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嘔吐毒素(vomitoxin)檢測說明書
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2024-09-28 06:59 2046閱讀次數(shù)
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嘔吐毒素(vomitoxin)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用1使用目的:本試劑盒用于各種谷物、飼料、麥芽啤酒和麥芽汁中嘔吐毒素(vomitoxin)殘留的定量檢測。2實驗原理本試劑盒采用競爭ELISA方法,在微孔板包被有嘔吐毒素(vomitoxin)偶聯(lián)抗原,加入嘔吐毒素(vomitoxin)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離嘔吐毒素(vomitoxin)與微孔條上預(yù)包被的嘔吐毒素(vomitoxin)偶聯(lián)抗原互相競爭抗嘔吐毒素(vomitoxin)抗體酶標(biāo)記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測,吸光值與樣品中嘔吐毒素(vomitoxin)含量成反比,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中嘔吐毒素(vomitoxin)的含量。3試劑盒組成3.1預(yù)包被的嘔吐毒素(vomitoxin)偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1塊(12孔×8條)。3.2嘔吐毒素(vomitoxin)標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。3.3抗嘔吐毒素(vomitoxin)抗體酶結(jié)合物:1瓶(6ml)。3.4顯色液A:1瓶(6ml)。3.5顯色液B:1瓶(6ml)。3.6終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。3.7樣本稀釋液:1瓶(10×,6ml),用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。3.9說明書一份。4需要而未提供的材料4.1設(shè)備4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀。4.1.2粉碎機(jī)。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相當(dāng)?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2甲醇。5貯存5.1試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍5.2未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存6注意事項6.1使用試劑盒前請仔細(xì)閱讀說明書。6.2不要使用過期試劑盒。6.3試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時。6.4標(biāo)準(zhǔn)品中含有嘔吐毒素(vomitoxin),使用時應(yīng)特別注意,操作時應(yīng)帶手套。6.5終止液中含有硫酸,使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用,否則會影響試驗結(jié)果。6.7不同批號試劑盒中的試劑不得混用;不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用,否則會影響實驗結(jié)果。6.8稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會影響實驗結(jié)果6.9混合試劑時應(yīng)避免起泡。7工作液準(zhǔn)備7.1嘔吐毒素(vomitoxin)標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb7.2濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用7.3樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用7.3顯色劑:已備用,避免光線直照7.4反應(yīng)終止液:已備用8樣品處理:(樣品在提取過程中,要嚴(yán)格按說明書操作,提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,否則會出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)一般樣品處理8.1取10g粉碎的樣品,加20ml70%甲醇溶液8.2QL振蕩3分鐘8.3用WhatmanNo1濾紙過濾8.4取100l處理后的樣品,加入400l樣本稀釋液8.5取100μl稀釋液進(jìn)行分析動物組織前處理8.6準(zhǔn)確稱取1±0.05g勻漿后的組織樣品到50ml的聚苯乙烯離心管中;加入3ml乙腈--丙酮提取溶液,2000rpm劇烈震蕩20s后4000r/min以上離心5min8.7取上清液0.8ml在50℃氮?dú)饬飨麓蹈?.8加入3.2mL樣品稀釋液,750rpm渦旋20s8.9取100ml用于分析飼料前處理方法8.10準(zhǔn)確稱取1±0.05g粉碎飼料樣品到50ml的聚苯乙烯離心管中;加入4ml乙腈,1ml丙酮,2000rpm劇烈震蕩20s后4000r/min以上離心3min8.11取上清液0.7ml在50℃氮?dú)饬飨麓蹈?.12加入2.8mL樣品稀釋液,渦旋20s,混勻后取100ml用于分析牛奶前處理方法8.13取1ml牛奶樣品到5ml聚苯乙烯離心管中;加入4ml樣品稀釋液,混勻后取100ml用于分析奶粉前處理方法8.14準(zhǔn)確稱取0.3g奶粉樣品到7ml的聚苯乙烯離心管中;加入2mlPBS溶液,2ml正己烷,震蕩混勻8.154000r/min以上離心5min,去除有機(jī)層和中間層,取下層溶液100ml到400ml樣品稀釋液8.16混勻后取100ml用于分析9酶免分析步驟9.1實驗須知9.1.1實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),時間約2小時?;販刂潦覝兀?5±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的極ng確度和準(zhǔn)確度。