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豬傳染性胃腸炎(TGEV)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書

本文由 研域(上海)化學(xué)試劑有限公司 整理匯編

2018-09-14 10:00 275閱讀次數(shù)

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豬傳染性胃腸炎(TGEV)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。使用目的:本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中傳染性胃腸炎(TGEV)的含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用間接法測定標(biāo)本中豬傳染性胃腸炎(TGEV)水平。用純化的豬傳染性胃腸炎(TGEV)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入已知濃度的傳染性胃腸炎(TGEV)標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的傳染性胃腸炎(TGEV)待檢樣品,溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的傳染性胃腸炎(TGEV)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中豬傳染性胃腸炎(TGEV)濃度。豬傳染性胃腸炎(TGEV)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒組成標(biāo)本要求1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。2.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融豬傳染性胃腸炎(TGEV)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒操作步驟1.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。然后在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl,在樣本反應(yīng)孔中加入50微升樣本,蓋上封板膜,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。3.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用4.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)4次,拍干。5.加生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體:每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘6.洗滌:操作同4。7.加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。8.洗滌:操作同4。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值待入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔**孔的OD值),請先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。豬傳染性胃腸炎(TGEV)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒線性范圍:7.5U/L-240U/L規(guī)格:96豬份/盒保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。2.有效期:6個月

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