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大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與組DNA的轉(zhuǎn)化
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本文由 上海士鋒生物科技有限公司 整理匯編
2016-07-12 00:00 308閱讀次數(shù)
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大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與組DNA的轉(zhuǎn)化
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大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備與組DNA的轉(zhuǎn)化
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- T7pLysY感受態(tài)細(xì)胞:T7pLysY菌株為大腸桿菌BL21增強(qiáng)型菌株,為L(zhǎng)on和OmpT蛋白酶缺陷型,用于毒性或非毒性蛋白的表達(dá)。該菌株區(qū)別于BL21(DE3)pLysS和BL21(DE3)pLysE菌株的優(yōu)勢(shì)在于T7RNA聚合酶基因整合在細(xì)菌染色體上的lac操縱子區(qū)域,基因組中無(wú)λ前噬菌體序列,LysY表達(dá)的T7溶菌酶保留了對(duì)T7RNA聚合酶的YZ作用但缺失了水解細(xì)胞壁的酰胺酶活性,有利于降低基因的背景表達(dá)和避免誘導(dǎo)過(guò)程中細(xì)菌的裂解,菌株具有抗T1噬菌體感染等特點(diǎn)。T7pLysY表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率大于108cfu/μgDNA。T7pLysY感受態(tài)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)見(jiàn)附件。[詳細(xì)]
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2018-12-14 10:00
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制備洗滌液的方法與注意事項(xiàng)介紹
- [導(dǎo)讀]在實(shí)驗(yàn)室分析工作中,洗滌玻璃儀器不僅是一項(xiàng)必須做的實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作,也是一項(xiàng)技術(shù)性的工作。儀器洗滌是否符合要求,對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確和精密度均有影響。在今天的資料下載內(nèi)容中,上海恒遠(yuǎn)生物公司來(lái)為大家介紹制備洗滌液的方法與注意事項(xiàng)。一、純酸純堿洗液根據(jù)器皿污垢的性質(zhì),直接用濃硫酸(HCL)或濃硫酸(H2SO4)、濃硝酸(HNO3)浸泡或浸煮器皿(溫度不宜太高,否者濃酸揮發(fā)刺激人)。純堿洗液多采用10%以上的濃燒堿(NaOH)、氫氧化鉀(KOH)或碳酸鈉(Na2CO3)液浸泡或浸煮器皿(可以煮沸)。二、有機(jī)溶劑帶有脂肪性污物的器皿,可以用汽油、甲苯、二甲苯、丙酮、酒精、、等有機(jī)溶劑擦洗或浸泡。但用有機(jī)溶劑作為洗液浪費(fèi)較大,能用刷子洗刷的大件儀器盡量采用堿性洗液。只有無(wú)法使用刷子的小件或特殊形狀的儀器才使用有機(jī)溶劑洗滌,如活塞內(nèi)孔、移液管尖頭、滴定管尖頭、滴定管活塞孔、滴管、小瓶等。三、強(qiáng)酸氧化劑洗液是用重鉻酸甲(K2Cr2O7)和濃硫酸(H2SO4)配成。K2Cr2O7在酸性溶液中,有很強(qiáng)的氧化能力,對(duì)玻璃儀器又及少有侵蝕作用。所以這種洗液在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用Z廣泛。 配制濃度各有不同,從5~12%的各種濃度都有。配制方法大致相同:取一定量的K2Cr2O7(工業(yè)品即可),先用約1~2倍的水加熱溶解,稍冷后,將工業(yè)品濃H2SO4所需體積數(shù)徐徐加入K2Cr2O7不溶液中(千萬(wàn)不能將水或溶液加入H2SO4中),邊倒邊用玻璃棒攪拌,并注意不要濺出,混合均勻,俟冷卻后,裝入洗液瓶備用。新配制的洗液為紅褐色,氧化能力很強(qiáng)。當(dāng)洗液用久后變?yōu)楹诰G色,即說(shuō)明洗液無(wú)氧化洗滌力。例如,配制12%的洗液500mL。取60克工業(yè)品K2Cr2O7置于100mL水中(加水量不是固定不變的,以能溶解為度),加熱溶解,冷卻,徐徐加入濃H2SO4340mL,邊加邊攪拌,冷后裝瓶備用。這種洗液在使用時(shí)要切實(shí)注意不能濺到身上,以防“燒"破衣服和損傷皮膚。洗液倒入要洗的儀器中,應(yīng)使儀器周壁全浸洗后稍停一會(huì)再倒回洗液瓶。**次用少量水沖洗剛浸洗過(guò)的儀器后,廢水不要倒在水池里和下水道里,長(zhǎng)久會(huì)腐蝕水池和下水道,應(yīng)倒在廢液缸中,缸滿后倒在垃圾里,如果無(wú)廢液缸,倒年紀(jì)素養(yǎng)人生觀不朽啊激素談話法入水池時(shí),要邊倒邊用大量的水沖洗。四、堿性高錳酸鉀洗液用堿性高錳酸鉀作洗液,作用緩慢,適合用于洗滌有油污的器皿。配法:取高錳酸鉀(KMnO4)4克加少量水溶解后,再加入10%氫氧化鈉(NaOH)100mL。五、洗消液檢驗(yàn)致癌性化學(xué)物質(zhì)的器皿,為了防止對(duì)人體的侵害,在洗刷之前應(yīng)使用對(duì)這些致癌性物質(zhì)有破壞分解作用的洗消液進(jìn)行浸泡,然后再進(jìn)行洗滌。在食品檢驗(yàn)中經(jīng)常使用的洗消液有:1%或5%次氯酸鈉(NaOCL)溶液、20%HNO3和2%KMnO4溶液。1%或5%NaOCL溶液對(duì)在破壞作用。用1%NaOCL溶液對(duì)污染的玻璃儀器浸泡半天或用5%NaOCL溶液浸泡片刻后,即可達(dá)到破壞黃曲霉毒素的作用。配法:取漂100克,加水500mL,攪拌均勻,另將工業(yè)用Na2CO380克溶于溫水500mL中,再將兩液混合,攪拌,澄清后過(guò)濾,此濾液含NaOCL為2.5%;若用漂粉精配制,則NaCO3的重量應(yīng)加倍,所得溶液濃度約為5%。如需要1%NaOCL溶液,可將上述溶液按比例進(jìn)行稀釋。20%HNO3溶液和2%KMnO4溶液對(duì)苯并(a)芘有破壞作用,被苯并(a)芘污染的玻璃儀器可用20%HNO3浸泡24小時(shí),取出后用自來(lái)水沖去殘存酸液,再進(jìn)行洗滌。被苯并(a)芘污染的乳膠手套及微量注射器等可用2%KMnO4溶液浸泡2小時(shí)后,再進(jìn)行洗滌。五、堿性洗液堿性洗液用于洗滌有油污物的儀器,用此洗液是采用長(zhǎng)時(shí)間(24小時(shí)以上)浸泡法,或者浸煮法。從堿洗液中撈取儀器時(shí),要戴乳膠手套,以免燒傷皮膚。常用的堿洗液有:碳酸鈉液(Na2CO3,即純堿),碳酸氫鈉(Na2HCO3,小蘇打),磷酸鈉(Na3PO4,磷酸三鈉)液,磷酸氫二鈉(Na2HPO4)液等。[詳細(xì)]