9.1.2使用后請立即將試劑放回2~8℃保存9.1.3請不要改變分析程序9.1.4請使用極ng確的微量移液器9.1.5操作一旦開始,請不要中斷任何程序9.1.6ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請嚴(yán)格按照要求操作9.1.7為避免交叉污染,每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣9.1.8加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面9.2分析步驟9.2.1預(yù)先進(jìn)行編號,標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,推薦進(jìn)行雙孔檢測9.2.2取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3樣品稀釋液、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)9.2.4在B0孔中加入50l0.0ppb標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.5在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.6在各樣品孔中加入50l樣品溶液9.2.7在所有孔中加入50l的抗嘔吐毒素(vomitoxin)抗體酶結(jié)合物9.2.8輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘。9.337℃溫浴30min(溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)9.3.1甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,Z后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。9.4反應(yīng)9.4.1洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50l顯色液A,再加50l顯色液B;輕微晃動反應(yīng)板使之徹底混勻9.4.237℃溫浴10min9.4.3每孔中加入50l終止液,混勻9.4.4在450nm下檢測吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。10結(jié)果計算10.1定量分析10.1.1所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以**個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以1**%,即百分吸光度值。B標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B00ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值10.1.2以嘔吐毒素(vomitoxin)濃度的對數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo),即為嘔吐毒素(vomitoxin)濃度的對數(shù)值,求得反對數(shù)即為測定液中嘔吐毒素(vomitoxin)濃度C(ppb)10.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。10.2半定量測定10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。11特異性物質(zhì)交叉反應(yīng)嘔吐毒素(vomitoxin)1**%12試劑盒參數(shù)本試劑盒檢測下限為0.1ppbB0吸光度**值應(yīng)大于1.0試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。13標(biāo)準(zhǔn)曲線模式(僅供參考)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.1ppb~8.1ppb。14分析限制本試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。
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- 嘔吐毒素(vomitoxin)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用1使用目的:本試劑盒用于各種谷物、飼料、麥芽啤酒和麥芽汁中嘔吐毒素(vomitoxin)殘留的定量檢測。2實驗原理本試劑盒采用競爭ELISA方法,在微孔板包被有嘔吐毒素(vomitoxin)偶聯(lián)抗原,加入嘔吐毒素(vomitoxin)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離嘔吐毒素(vomitoxin)與微孔條上預(yù)包被的嘔吐毒素(vomitoxin)偶聯(lián)抗原互相競爭抗嘔吐毒素(vomitoxin)抗體酶標(biāo)記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測,吸光值與樣品中嘔吐毒素(vomitoxin)含量成反比,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中嘔吐毒素(vomitoxin)的含量。3試劑盒組成3.1預(yù)包被的嘔吐毒素(vomitoxin)偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1塊(12孔×8條)。3.2嘔吐毒素(vomitoxin)標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。3.3抗嘔吐毒素(vomitoxin)抗體酶結(jié)合物:1瓶(6ml)。3.4顯色液A:1瓶(6ml)。3.5顯色液B:1瓶(6ml)。3.6終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。3.7樣本稀釋液:1瓶(10×,6ml),用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。3.9說明書一份。4需要而未提供的材料4.1設(shè)備4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀。4.1.2粉碎機(jī)。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相當(dāng)?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2甲醇。5貯存5.1試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍5.2未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存6注意事項6.1使用試劑盒前請仔細(xì)閱讀說明書。6.2不要使用過期試劑盒。6.3試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時。6.4標(biāo)準(zhǔn)品中含有嘔吐毒素(vomitoxin),使用時應(yīng)特別注意,操作時應(yīng)帶手套。6.5終止液中含有硫酸,使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用,否則會影響試驗結(jié)果。