,(1999).ANovelMethodforMeasuringCTLandNKCell-mediatedCytotoxicityUsingAnnexinVandTwo-colorFlowCytometry.JournalofImmunology.Methods224,1.Hatam,L,.Schuval,S.,Bonagura,V.R.,(1994).FlowCytometricAnalysisofNaturalKillerCellFunctionasaClinicalAssay.Cytometry16,59.L.SDeClercketal.,J.Immunol.Meth.172,115(1994).M.Bronner-Fraser,J.CellBiol.101,610(1985).Rabinovitch,P.S.,etal.,J.Immunol.136,2769(1986).Su,X.,J.Immunol.156,156,4198(1996).Olin,MR.Lee,J.Choi,K,andMolitor,Tw.gdT-lymphocyteCytotoxicActivityagainstMycobateriumbovisAnalysedbyFlowCytometry:JournalofImmunologicalMethods;Publicationinprocess.Olin,MR.Thesis,K.Cho,J.andMolitor,T.W.MorphineSuppressesMicroglialDirectedCytolyticActivitybygdLymphocytes.JournalofNeuroimmunology;Publicationinprocess.[詳細]
-
2018-09-29 10:02
產(chǎn)品樣冊
-
大鼠N-乙酰--D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒
- 大鼠N-乙酰--D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA試劑盒[詳細]
-
2013-12-11 00:00
標準
-
大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA檢測試劑盒
- www.biokanu.com本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫(yī)學診斷大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。3.細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。自備物品酶標儀(450nm)高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒溫箱操作注意事項試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再使用。實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。標準品稀釋液即可視為陰性對照或者空白;預處理后的樣本無需稀釋,直接取10μL加樣即可。嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。所有液體組分使用前充分搖勻。試劑盒組成名稱96孔配置48孔配置備注微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無標準品(160U/L)0.6mL0.6mL按說明書進行稀釋標準品稀釋液6mL3mL無樣本稀釋液6mL3mL無檢測抗體-HRP10mL5mL無20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋底物A6mL3mL無底物B6mL3mL無終止液6mL3mL無封板膜2張2張無說明書1份1份無自封袋1個1個無注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:160、80、40、20、10、5U/L試劑的準備20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。洗板方法手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。操作步驟從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;隨后標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。結(jié)果判斷繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。試劑盒性能1.準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。2.靈敏度:Zdi檢測濃度小于1.0U/L。3.特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應。4.重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。5.貯藏:2-8℃,避光防潮保存。6.有效期:6個月免責聲明1.試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。2.嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。[詳細]
-
2018-09-22 10:00
產(chǎn)品樣冊
-
雞乙酰乙酸檢測(ACAC)ELISA試劑盒
- 雞乙酰乙酸檢測(ACAC)ELISA試劑盒[詳細]
-
2013-12-13 00:00
安裝說明
-
豬乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒
- 豬乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒[詳細]
-
2013-12-11 00:00
實驗操作
-
人乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒
- 人乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒[詳細]
-
2013-12-06 00:00
應用文章
-
人乙酰肝素酶(HPA)ELISA試劑盒
- 人乙酰肝素酶(HPA)ELISA試劑盒[詳細]
-
2013-12-05 00:00
課件
-
人乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒
- 人乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA試劑盒[詳細]
-
2015-01-13 00:00
標準
-
人乙酰肝素酶(HPA)ELISA試劑盒
- 人乙酰肝素酶(HPA)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中人乙酰肝素酶(HPA)含量。實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人乙酰肝素酶(HPA)水平。用純化的人乙酰肝素酶(HPA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入乙酰肝素酶(HPA),再與HRP標記的乙酰肝素酶(HPA)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的乙酰肝素酶(HPA)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人乙酰肝素酶(HPA)濃度。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存標準品0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。操作步驟:1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在**、第二孔中分別加標準品100μl,然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。注意事項:1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
-
2018-10-19 10:00
產(chǎn)品樣冊
Copyright 2004-2026 yiqi.com All Rights Reserved , 未經(jīng)書面授權(quán) , 頁面內(nèi)容不得以任何形式進行復制
參與評論
登錄后參與評論