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ELISA試劑檢測中如何進行質(zhì)控
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本文由 上海滬宇生物科技有限公司 整理匯編
2018-10-08 10:01 842閱讀次數(shù)
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質(zhì)量控制(QuailityControl,Q.C)質(zhì)量控制是監(jiān)視全過程,排除誤差,防止變化,維持標準化現(xiàn)狀的一個管理過程。這一過程是通過一個反饋環(huán)路進行的?! ?)確定控制的對象; 2)規(guī)定控制對象的標準(預(yù)期值); 3)制定或選擇控制方法和手段; 3)測量實際數(shù)據(jù); 4)比較或較對實際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異,并說明產(chǎn)生這一差異的原因。超出預(yù) 定誤差范圍,報警系發(fā)出信號,反饋通道中斷?! ?)采取行動,解決差異?;謴?fù)原狀(原標準狀態(tài))的手段發(fā)揮作用。更多資料請下載文件elisa試劑盒
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ELISA試劑檢測中如何進行質(zhì)控
- 質(zhì)量控制(QuailityControl,Q.C)質(zhì)量控制是監(jiān)視全過程,排除誤差,防止變化,維持標準化現(xiàn)狀的一個管理過程。這一過程是通過一個反饋環(huán)路進行的?! ?)確定控制的對象; 2)規(guī)定控制對象的標準(預(yù)期值); 3)制定或選擇控制方法和手段; 3)測量實際數(shù)據(jù); 4)比較或較對實際數(shù)據(jù)與預(yù)期值之間的差異,并說明產(chǎn)生這一差異的原因。超出預(yù) 定誤差范圍,報警系發(fā)出信號,反饋通道中斷?! ?)采取行動,解決差異?;謴?fù)原狀(原標準狀態(tài))的手段發(fā)揮作用。更多資料請下載文件elisa試劑盒[詳細]
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2018-10-08 10:01
產(chǎn)品樣冊
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elisa試劑檢測中如何保溫?
- elisa試劑檢測中如何保溫:在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標本和加酶結(jié)合物后??乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當(dāng)。ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機會,只有Z貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經(jīng)擴散才能達到反應(yīng)的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時間的溫育。更多資料請下載文件小鼠elisa試劑盒[詳細]
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2018-10-08 10:01
產(chǎn)品樣冊
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WB實驗總做不好,那么如何進行WB實驗質(zhì)控呢?
- 做過WB實驗的小伙伴都經(jīng)歷過成像時忐忑不安,出來結(jié)果時的彷徨無措,為什么條帶沒有出啦,為什么背景這么高,為什么受傷的總是我,看著旁邊小伙伴漂亮的結(jié)果圖,心生羨慕嫉妒,那么小編給大家整理總結(jié)了如何進行WB的質(zhì)控和注意哪些檢查點。[詳細]
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2019-10-15 11:10
實驗操作
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Elisa試劑盒的質(zhì)控
- Elisa試劑盒的質(zhì)控,室內(nèi)質(zhì)控點的選擇,以需要設(shè)置質(zhì)控的點,設(shè)置質(zhì)控物進行質(zhì)控為原則。病毒性肝炎酶免疫檢驗中,有高值、中值、低值的質(zhì)控物,我們認為其中以低值的質(zhì)控物為Z重要,設(shè)置臨界于cutoff值(CO值)的低值弱陽性質(zhì)控物是室內(nèi)質(zhì)控的關(guān)鍵。ZD抓住低值弱陽性-臨界值血清的室內(nèi)質(zhì)控檢測,是室內(nèi)質(zhì)控精密度觀測的Z敏感的窗口,也是揭示試驗成功與否的重要標志。臨界值血清是室內(nèi)質(zhì)控血清,不是判斷陰、陽性的標準,判斷樣品不是判斷陰、陽性結(jié)果的標準是以試劑盒說明書提供的cutoff值為標準。任何人不能隨意更改試劑盒說明書中提供的判斷陰、陽性結(jié)果的公式。1、cutoff(CO)值又稱臨界值或陽性與陰性界限值CO值計算實例:(以夾心法為例)1)依據(jù)試劑盒說明書規(guī)定S/N≥2.1為陽性.(S:樣品,N:陰性對照)因為S≥N×2.1判斷為陽性,所以S=N×2.1為陰陽性結(jié)果分界點,即CO值.CO(cutoff)值=N×2.1當(dāng)S≥CO值時,判為陽性;S2)樣品結(jié)果表示法:S/CO值S/CO=樣品A值÷CO值當(dāng)S/CO≥1時,判為陽性;S/CO<1時判為陰性。CO值計算實例:ELISA-抗HBc(競爭YZ試驗)依據(jù)試劑盒說明書規(guī)定:(1)S/N≥2.1為陽性.(S:樣本,N:陰性對照)所以S≤N÷2.1,判斷為陽性,當(dāng)S=N÷2.1為陰陽性結(jié)果分界點,即CO值.CO(cutoff)值=N÷2.1當(dāng)S≤CO值時,判為陽性;S>CO值時,判為陰性(2)樣品結(jié)果新表示法:S/CO值當(dāng)S/CO≤1時,判為陽性;,S/CO>1時,判為陰性。2、試劑盒的質(zhì)檢每塊版放置臨界CO值血清做試劑盒質(zhì)檢是十分簡便可行的事。[詳細]
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2024-09-11 17:56
產(chǎn)品樣冊
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ELISA試劑檢測的原理與分類
- 1. ELISA的原理ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,使測定方法達到很高的敏感度。更多資料請下載文件elisa試劑盒[詳細]
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2024-09-29 00:09
產(chǎn)品樣冊
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甲狀旁腺素試劑檢測說明
- 甲狀旁腺素試劑檢測說明本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍::96T5ng/L-160ng/L使用目的::本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中甲狀旁腺素(PTH)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠甲狀旁腺素(PTH)水平。用純化的大鼠甲狀旁腺素(PTH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入甲狀旁腺素(PTH),再與HRP標記的甲狀旁腺素(PTH)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甲狀旁腺素(PTH)抗體呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠甲狀旁腺素(PTH)抗體濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(320ng/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。160ng/L5號標準品150l的原倍標準品加入150l標準品稀釋液80ng/L4號標準品150l的5號標準品加入150l標準品稀釋液40ng/L3號標準品150l的4號標準品加入150l標準品稀釋液20ng/L2號標準品150l的3號標準品加入150l標準品稀釋液10ng/L1號標準品150l的2號標準品加入150l標準品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50l,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l,然后再加待測樣品10l(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50l,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50l,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié)::計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-10-09 10:00
