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甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)ELISA試劑盒操作方法

本文由 上海華壹生物科技有限公司 整理匯編

2018-11-15 10:00 612閱讀次數(shù)

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人甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書實驗目的:本試劑盒僅供研究使用,用于測定人血清,血漿及相關液體樣本中甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)含量。實驗原理:應用雙抗體夾心法測定標本中人甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)水平。用純化的人甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入甘露糖結(jié)合凝集素(MBL),再與HRP標記的甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)濃度。樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。2.血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.92以上。2.批內(nèi)與批間應分別小于9%和15%檢測范圍:5μg/L-150μg/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:2-8℃2.有效期:6個月

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