6.7不同批號試劑盒中的試劑不得混用;不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用,否則會影響實驗結(jié)果。6.8稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會影響實驗結(jié)果6.9混合試劑時應(yīng)避免起泡。7工作液準(zhǔn)備7.1嘔吐毒素(vomitoxin)標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb7.2濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用7.3樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用7.3顯色劑:已備用,避免光線直照7.4反應(yīng)終止液:已備用8樣品處理:(樣品在提取過程中,要嚴(yán)格按說明書操作,提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,否則會出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)一般樣品處理8.1取10g粉碎的樣品,加20ml70%甲醇溶液8.2QL振蕩3分鐘8.3用WhatmanNo1濾紙過濾8.4取100l處理后的樣品,加入400l樣本稀釋液8.5取100μl稀釋液進(jìn)行分析動物組織前處理8.6準(zhǔn)確稱取1±0.05g勻漿后的組織樣品到50ml的聚苯乙烯離心管中;加入3ml乙腈--丙酮提取溶液,2000rpm劇烈震蕩20s后4000r/min以上離心5min8.7取上清液0.8ml在50℃氮?dú)饬飨麓蹈?.8加入3.2mL樣品稀釋液,750rpm渦旋20s8.9取100ml用于分析飼料前處理方法8.10準(zhǔn)確稱取1±0.05g粉碎飼料樣品到50ml的聚苯乙烯離心管中;加入4ml乙腈,1ml丙酮,2000rpm劇烈震蕩20s后4000r/min以上離心3min8.11取上清液0.7ml在50℃氮?dú)饬飨麓蹈?.12加入2.8mL樣品稀釋液,渦旋20s,混勻后取100ml用于分析牛奶前處理方法8.13取1ml牛奶樣品到5ml聚苯乙烯離心管中;加入4ml樣品稀釋液,混勻后取100ml用于分析奶粉前處理方法8.14準(zhǔn)確稱取0.3g奶粉樣品到7ml的聚苯乙烯離心管中;加入2mlPBS溶液,2ml正己烷,震蕩混勻8.154000r/min以上離心5min,去除有機(jī)層和中間層,取下層溶液100ml到400ml樣品稀釋液8.16混勻后取100ml用于分析9酶免分析步驟9.1實驗須知9.1.1實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),時間約2小時?;販刂潦覝兀?5±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的極ng確度和準(zhǔn)確度。9.1.2使用后請立即將試劑放回2~8℃保存9.1.3請不要改變分析程序9.1.4請使用極ng確的微量移液器9.1.5操作一旦開始,請不要中斷任何程序9.1.6ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請嚴(yán)格按照要求操作9.1.7為避免交叉污染,每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣9.1.8加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面9.2分析步驟9.2.1預(yù)先進(jìn)行編號,標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,推薦進(jìn)行雙孔檢測9.2.2取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3樣品稀釋液、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)9.2.4在B0孔中加入50l0.0ppb標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.5在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.6在各樣品孔中加入50l樣品溶液9.2.7在所有孔中加入50l的抗嘔吐毒素(vomitoxin)抗體酶結(jié)合物9.2.8輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘。9.337℃溫浴30min(溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)9.3.1甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,Z后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。9.4反應(yīng)9.4.1洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50l顯色液A,再加50l顯色液B;輕微晃動反應(yīng)板使之徹底混勻9.4.237℃溫浴10min9.4.3每孔中加入50l終止液,混勻9.4.4在450nm下檢測吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。10結(jié)果計算10.1定量分析10.1.1所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以**個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以1**%,即百分吸光度值。B標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B00ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值10.1.2以嘔吐毒素(vomitoxin)濃度的對數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo),即為嘔吐毒素(vomitoxin)濃度的對數(shù)值,求得反對數(shù)即為測定液中嘔吐毒素(vomitoxin)濃度C(ppb)10.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。10.2半定量測定10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。11特異性物質(zhì)交叉反應(yīng)嘔吐毒素(vomitoxin)1**%12試劑盒參數(shù)本試劑盒檢測下限為0.1ppbB0吸光度**值應(yīng)大于1.0試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。13標(biāo)準(zhǔn)曲線模式(僅供參考)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.1ppb~8.1ppb。14分析限制本試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。[詳細(xì)]
