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藍(lán)色熒光染色體核型分析試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書

本文由 上??茖W(xué)儀器有限公司 整理匯編

2018-11-18 10:00 782閱讀次數(shù)

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主要用途藍(lán)色熒光(DAPI)染色體核型分析試劑是一種旨在通過(guò)使用熒光染料DAPI與染色體DNA的結(jié)合并發(fā)出熒光檢測(cè)信號(hào)來(lái)顯示染色體帶型特征而構(gòu)成細(xì)胞染色體核型的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。該熒光分析是細(xì)胞遺傳學(xué)中的Zxin研究技術(shù)。適用于各種生長(zhǎng)中的動(dòng)物或人體細(xì)胞。產(chǎn)品即到即用,性能穩(wěn)定,熒光清晰。技術(shù)背景作為細(xì)胞DNA染色劑之一的4,6-二咪基-4-聯(lián)苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole;DAPI)特異性地與DNA雙螺旋的凹槽部分發(fā)生相互作用,從而與DNA的雙鏈緊密結(jié)合。結(jié)合后產(chǎn)生的熒光基團(tuán)的吸收峰是358nm而散射峰是461nm,正好是UV(紫外光)的激發(fā)波長(zhǎng)356nm,使得DAPI成為了一種常用的熒光檢測(cè)信號(hào)。通過(guò)DAPI的染色顯示其帶型特征,然后根據(jù)體細(xì)胞中全套染色體形態(tài)特征和大小順序排列,并依次配對(duì)、分組,構(gòu)成該個(gè)體的核型或染色體組型,從而可以識(shí)別和分析染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)量的異常,成為產(chǎn)前診斷或腫瘤細(xì)胞遺傳學(xué)的工具。產(chǎn)品內(nèi)容清理液(ReagentA)毫升滯態(tài)液(ReagentB)毫升低滲液(ReagentC)毫升固定液A(ReagentD)毫升固定液B(ReagentE)毫升預(yù)備液(ReagentF)毫升染色液(ReagentG)毫升抗淬滅劑(ReagentH)毫升產(chǎn)品說(shuō)明書1份保存方式保存滯態(tài)液(ReagentB)和染色液(ReagentG)在-20℃冰箱里,其余的保存在4℃冰箱里;滯態(tài)液(ReagentB)、染色液(ReagentG)和抗淬滅劑(ReagentH),避免光照,有效保證6月用戶自備胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液:用于細(xì)胞脫離完全細(xì)胞培養(yǎng)液:用于細(xì)胞培養(yǎng)無(wú)離子水:用于清洗染色的載玻片50毫升錐形離心管:用于細(xì)胞處理的容器37℃恒溫水槽:用于預(yù)熱試劑溶液臺(tái)式離心機(jī):用于沉淀細(xì)胞小型染色缸:用于載玻片染色的容器載玻片:用于細(xì)胞涂片和染色顯微鏡:用于觀察細(xì)胞分裂和染色體組型實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)開始前,將試劑盒里的固定液A(ReagentD)和B(ReagentE)從4℃的冰箱里取出,移取A液xx毫升和B液xx毫升加入到50毫升錐形離心管,混勻后標(biāo)記成為固定工作液,置入冰槽里。同時(shí)在37℃恒溫水槽里預(yù)熱清理液(ReagentA)、滯態(tài)液(ReagentB)、低滲液(ReagentC)。然后進(jìn)行下列操作。限定細(xì)胞在有絲分裂中期(METAPHASE)1)貼壁細(xì)胞處理抽去鋪滿生長(zhǎng)細(xì)胞的75cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液加入xx毫升清理液(ReagentA)到細(xì)胞培養(yǎng)瓶,覆蓋培養(yǎng)瓶表面,小心抽去清理液(ReagentA)加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,鋪滿整個(gè)培養(yǎng)平面放進(jìn)37℃培養(yǎng)箱孵育3分種手擊振動(dòng)培養(yǎng)瓶,使細(xì)胞脫落加入15毫升用戶自備的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,充分混勻移出10毫升混勻物到新的75cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶加入10毫升用戶自備的完全細(xì)胞培養(yǎng)液到上述新的75cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育16至20小時(shí)小心抽去鋪滿70%生長(zhǎng)細(xì)胞的75cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)液加入10毫升用戶自備的完全細(xì)胞培養(yǎng)液加入xx微升37℃預(yù)熱的滯態(tài)液(ReagentB),輕輕搖動(dòng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶,使其混勻放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱,孵育2小時(shí)在顯微鏡觀察下,細(xì)胞開始收縮變圓,表明細(xì)胞處于有絲分裂手擊振動(dòng)拍打培養(yǎng)瓶,使細(xì)胞脫落移出含有滯態(tài)液(ReagentB)的細(xì)胞培養(yǎng)液到50毫升錐形離心管加入xx毫升清理液(ReagentA)到培養(yǎng)瓶,清洗整個(gè)細(xì)胞表面移出清理液合并到50毫升錐形離心管加入3毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液,鋪滿整個(gè)培養(yǎng)平面置入37℃培養(yǎng)箱3分種手擊振動(dòng)培養(yǎng)瓶,使細(xì)胞脫落加入10毫升用戶自備的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,充分混勻移出混勻物合并到50毫升錐形離心管放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液(保留0.3毫升)手指輕彈混勻細(xì)胞2)懸浮細(xì)胞處理準(zhǔn)備好108懸浮細(xì)胞(淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞、細(xì)胞等)移入到50毫升錐形離心管放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液(選擇步驟)加入xx毫升清理液(ReagentA),混勻顆粒群(選擇步驟)放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g(選擇步驟)小心抽去清理液(ReagentA)加入15毫升用戶自備的RPMI1640完全細(xì)胞培養(yǎng)液,充分混勻細(xì)胞顆粒群轉(zhuǎn)移到到新的75cm2細(xì)胞培養(yǎng)瓶放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育16至20小時(shí)移入到50毫升錐形離心管放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液加入10毫升用戶自備的RPMI1640完全細(xì)胞培養(yǎng)液,混勻細(xì)胞顆粒群加入xx微升37℃預(yù)熱的滯態(tài)液(ReagentB),混勻放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱,孵育2小時(shí)在顯微鏡觀察下,細(xì)胞開始收縮,表明細(xì)胞處于有絲分裂放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液加入10毫升用戶自備的RPMI1640完全細(xì)胞培養(yǎng)液,充分混勻放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液(保留0.3毫升)手指輕彈混勻細(xì)胞二.低滲處理有絲分裂細(xì)胞用滴管一滴一滴加入xx毫升37℃預(yù)熱的低滲液(ReagentC)到50毫升錐形離心管,輕輕搖動(dòng)放進(jìn)37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育15分鐘放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g小心抽去上清液(保留0.3毫升)手指輕彈混勻細(xì)胞三.固定細(xì)胞1.用滴管一滴一滴加入xx毫升預(yù)冷的固定工作液到50毫升錐形離心管,輕輕搖動(dòng)2.放進(jìn)冰槽里孵育至少5分鐘3.放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘,速度為300g4.小心抽去上清液(保留0.3毫升)5.手指輕彈混勻細(xì)胞6.重復(fù)上述步驟1至5,直到沉淀細(xì)胞顆粒群為白色(越白越好)7.加入5毫升固定工作液到50毫升錐形離心管,充分混勻四.染色體載片制作1.先將載玻片置于冰箱里冷卻,然后放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,并排放上5至10張2.從高達(dá)30至60厘米處向下滴上3滴細(xì)胞混勻液在載玻片上,立即吹散開,使其散開或然后拿起載玻片,輕輕拍擊手掌(注意:參見(jiàn)注意事項(xiàng)8)3.在顯微鏡下觀察有絲分裂中期的細(xì)胞4.空氣中晾干載玻片(注意:參見(jiàn)注意事項(xiàng)8)5.可以保存在70%酒精里,放進(jìn)4℃冰箱長(zhǎng)達(dá)一年。剩下的在固定液里的細(xì)胞可以長(zhǎng)期保存在-20℃冰箱里五.染色加入xx毫升預(yù)備液(ReagentF)到小型染色缸(Coplinjar)放進(jìn)晾干的載玻片孵育30秒取出載玻片,加上xx微升染色液(ReagentG),鋪滿整個(gè)細(xì)胞表面置入暗室3分鐘放進(jìn)含有預(yù)備液(ReagentF)的小型染色缸孵育30秒取出載玻片,用用戶自備的無(wú)離子水輕輕沖洗3次在暗室里晾干加上xx微升抗淬滅劑(ReagentH)封片在熒光顯微鏡紫外波長(zhǎng)下,觀察呈現(xiàn)藍(lán)色的細(xì)胞染色體將熒光圖像轉(zhuǎn)換為黑白圖像,顯示G帶條帶進(jìn)行分析

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