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儀器網(wǎng)> 資料庫(kù)>乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH) 試劑盒說(shuō)明書(shū)(50T)

乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH) 試劑盒說(shuō)明書(shū)(50T)

本文由 上海索寶生物科技有限公司 整理匯編

2018-09-02 10:00 7591閱讀次數(shù)

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乳酸脫氫酶(LactateDehydrogenase,LDH)試劑盒說(shuō)明書(shū)(50T)一、測(cè)定意義:LDH是體內(nèi)能量代謝過(guò)程中的一個(gè)重要的酶,是糖酵解途徑的末端酶。該酶催化丙酮酸與乳酸之間的互變,并且伴隨著NAD/NADH之間互變,幾乎存在于所有動(dòng)植物組織中。二、測(cè)定原理:以NAD作氫受體,乳酸脫氫酶能夠催化乳酸脫氫生成丙酮酸,丙酮酸與2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,后者在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比,由此計(jì)算乳酸脫氫酶活性。三、試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:可見(jiàn)分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀、37℃恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿或酶標(biāo)板、研缽、冰、蒸餾水四、試劑的組成和配制:提取液:30mL×1瓶,4℃保存。(用于非哺乳動(dòng)物組織,哺乳動(dòng)物組織用生理鹽水)試劑一:液體15mL×1瓶,4℃保存3個(gè)月;試劑二:粉劑×1支,-20℃保存;用時(shí)加入1.3mL雙蒸水充分溶解備用,配好后-20℃可保存兩周,禁止反復(fù)凍融;試劑三:2mmol/L標(biāo)準(zhǔn)液母液1mL,-20℃保存6個(gè)月;試劑四:儲(chǔ)備液15mL,4℃避光保存3個(gè)月;試劑五:終止試劑50mL,4℃保存3個(gè)月;0.2mmol/L標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制:取2mmol/L標(biāo)準(zhǔn)液母液用雙蒸水10倍稀釋,現(xiàn)配現(xiàn)用。五、樣品測(cè)定的準(zhǔn)備:(1)細(xì)胞或組織樣品的制備:對(duì)于培養(yǎng)的細(xì)胞:先收集細(xì)胞到離心管內(nèi),棄上清,按照每100萬(wàn)細(xì)胞加入200μL細(xì)胞裂解液的比例充分勻漿以破碎并裂解細(xì)胞。8000g離心10分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。對(duì)于哺乳動(dòng)物組織:按每10mg組織加入100μL生理鹽水的比例進(jìn)行冰浴勻漿。8000g4℃離心10分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。對(duì)于非哺乳動(dòng)物組織:按每10mg組織加入100μL提取液的比例進(jìn)冰浴行勻漿。8000g4℃離心10分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。(2)血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。六、測(cè)定操作表:空白管標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管對(duì)照管待測(cè)樣本(μL)5050試劑一(μL)250250250250試劑二(μL)50蒸餾水(μL)10050500.2mmol/L標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(μL)50充分混勻,37℃水浴15分鐘試劑四(μL)250250250250充分混勻,37℃水浴15分鐘試劑五(μL)750750750750充分混勻,靜置3分鐘,450nm下測(cè)定吸光度注意:1.以上反應(yīng)體系用1mL玻璃比色皿測(cè)定,若需要用酶標(biāo)儀測(cè)定,將反應(yīng)體系中各試劑組成縮小5倍即可。2.粗酶液的提取必須在0℃-4℃中操做完成,以防止酶變性失活。3.測(cè)定過(guò)程中樣本試劑二和0.2mmol/L標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液必須在冰上放置。4.標(biāo)準(zhǔn)孔和空白孔只需要做一次,由于每個(gè)樣本都要做測(cè)定孔和對(duì)照孔,因此本試劑盒50管可測(cè)24個(gè)樣本。七、LDH活力單位的計(jì)算:1、血清(漿)LDH活力的計(jì)算:單位的定義:每升血清(漿)與基質(zhì)作用15分鐘,在反應(yīng)體系中生成1μmol的丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。計(jì)算公式:血清(漿)LDH(U/L)2、組織中LDH活力的計(jì)算:單位的定義:每g組織蛋白與基質(zhì)作用15分鐘,在反應(yīng)體系中生成1μmol的丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。計(jì)算公式:組織中LDH(U/L)=OD測(cè)定管-OD對(duì)照管OD標(biāo)準(zhǔn)管-OD空白管×標(biāo)準(zhǔn)管濃度×1000=OD測(cè)定管-OD對(duì)照管OD標(biāo)準(zhǔn)管-OD空白管×標(biāo)準(zhǔn)管濃度÷樣本蛋白濃度(g/mL)訂購(gòu)熱線021-54100800

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