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嘔吐毒素(vomitoxin)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)說明書
- 此說明書為PDF格式,請下載參閱!嘔吐毒素(vomitoxin)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用1使用目的:本試劑盒用于各種谷物、飼料、麥芽啤酒和麥芽汁中嘔吐毒素(vomitoxin)殘留的定量檢測。2實驗原理本試劑盒采用競爭ELISA方法,在微孔板包被有嘔吐毒素(vomitoxin)偶聯(lián)抗原,加入嘔吐毒素(vomitoxin)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離嘔吐毒素(vomitoxin)與微孔條上預(yù)包被的嘔吐毒素(vomitoxin)偶聯(lián)抗原互相競爭抗嘔吐毒素(vomitoxin)抗體酶標(biāo)記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測,吸光值與樣品中嘔吐毒素(vomitoxin)含量成反比,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中嘔吐毒素(vomitoxin)的含量。3試劑盒組成3.1預(yù)包被的嘔吐毒素(vomitoxin)偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1塊(12孔×8條)。3.2嘔吐毒素(vomitoxin)標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb。3.3抗嘔吐毒素(vomitoxin)抗體酶結(jié)合物:1瓶(6ml)。3.4顯色液A:1瓶(6ml)。3.5顯色液B:1瓶(6ml)。3.6終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。3.7樣本稀釋液:1瓶(10×,6ml),用于樣品稀釋用。3.8濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。3.9說明書一份。4需要而未提供的材料4.1設(shè)備4.1.1波長450nm酶標(biāo)儀。4.1.2粉碎機(jī)。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。4.1.6WhatmanNo1或相當(dāng)?shù)臑V紙。4.1.7微量移液器。4.2試劑4.2.1去離子水或蒸餾水。4.2.2甲醇。5貯存5.1試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍5.2未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存6注意事項6.1使用試劑盒前請仔細(xì)閱讀說明書。6.2不要使用過期試劑盒。6.3試劑盒使用前,將試劑恢復(fù)至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時。6.4標(biāo)準(zhǔn)品中含有嘔吐毒素(vomitoxin),使用時應(yīng)特別注意,操作時應(yīng)帶手套。6.5終止液中含有硫酸,使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。6.6不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用,否則會影響試驗結(jié)果。6.7不同批號試劑盒中的試劑不得混用;不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用,否則會影響實驗結(jié)果。6.8稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會影響實驗結(jié)果6.9混合試劑時應(yīng)避免起泡。7工作液準(zhǔn)備7.1嘔吐毒素(vomitoxin)標(biāo)準(zhǔn)品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb7.2濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用7.3樣本稀釋液:用蒸餾水按1:10(1+9)稀釋備用7.3顯色劑:已備用,避免光線直照7.4反應(yīng)終止液:已備用8樣品處理:(樣品在提取過程中,要嚴(yán)格按說明書操作,提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋,否則會出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確,樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存)一般樣品處理8.1取10g粉碎的樣品,加20ml70%甲醇溶液8.2QL振蕩3分鐘8.3用WhatmanNo1濾紙過濾8.4取100l處理后的樣品,加入400l樣本稀釋液8.5取100μl稀釋液進(jìn)行分析動物組織前處理8.6準(zhǔn)確稱取1±0.05g勻漿后的組織樣品到50ml的聚苯乙烯離心管中;加入3ml乙腈--丙酮提取溶液,2000rpm劇烈震蕩20s后4000r/min以上離心5min8.7取上清液0.8ml在50℃氮?dú)饬飨麓蹈?.8加入3.2mL樣品稀釋液,750rpm渦旋20s8.9取100ml用于分析飼料前處理方法8.10準(zhǔn)確稱取1±0.05g粉碎飼料樣品到50ml的聚苯乙烯離心管中;加入4ml乙腈,1ml丙酮,2000rpm劇烈震蕩20s后4000r/min以上離心3min8.11取上清液0.7ml在50℃氮?dú)饬飨麓蹈?.12加入2.8mL樣品稀釋液,渦旋20s,混勻后取100ml用于分析牛奶前處理方法8.13取1ml牛奶樣品到5ml聚苯乙烯離心管中;加入4ml樣品稀釋液,混勻后取100ml用于分析奶粉前處理方法8.14準(zhǔn)確稱取0.3g奶粉樣品到7ml的聚苯乙烯離心管中;加入2mlPBS溶液,2ml正己烷,震蕩混勻8.154000r/min以上離心5min,去除有機(jī)層和中間層,取下層溶液100ml到400ml樣品稀釋液8.16混勻后取100ml用于分析9酶免分析步驟9.1實驗須知9.1.1實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),時間約2小時?;販刂潦覝兀?5±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的極ng確度和準(zhǔn)確度。