資料庫
溫度及靈敏度(熱焓)校正方法
-
本文由 耐馳科學(xué)儀器(上海)有限公司 整理匯編
2011-03-29 00:00 1596閱讀次數(shù)
文檔僅可預(yù)覽首頁內(nèi)容,請下載后查看全文信息!
-
立即下載
溫度及靈敏度(熱焓)校正方法
登錄或新用戶注冊
請用手機(jī)微信掃描下方二維碼
快速登錄或注冊新賬號
微信掃碼,手機(jī)電腦聯(lián)動
更多資料
-
溫度及靈敏度(熱焓)校正方法
- 溫度及靈敏度(熱焓)校正方法[詳細(xì)]
-
2011-03-29 00:00
選購指南
-
水泥及爐渣的熱焓
- 水泥及爐渣的熱焓[詳細(xì)]
-
2024-09-19 04:38
期刊論文
-
AN240-煤的熱焓
- AN240-煤的熱焓[詳細(xì)]
-
2018-09-14 10:00
產(chǎn)品樣冊
-
中和熱(焓)測定裝置HADWC-ZH
- 中和熱(焓)測定裝置/中和熱測定儀型號:HADWC-ZH本測定裝置可測定在一定溫度和濃度下,酸和堿進(jìn)行中和反應(yīng)時產(chǎn)生的熱效應(yīng)。裝置組成及特點:分體式:*熱量計(含杜瓦瓶、電熱絲、磁力攪拌器)*HAWLS-2數(shù)字恒流電源電流/電壓分辨率:0.001A/0.01V*HASWC-ⅡD精密數(shù)字溫度溫差儀溫度/溫差分辨率:0.01℃/0.001℃*通過數(shù)字接口和軟件,可直接與電腦連接,組成智能型中和熱測定裝置。一體化:*將溫度溫差儀、恒流源、熱量計一體化設(shè)計,數(shù)字采集、加熱、定時同步進(jìn)行。*加熱功率:0~12.5W可調(diào)*溫度/溫差分辨率:0.01℃/0.001℃*定時時間:6~99S*輸出:USB或RS232C串行口[詳細(xì)]
-
2018-09-24 10:00
產(chǎn)品樣冊
-
中和熱(焓)測定裝置 HADWC-ZH
- 中和熱(焓)測定裝置/中和熱測定儀型號:HADWC-ZH本測定裝置可測定在一定溫度和濃度下,酸和堿進(jìn)行中和反應(yīng)時產(chǎn)生的熱效應(yīng)。裝置組成及特點:分體式:*熱量計(含杜瓦瓶、電熱絲、磁力攪拌器)*HAWLS-2數(shù)字恒流電源電流/電壓分辨率:0.001A/0.01V*HASWC-ⅡD精密數(shù)字溫度溫差儀溫度/溫差分辨率:0.01℃/0.001℃*通過數(shù)字接口和軟件,可直接與電腦連接,組成智能型中和熱測定裝置。一體化:*將溫度溫差儀、恒流源、熱量計一體化設(shè)計,數(shù)字采集、加熱、定時同步進(jìn)行。*加熱功率:0~12.5W可調(diào)*溫度/溫差分辨率:0.01℃/0.001℃*定時時間:6~99S*輸出:USB或RS232C串行口[詳細(xì)]
-
2024-09-29 09:18
產(chǎn)品樣冊
-
GBT 19466.3-2004塑料 差示掃描量熱法(DSC) 第3部分熔融和結(jié)晶溫度及熱焓的測定
- GBT 19466.3-2004塑料 差示掃描量熱法(DSC) 第3部分熔融和結(jié)晶溫度及熱焓的測定[詳細(xì)]
-
2015-03-25 00:00
課件
-
比重計校正方法
- 比重計校正方法[詳細(xì)]
-
2015-09-15 00:00
其它
-
GB/T 19466.3-2004 塑料 差示掃描量熱法(DSC)第3部分:熔融和結(jié)晶溫度及熱焓的測定
- GB/T 19466.3-2004 塑料 差示掃描量熱法(DSC)第3部分:熔融和結(jié)晶溫度及熱焓的測定[詳細(xì)]
-
2015-04-23 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
-
溫度沖擊試驗方法及標(biāo)準(zhǔn)
- 環(huán)境試驗方法溫度沖擊試驗[詳細(xì)]
-
2018-10-05 10:00
產(chǎn)品樣冊
-
負(fù)載熱變形溫度的測試方法
- 負(fù)載熱變形溫度的測試方法[詳細(xì)]