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2018-11-16 10:02
產(chǎn)品樣冊(cè)
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stbl3 感受態(tài)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
- 產(chǎn)品概述:常規(guī)質(zhì)粒制備的宿主菌,可進(jìn)行藍(lán)白斑篩選;復(fù)制慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株,對(duì)慢病毒載體等較大的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的效果好,有效減低錯(cuò)誤重組的可能性。細(xì)胞種類:大腸桿菌Stbl3菌株能有效地YZ長(zhǎng)片段末端重復(fù)區(qū)的重組,非常適合于含有同向重復(fù)序列的慢病毒和其他反轉(zhuǎn)錄病毒載體的復(fù)制。此外,細(xì)胞非常穩(wěn)定,能提高慢病毒載體或其他不穩(wěn)定載體的克隆效率。轉(zhuǎn)化效率:使用1ng的質(zhì)粒DNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí):100μlCompetentCellsStbl3/1ngpUC19進(jìn)行轉(zhuǎn)化時(shí)產(chǎn)生的菌落數(shù)>1×10*8轉(zhuǎn)化子/1μgpUC19[詳細(xì)]
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2018-09-04 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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DH5α感受態(tài)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
- 本產(chǎn)品是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。DH5α是一種常用于質(zhì)??寺〉木?,其φ80lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè),轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108適用于GX的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。[詳細(xì)]
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2018-10-08 10:00
產(chǎn)品樣冊(cè)
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熱氧化大豆油的熒光物質(zhì)的薄層層析與制備
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2015-08-28 00:00
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安東帕_ 壓汞儀進(jìn)退汞曲線與等溫線的轉(zhuǎn)化
- 本文主要介紹壓汞儀測(cè)試得到的進(jìn)退汞曲線與汞等溫線的轉(zhuǎn)化。[詳細(xì)]
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2024-09-21 18:53
應(yīng)用文章
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紫外線與溫度在大腸桿菌滅菌過(guò)程中的協(xié)同作用研究
- 紫外線與溫度在大腸桿菌滅菌過(guò)程中的協(xié)同作用研究[詳細(xì)]
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2013-11-15 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
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DNA的原位顯示
- DNA的原位顯示[詳細(xì)]
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2015-12-14 00:00
其它
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蛋白質(zhì)提取與制備的原理和方法
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2015-03-19 00:00
標(biāo)準(zhǔn)
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弱酸型陽(yáng)離子色譜柱的制備與應(yīng)用
- 弱酸型陽(yáng)離子色譜柱的制備與應(yīng)用[詳細(xì)]
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2024-09-20 13:31
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