9.1.2使用后請立即將試劑放回2~8℃保存9.1.3請不要改變分析程序9.1.4請使用極ng確的微量移液器9.1.5操作一旦開始,請不要中斷任何程序9.1.6ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請嚴(yán)格按照要求操作9.1.7為避免交叉污染,每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣9.1.8加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面9.2分析步驟9.2.1預(yù)先進(jìn)行編號,標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,推薦進(jìn)行雙孔檢測9.2.2取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存9.2.3樣品稀釋液、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)9.2.4在B0孔中加入50l0.0ppb標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.5在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液9.2.6在各樣品孔中加入50l樣品溶液9.2.7在所有孔中加入50l的抗嘔吐毒素(vomitoxin)抗體酶結(jié)合物9.2.8輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘。9.337℃溫浴30min(溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)9.3.1甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,Z后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。9.4反應(yīng)9.4.1洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50l顯色液A,再加50l顯色液B;輕微晃動反應(yīng)板使之徹底混勻9.4.237℃溫浴10min9.4.3每孔中加入50l終止液,混勻9.4.4在450nm下檢測吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。10結(jié)果計算10.1定量分析10.1.1所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以**個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以1**%,即百分吸光度值。B標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值B00ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值10.1.2以嘔吐毒素(vomitoxin)濃度的對數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo),即為嘔吐毒素(vomitoxin)濃度的對數(shù)值,求得反對數(shù)即為測定液中嘔吐毒素(vomitoxin)濃度C(ppb)10.1.3由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。10.2半定量測定10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。11特異性物質(zhì)交叉反應(yīng)嘔吐毒素(vomitoxin)1**%12試劑盒參數(shù)本試劑盒檢測下限為0.1ppbB0吸光度**值應(yīng)大于1.0試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。13標(biāo)準(zhǔn)曲線模式(僅供參考)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0.1ppb~8.1ppb。14分析限制本試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。[詳細(xì)]
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2018-09-03 10:00
產(chǎn)品樣冊
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嘔吐毒素(vomitoxin)快速檢測ELISA試劑盒操作流程圖
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2015-04-23 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
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嘔吐毒素快速檢測卡
- 訂貨號:R5904產(chǎn)品名稱:嘔吐毒素快速檢測卡產(chǎn)品英文名稱:QUICKDON包裝:25次產(chǎn)品介紹:請下載產(chǎn)品說明:嘔吐毒素快速檢測卡,免疫色譜法,5分鐘出結(jié)果,檢測限1ppm可以調(diào)節(jié)稀釋比例,改變檢測限[詳細(xì)]
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2018-09-15 10:00
產(chǎn)品樣冊
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嘔吐毒素ELISA檢測試劑盒
- 嘔吐毒素ELISA檢測試劑盒[詳細(xì)]
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2024-09-28 13:20
專利
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嘔吐毒素免疫親和柱說明書
- 資料名稱:嘔吐毒素免疫親和柱說明書
適用產(chǎn)品:嘔吐毒素免疫親和柱
正文語言:中文
文件編號:BP016-2
文件版本:2.0
文件格式:PDF
文件大小:0. 8MB
內(nèi)容簡介:嘔吐毒素免疫親和柱適用于基質(zhì)復(fù)雜、限量要求低的樣品中嘔吐毒素檢測的凈化??梢赃M(jìn)行TLC、HPLC、GC、LC-MS/MS、EIA等定量分析,適合谷物、食品和飼料等樣品。[詳細(xì)]
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2024-10-06 01:43
其它
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嘔吐毒素免疫親和柱
- 嘔吐毒素免疫親和柱[詳細(xì)]
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2012-08-23 00:00
期刊論文
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酶標(biāo)儀檢測飼料中嘔吐毒素的方案!