-
2024-09-28 19:48
標(biāo)準(zhǔn)
-
拉力機(jī)的校正方法
- 拉力機(jī)的校正方法[詳細(xì)]
-
2011-03-10 00:00
實驗操作
-
增加RT-PCR靈敏度的方法
- 增加RT-PCR靈敏度的方法RT--PCR增加RT-PCR靈敏度的方法(一)分離高質(zhì)量RNA成功的cDNA合成來自高質(zhì)量的RNA。高質(zhì)量的RNA至少應(yīng)保證全長并且不含逆轉(zhuǎn)錄酶的YZ劑,如EDTA或SDS。RNA的質(zhì)量決定了你能夠轉(zhuǎn)錄到cDNA上的序列信息量的Zda值。一般的RNA純化方法是使用異硫氰酸胍/酸性酚的一步法。Trizol試劑法將一步法加以提高,可以從多種組織和細(xì)胞中提取高質(zhì)量的非降解RNA。Trizol試劑法可以從Z少100個細(xì)胞或1mg組織中提取RNA。一般不必使用oligo(dT)選擇性分離poly(A)+RNA。不管起始模板是總RNA還是poly(A)+RNA,都可以檢測到擴(kuò)增結(jié)果。另外,分離poly(A)+RNA會導(dǎo)致樣品間mRNA豐度的波動變化,從而使信息的檢出和定量產(chǎn)生偏差。然而,當(dāng)分析稀有mRNA時,poly(A)+RNA會增加檢測的靈敏度。為了防止痕量RNase的污染,從富含RNase的樣品(如胰臟)中分離到的RNA需要貯存在甲醛中以保存高質(zhì)量的RNA,對于長期貯存更是如此。從大鼠肝臟中提取的RNA,在水中貯存一個星期就基本降解了,而從大鼠中提取的RNA,在水中保存3年仍保持穩(wěn)定。另外,長度大于4kb的轉(zhuǎn)錄本對于痕量RNase的降解比小轉(zhuǎn)錄本更敏感。為了增加貯存RNA樣品的穩(wěn)定性,可以將RNA溶解在去離子的甲酰胺中,存于-70℃。用于保存RNA的甲酰胺一定不能含有降解RNA的雜物。來源于胰臟的RNA至少可以在甲酰胺中保存一年。當(dāng)準(zhǔn)備使用RNA時,可以使用下列方法沉淀RNA:加入NaCl至0.及4倍體積的乙醇,室溫放置3-5分鐘,10,000×g離心5分鐘。在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中經(jīng)常加入RNaseYZ劑以增加cDNA合成的長度和產(chǎn)量。RNaseYZ劑要在**鏈合成反應(yīng)中,在緩沖液和還原劑(如DTT)存在的條件下加入,因為cDNA合成前的過程會使YZ劑變性,從而釋放結(jié)合的可以降解RNA的RNase。蛋白RNaseYZ劑僅防止RNaseA,B,C對RNA的降解,并不能防止皮膚上的RNase,因此盡管使用了這些YZ劑,也要小心不要從手指上引入RNase。2M(二)使用無RNaseH活性(RNaseH-)的逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶催化RNA轉(zhuǎn)化成cDNA。不管是M-MLV還是AMV,在本身的聚合酶活性之外,都具有內(nèi)源RNaseH活性。RNaseH活性同聚合酶活性相互競爭RNA模板與DNA引物或cDNA延伸鏈間形成的雜合鏈,并降解RNA:DNA復(fù)合物中的RNA鏈。被RNaseH活性所降解的RNA模板不能再作為合成cDNA的有效底物,降低了cDNA合成的產(chǎn)量和長度。因此消除或大大降低逆轉(zhuǎn)錄酶的RNaseH活性將會大有裨益。SuperScriptⅡ逆轉(zhuǎn)錄酶,RNaseH-的MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶及ThermoScript逆轉(zhuǎn)錄酶,RNaseH-的AMV,比MMLV和AMV得到更多量和更多全長的cDNA。RT-PCR靈敏度會受cDNA合成量的影響。ThermoScript比AMV的靈敏性強(qiáng)得多。