產(chǎn)品樣冊
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弓形蟲試劑檢測說明
- 弓形蟲試劑檢測說明本試劑盒僅供研究使用。96T使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中弓形蟲(Tox)表達。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠弓形蟲(Tox)表達。用純化的大鼠弓形蟲(Tox)抗體包被微孔板,制成固相抗體,可與樣品中弓形蟲(Tox)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的弓形蟲(Tox)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中大鼠弓形蟲(Tox)的存在與否。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8陽性對照0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9陰性對照0.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)2.加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50l。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40l,然后再加待測樣品10l。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50l,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.10.終止:每孔加終止液50l,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié):計算和結(jié)果判定:試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00;陰性對照平均值≤0.10臨界值(CUTOFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15陰性判定:樣品OD值<臨界值(CUTOFF)者為弓形蟲(Tox)陰性陽性判定:樣品OD值≥臨界值(CUTOFF)者為弓形蟲(Tox)陽性。注意事項1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。4.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。5.底物請避光保存。6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-10-09 10:00
產(chǎn)品樣冊
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降鈣素試劑檢測說明
- 降鈣素試劑檢測說明本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T20ng/L-480ng/L使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中降鈣素(CT)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠降鈣素(CT)水平。用純化的大鼠降鈣素(CT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入降鈣素(CT),再與HRP標記的降鈣素(CT)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的降鈣素(CT)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠降鈣素(CT)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(960ng/L)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。480ng/L5號標準品150l的原倍標準品加入150l標準品稀釋液240ng/L4號標準品150l的5號標準品加入150l標準品稀釋液120ng/L3號標準品150l的4號標準品加入150l標準品稀釋液60ng/L2號標準品150l的3號標準品加入150l標準品稀釋液30ng/L1號標準品150l的2號標準品加入150l標準品稀釋液2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50l,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l,然后再加待測樣品10l(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50l,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.10.終止:每孔加終止液50l,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié):計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-10-09 10:00
產(chǎn)品樣冊
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凝血因子試劑檢測說明
- 凝血因子試劑檢測說明本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍:96T0.6U/ml-38U/ml使用目的:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中凝血因子Ⅺ(FⅪ)活性。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠凝血因子Ⅺ(FⅪ)水平。用純化的大鼠凝血因子Ⅺ(FⅪ)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入凝血因子Ⅺ(FⅪ),再與HRP標記的凝血因子Ⅺ(FⅪ)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的凝血因子Ⅺ(FⅪ)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠凝血因子Ⅺ(FⅪ)活性濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液6ml×1瓶2酶標試劑6ml×1瓶8標準品(64U/ml)0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶4樣品稀釋液6ml×1瓶10說明書1份5顯色劑A液6ml×1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6ml×1/瓶12密封袋1個標本要求1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。32U/ml5號標準品150l的原倍標準品加入150l標準品稀釋液16U/ml4號標準品150l的5號標準品加入150l標準品稀釋液8U/ml3號標準品150l的4號標準品加入150l標準品稀釋液4U/ml2號標準品150l的3號標準品加入150l標準品稀釋液2U/ml1號標準品150l的2號標準品加入150l標準品稀釋液IBL2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50l,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l,然后再加待測樣品10l(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50l,空白孔除外。7.溫育:操作同3。8.洗滌:操作同5。9.顯色:每孔先加入顯色劑A50l,再加入顯色劑B50l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.10.終止:每孔加終止液50l,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié):計算以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。9.本試劑不同批號組分不得混用。保存條件及有效期1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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