- 酶標(biāo)儀檢測飼料中嘔吐毒素是基于競爭性酶聯(lián)免疫吸附檢測法。用水震蕩萃取粉碎樣品中的DON,過濾水相萃取物,然后進(jìn)行免疫學(xué)檢測。加入嘔吐毒素的酶標(biāo)記物到已加有標(biāo)準(zhǔn)或樣品的測試孔中,抗體被加入后反應(yīng)開始,樣品及酶標(biāo)記物競爭結(jié)合連接在微孔上的抗體,10分鐘培養(yǎng)后,倒掉孔中的溶液,洗掉微孔中未結(jié)合的嘔吐毒素和酶標(biāo)記物。加入無色的底物溶液,培養(yǎng)5分鐘,所有結(jié)合的酶標(biāo)記物使底物轉(zhuǎn)化成藍(lán)色物質(zhì)。加入停止液然后讀取吸光度值,未知濃度樣品與標(biāo)準(zhǔn)吸光度值進(jìn)行比較,就可以得到樣品的嘔吐毒素濃度。[詳細(xì)]
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2018-11-18 10:00
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2024-10-09 03:18
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2018-12-15 10:00
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黃曲霉毒素B1檢測試紙說明書
- 【簡介】黃曲霉毒素B1(AflatoxinB1簡寫為AFB1)是目前已知的化學(xué)物質(zhì)中致癌性Z強(qiáng)的一種。黃曲霉毒素B1對人和若干動物具有強(qiáng)烈的毒性,其毒性作用主要是對肝臟的損害。國家質(zhì)檢總局規(guī)定黃曲霉毒素B1是大部分食品的必檢項目之一。本品的檢測靈敏度為5ng/ml。【測定原理】本品采用高度特異性的抗體抗原反應(yīng)及免疫層析分析技術(shù),通過單克隆抗體競爭結(jié)合AFB1-BSA偶聯(lián)物和樣品中可能含有的AFB1的原理。試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)(T)的AFB1-BSA偶聯(lián)物和被膠體金標(biāo)記的抗AFB1單克隆抗體。[詳細(xì)]
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2018-08-19 10:00
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黃曲霉毒素B1檢測試劑盒說明書
- 深圳市芬析儀器制造有限公司黃曲霉毒素B1檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測谷物、飼料等樣品中的黃曲霉毒素B1(AflatoxinB1,AFB1),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的黃曲霉毒素B1和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗黃曲霉毒素B1抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含黃曲霉毒素B1含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中黃曲霉毒素B1的殘留量。[詳細(xì)]
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2018-11-03 10:00
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2024-09-29 06:31
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2015-03-20 00:00
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人(Human) 黃曲霉毒素(Aflatoxin)ELISA 檢測試劑盒說明書
- 人(Human)黃曲霉毒素(Aflatoxin)ELISA檢測試劑盒本試劑僅供研究使用標(biāo)本:血清或血漿試驗原理:Aflatoxin試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知Aflatoxin濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將Aflatoxin和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中Aflatoxin的濃度呈比例關(guān)系。試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48人份酶標(biāo)板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型標(biāo)準(zhǔn)品:40ng/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進(jìn)行稀稀空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素標(biāo)記的抗Aflatoxin抗體1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型親和鏈酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進(jìn)行稀釋底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型標(biāo)本稀釋液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型自備材料1.蒸餾水。2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。3.振蕩器及磁力攪拌器等。安全性1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。2.實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項1.試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。2.實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。3.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。6.洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。7.底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。8.加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。9.按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。樣品收集、處理及保存方法1、血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液5、保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準(zhǔn)備1.標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準(zhǔn)備,不能儲存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行:40ng/ml(6號標(biāo)準(zhǔn)品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。20ng/ml(5號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10ng/ml(4號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液5.0ng/ml(3號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.5ng/ml(2號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.25ng/ml(1號標(biāo)準(zhǔn)品)100ul的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0ng/ml(空白對照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。操作步驟1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。4.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。6.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。8.取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。9.在450nm波長處測定各孔的OD值。建議使用的實驗方案標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)A4040樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品B2020樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品C1010樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品D5.05.0樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品E2.52.5樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品F1.251.25樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品局限6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到極ng確的結(jié)果。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。3.重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。結(jié)果判斷與分析1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的Aflatoxin標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的Aflatoxin含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。3、檢測值范圍:0-40ng/ml4、敏感度:0.1ng/ml[詳細(xì)]
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2018-09-14 10:01
產(chǎn)品樣冊
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小麥中黃曲霉毒素的檢測(毒素凈化柱)
- 小麥中黃曲霉毒素的檢測(毒素凈化柱)[詳細(xì)]
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2024-09-15 18:16
期刊論文
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