RT-PCR產(chǎn)物的大小受限于逆轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA的能力,尤其是克隆較大的cDNA時。同MMLV相比,SuperScripⅡ顯著提高了長RT-PCR產(chǎn)物的產(chǎn)量。RNaseH-的逆轉(zhuǎn)錄酶同時增加了熱穩(wěn)定性,所以反應(yīng)可以在高于正常的37-42℃的溫度下進(jìn)行。在建議的合成條件下,使用oligo(dT)引物和10μCi的[α-P]dCTP。**鏈的總產(chǎn)量使用TCA沉淀法計算。全長cDNA使用在堿性瓊脂糖膠上將大小分類的條帶切除并計數(shù)的方法分析。(三)提高逆轉(zhuǎn)錄保溫溫度較高的保溫溫度有助于RNA二級結(jié)構(gòu)的打開,增加了反應(yīng)的產(chǎn)量。對于多數(shù)RNA模板,在沒有緩沖液或鹽的條件下,將RNA和引物在65℃保溫,然后迅速置于冰上冷卻,可以消除大多數(shù)二級結(jié)構(gòu),從而使引物可以結(jié)合。然而某些模板仍然會存在二級結(jié)構(gòu),即使熱變性后也是如此。對這些困難模板的擴(kuò)增可以使用ThermoScript逆轉(zhuǎn)錄酶,并將逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)置于較高溫度下進(jìn)行以改善擴(kuò)增。較高的保溫溫度也可以增加特異性,尤其是當(dāng)使用基因特異性引物(GSP)進(jìn)行cDNA合成時。如果使用GSP,確保引物的Tm值與預(yù)計的保溫溫度相同。不要在高于60℃時使用oligo(dT)和隨機(jī)引物。隨機(jī)引物需要在增加到60℃前在25℃保溫10分鐘。除了使用較高的逆轉(zhuǎn)錄溫度外,還可以通過直接將RNA/引物混合物從65℃變性溫度轉(zhuǎn)到逆轉(zhuǎn)錄保溫溫度,并加入預(yù)熱的2×的反應(yīng)混合物提高特異性(cDNA熱啟動合成)。這種方法有助于防止較低溫度時所發(fā)生的分子間堿基配對。使用PCR儀可以簡化RT-PCR所需的多種溫度切換。Tth熱穩(wěn)定聚合酶在Mg2+存在條件下作為DNA聚合酶,在Mn2+存在條件下作為RNA聚合酶。它可以在Z高65℃條件下保溫。然而,PCR過程中Mn2+的存在會降低忠實性,這使得Tth聚合酶不太適合用于高極ng確度的擴(kuò)增,如cDNA的克隆。另外,Tth的逆轉(zhuǎn)錄效率較低,這會降低靈敏度,而且,既然單個酶就可以進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和PCR,那么沒有逆轉(zhuǎn)錄的對照反應(yīng)就不能用來將cDNA的擴(kuò)增產(chǎn)物同污染的基因組DNA的擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)分開來。(四)促進(jìn)逆轉(zhuǎn)錄的添加劑包括甘油和DMSO在內(nèi)的添加劑加到**鏈合成反應(yīng)中,可以減低核酸雙鏈的穩(wěn)定并解開RNA二級結(jié)構(gòu),Z多可以加入20%的甘油或10%的DMSO而不影響SuperScriptⅡ或MMLV的活性。AMV也可以耐受Z多20%的甘油而不降低活性。為了在SuperScriptⅡ逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中Zda限度提高RT-PCR的靈敏度,可以加入10%的甘油并在45℃保溫。如果1/10的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)產(chǎn)物加入到PCR中,那甘油在擴(kuò)增反應(yīng)中的濃度為0.%,這不足以YZPCR。4(五)RNaseH處理在PCR之前使用RNaseH處理cDNA合成反應(yīng)可以提高靈敏度。對于某些模板,據(jù)認(rèn)為cDNA合成反應(yīng)中的RNA會阻止擴(kuò)增產(chǎn)物的結(jié)合,在這種情況下,RNaseH處理可以增加靈敏度。