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小鼠可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA Kit
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本文由 上海信裕生物科技有限公司 整理匯編
2015-10-10 00:00 333閱讀次數(shù)
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小鼠可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA Kit
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小鼠可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA Kit
- 小鼠可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA Kit[詳細]
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2015-10-10 00:00
課件
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小鼠可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒
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2013-12-08 00:00
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2024-09-18 19:05
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大鼠可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒
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2013-12-11 00:00
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雞可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒
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2024-09-28 00:04
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兔子可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒
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2024-09-29 23:53
期刊論文
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大鼠可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒說明書
- 電話:021-6533363955229872網(wǎng)址:http://www.westang.com大鼠可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗大鼠sEPCR單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的sEPCR與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗大鼠sEPCR,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍色,Z后加終止液硫酸,在450nm處測OD值,sEPCR濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中sEPCR濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標板(CoatedWells)96孔酶標抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標準品(Standards):40ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準備試劑與收集血樣1.收集標本:血清、血漿(EDTA)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復凍融。血清測定前用標本稀釋液作1:5至10倍稀釋。2.標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成40ng/ml的溶液。設(shè)標準管8管,**管加標本稀釋液900ul,第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在**管中加入40ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。2.以標準品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0pg/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)sEPCR含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的sEPCR檢測濃度小于30pg/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的大鼠sEPCR。不與大鼠其它細胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。注意事項1.以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應(yīng)同時做標準曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細]
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2018-09-13 10:00
產(chǎn)品樣冊
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人可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒說明書
- 人可溶性血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒(用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))原理本實驗采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。用抗人sEPCR單抗包被于酶標板上,標準品和樣品中的sEPCR與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗人sEPCR,形成免疫復合物連接在板上,辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合,加入底物工作液顯藍色,Z后加終止液,在450nm處測OD值,sEPCR濃度與OD值成正比,可通過繪制標準曲線求出標本中sEPCR濃度。試劑盒組成(2-8℃保存)酶標板(CoatedWells)96孔酶標抗體工作液(EnzymeConjugate)12ml10×標本稀釋液(SampleBuffer)12ml20×濃縮洗滌液(WashBuffer)50ml標準品(Standards):200ng/瓶2瓶底物工作液(TMBSolution)12ml**抗體工作液(BiotinylatedAntibody)12ml終止液(StopSolution)12ml準備試劑與收集血樣1.收集標本:血清、血漿(EDTA)、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,2-8℃保存48小時;更長時間須冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復凍融。血清測定前用標本稀釋液至少作1:20稀釋(取10ul,加標本稀釋液190ul,稀釋20倍)。2.標準品液配制:使用前加入1ml蒸餾水混勻,配成200ng/ml的溶液。設(shè)標準管8管,**管加標本稀釋液900ul,第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在**管中加入200ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,移至第二管。如此反復作對倍稀釋,從第七管中吸出500ul棄去。第八管為空白對照。3.10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水)。4.洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)檢測程序1.加樣:每孔各加入標準品或待測樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。2.洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,向濾紙上印干。3.每孔中加入**抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。4.洗板:同前。5.每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。6.洗板:同前。7.每孔加入底物工作液100ul,置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。8.每孔加入100ul終止液混勻。9.30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。結(jié)果計算與判斷1.所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計算。2.以標準品20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0n’g/ml為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上作圖,畫出標準曲線。3.根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)sEPCR含量,再乘上稀釋倍數(shù)即可。試劑盒性能1.靈敏度:Z小的sEPCR檢測濃度小于0.2ng/ml。2.特異性:可同時檢測重組或天然的人sEPCR。不與人其它細胞因子有交叉反應(yīng)。3.重復性:板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10%。注意事項1.以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,每次測定應(yīng)同時做標準曲線。2.洗滌過程很關(guān)鍵。洗滌不充分將導致極ng確度誤差及OD值錯誤地升高。3.板條開封后剩余板條要再封好,保持板條干燥。4.本試劑盒宜置4oC冰箱保存。5.本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷![詳細]
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2018-09-13 10:01
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小鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA Kit
- 小鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA Kit[詳細]
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2015-09-30 00:00
操作手冊
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小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA試
- 小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA試[詳細]
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2013-12-09 00:00
專利
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小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子受體-3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA試
- 小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子受體-3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA試[詳細]
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2013-12-09 00:00
實驗操作
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小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)ELISA試劑盒
- 小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)ELISA試劑盒[詳細]
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2024-09-29 15:05
報價單
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小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子C(VEGF-C)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