一般當(dāng)擴(kuò)增較長的全長cDNA目標(biāo)模板時,RNaseH處理是必需的,比如低拷貝的tuberousscherosisⅡ(圖7)。對這種困難模板,RNaseH的處理加強(qiáng)了SuperScriptⅡ或AMV合成的cDNA所產(chǎn)生的信號。對于多數(shù)RT-PCR反應(yīng),RNaseH處理是可選的,因為95℃保溫的PCR變性步驟一般會將RNA:DNA復(fù)合物中的RNA水解掉。(六)小量RNA檢測方法的提高當(dāng)僅有小量RNA時,RT-PCR尤其具有挑戰(zhàn)性。在RNA分離過程中加入的作為載體的糖元有助于增加小量樣品的產(chǎn)量??梢栽诩尤隩rizol的同時加入無RNase的糖元。糖元是水溶性的,可以同RNA保持在水相中以輔助隨后的沉淀。對于小于50mg的組織或106個培養(yǎng)細(xì)胞的樣品,無RNase糖元的建議濃度為250μg/ml。在使用SuperScriptⅡ的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中加入乙?;疊SA可以增加靈敏度,而且對于小量RNA,減少SuperScriptⅡ的量并加入40單位的RnaseOut核酸酶YZ劑可以提高檢測的水平。如果在RNA分離過程中使用了糖元,仍然建議在使用SuperScriptⅡ進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時加入BSA或RNaseYZ劑。(七)一步法同兩步法RT-PCR的比較兩步法RT-PCR比較常見,在使用一個樣品檢測多個mRNA時比較有用。然而一步法RT-PCR具有其他優(yōu)點。一步法RT-PCR在處理大量樣品時易于操作,有助于減少殘余污染,因為在cDNA合成和擴(kuò)增之間不需要打開管蓋。一步法可以得到更高的靈敏度,Zdi可以達(dá)到0.總RNA,這是因為整個cDNA樣品都被擴(kuò)增。對于成功的一步法RT-PCR,一般使用反義的基因特異性引物起始cDNA合成1pg[詳細(xì)]
-
2024-09-29 07:29
產(chǎn)品樣冊
-
溫度沖擊試驗設(shè)備實現(xiàn)途徑及熱負(fù)荷分析
- 溫度沖擊試驗設(shè)備實現(xiàn)途徑及熱負(fù)荷分析[詳細(xì)]
-
2018-08-19 10:00
產(chǎn)品樣冊
-
熔融和結(jié)晶溫度及熱焙的測定
- GB/T19466.3的本部分規(guī)定了測定結(jié)晶和半結(jié)晶聚合物熔融和結(jié)晶溫度及熱熔的試驗方法[詳細(xì)]
-
2018-09-12 10:00
產(chǎn)品樣冊
-
ICP儀器調(diào)諧及校正溶液
- ICP儀器調(diào)諧及校正溶液[詳細(xì)]
-
2024-09-30 06:15
期刊論文
-
ICP儀器調(diào)諧及校正溶液
- ICP儀器調(diào)諧及校正溶液[詳細(xì)]
-
2024-09-30 10:36
安裝說明
-
維卡軟化點&熱變形溫度測定儀的操作及注意事項
- 維卡軟化點&熱變形溫度測定儀的操作及注意事項[詳細(xì)]
-
2010-08-13 00:00
應(yīng)用文章
-
塑料儀器/負(fù)載熱變形/軟化溫度/熱變形溫度產(chǎn)品樣冊
- 塑料儀器/負(fù)載熱變形/軟化溫度/熱變形溫度產(chǎn)品樣冊[詳細(xì)]
-
2016-10-20 10:18
選購指南
-
大體積熱重分析儀對熱紅聯(lián)機(jī)靈敏度的提高
- 大體積熱重分析儀對熱紅聯(lián)機(jī)靈敏度的提高[詳細(xì)]
-
2008-06-06 00:00
操作手冊
Copyright 2004-2026 yiqi.com All Rights Reserved , 未經(jīng)書面授權(quán) , 頁面內(nèi)容不得以任何形式進(jìn)行復(fù)制
參與評論
登錄后參與評論