- 小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子C(VEGF-C)酶聯(lián)免疫分析試劑盒本試劑盒僅供研究使用檢測范圍:1.56pg/ml-100pg/mlZdi檢測限:0.39pg/ml特異性:本試劑盒可同時檢測天然或重組的小鼠VEGF-C,且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。有效期:6個月預期應(yīng)用:ELISA法定量測定小鼠血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中VEGF-C含量。說明1.試劑盒保存:-20℃(較長時間不用時);2-8℃(頻繁使用時)。2.濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。3.中、英文說明書可能會有不一致之處,請以英文說明書為準。4.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正?,F(xiàn)象,不會對實驗結(jié)果造成任何影響。實驗原理用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗VEGF-C抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗VEGF-C抗體、HRP標記的親和素,經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的VEGF-C呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。試劑盒組成及試劑配制1.酶聯(lián)板(Assayplate):一塊(96孔)。2.標準品(Standard):2瓶(凍干品)。3.樣品稀釋液(SampleDiluent):1×20ml/瓶。4.生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibodyDiluent):1×10ml/瓶。5.辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液(HRP-avidinDiluent):1×10ml/瓶。6.生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)7.辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)8.底物溶液(TMBSubstrate):1×10ml/瓶。9.濃洗滌液(WashBuffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。10.終止液(StopSolution):1×10ml/瓶(2NH2SO4)。需要而未提供的試劑和器材1.標準規(guī)格酶標儀2.高速離心機3.電熱恒溫培養(yǎng)箱4.干凈的試管和Eppendof管5.系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,**用多通道移液器6.蒸餾水,容量瓶等標本的采集及保存1.血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復凍融。2.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000g離心15分鐘,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復凍融。3.細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復凍融。注:標本溶血會影響Z后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。標本的稀釋原則:首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量,確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標準曲線的范圍內(nèi),檢測的結(jié)果才是準確的。稀釋的過程中,應(yīng)做好詳細的記錄。Z后計算濃度時,稀釋了“N”倍,標本的濃度應(yīng)再乘以“N”。標準品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為100pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋100pg/ml,50pg/ml,25pg/ml,12.5pg/ml,6.25pg/ml,3.12pg/ml,1.56pg/ml,樣品稀釋液直接作為標準濃度0pg/ml,臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制50pg/ml標準品:取0.5ml(不要少于0.5ml)100pg/ml的上述標準品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。生物素標記抗體的稀釋原則:臨用前以生物素標記抗體稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標記抗體加990μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。辣根過氧化物酶標記親和素的稀釋原則:臨用前以辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液稀釋,稀釋前根據(jù)預先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔100μl),實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制。操作步驟實驗開始前,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。1.加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。2.棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),37℃,60分鐘。3.溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,200μl/每孔,甩干。4.每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液)100μl,37℃,60分鐘。5.溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,200μl/每孔,甩干。6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔顯色不明顯,即可終止)。7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。8.用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。注:1.用戶在初次使用試劑盒時,應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。2.每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是Z后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。3.為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標板加上蓋或覆膜。4.未使用完的酶標板或者試劑,請于2-8℃保存。標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復使用已稀釋過的標準品、生物素標記抗體工作液、或辣根過氧化物酶標記親和素工作液。5.建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,以保證檢測結(jié)果的準確性。洗板方法手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次。自動洗板:如果有自動洗板機,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。計算以標準物的濃度為橫坐標(對數(shù)坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。注意事項1.當混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩,避免起泡。2.洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。3.一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。5.如標本中待測物質(zhì)含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請Z后乘以稀釋倍數(shù)。6.在配制標準品、檢測溶液工作液時,請以相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。7.底物請避光保存。8.不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。[詳細]
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2018-11-05 10:00
產(chǎn)品樣冊
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大鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子C(VEGF-C)ELISA試劑盒
- 大鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子C(VEGF-C)ELISA試劑盒[詳細]
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2024-09-17 01:55
安裝說明
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小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒
- 小鼠血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)ELISA試劑盒[詳細]
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2024-09-20 03:55
專利
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小鼠β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)ELISA Kit
- 小鼠β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)ELISA Kit[詳細]
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2015-09-30 00:00
期刊論文
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小鼠可溶性血管內(nèi)皮(sVEGFR-1)ELISA試劑盒
- 小鼠可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1(sVEGFR-1)ELISA試劑盒使用說明書本試劑僅供研究使用目的:本試劑盒用于測定小鼠血清,血漿及相關(guān)液體樣本中小鼠可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1(sVEGFR-1)的含量。實驗原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1(sVEGFR-1)水平。用純化的小鼠可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1(sVEGFR-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1(sVEGFR-1),再與HRP標記的可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1(sVEGFR-1)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1(sVEGFR-1)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1(sVEGFR-1)含量。試劑盒組成:試劑盒組成48孔配置96孔配置保存說明書1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1個1個酶標包被板1×481×962-8℃保存標準品:4500ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存標準品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存樣本處理及要求:1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。2.血漿:應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。3.尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。6.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復凍融.7.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3YZ辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在**、第二孔中分別加標準品100μl,然后在**、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從**孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為3000ng/L,2000ng/L,1000ng/L,500ng/L,250ng/L)。加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品Z終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。注意事項:試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間**控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標準曲線,**做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔**孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請Z后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準。計算:以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。(此圖僅供參考)試劑盒性能:1.樣品線性回歸與預期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%檢測范圍:120ng/L-4000ng/L保存條件及有效期:1.試劑盒保存:;2-8℃。2.有效期:6個月[詳細]
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2018-11-07 14:16
產(chǎn)品樣冊
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小鼠腫瘤壞死因子可溶性受體(TNFsR-)ELISA試劑盒
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2013-12-09 00:00
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其它
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2024-09-29 05:33
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