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無處不在的PCR污染,如何有效避免?

艾普拜生物科技(蘇州)有限公司 2023-01-03 16:11:31 243  瀏覽
  • 前言

    在PCR檢測過程中,不可否認的是,沒有任何檢測是100%準確的,比如我們可能也曾聽過假陽性這個名詞,那為什么會出現假陽性呢?這其實跟實驗操作過程造成的污染相關,在實驗開展過程中,主要有4種污染途徑:標本間交叉污染、PCR試劑污染、PCR擴增產物污染、實驗室克隆質粒污染。

    如何對污染進行監(jiān)測?

    1. 陽性對照

    在建立PCR實驗室及一般的檢驗單位都應設有PCR陽性對照,它是PCR 反應是否成功、產物條帶位置及大小是否符合理論要求的一個重要的參考標志,陽性對照要選擇擴增度中等、復性好,經各種鑒定是該產物的標本,如以重組質粒為陽性對照,其含量宜低不宜高(100個拷貝以下),但陽性對照尤其是重組質粒及高濃度陽性標本,其對檢測或擴增樣品污染的可能性很大,因而當某一PCR試劑經自己使用穩(wěn)定,檢驗人員心中有數時,在以后的實驗中可免設陽性對照。

    2. 陰性對照

    每次PCR試驗務必做陰性對照,它包括:①標本對照,被檢標本是血清就用鑒定后的正常血清做對照,被檢的標本是組織細胞就用相應的組織細胞做對照;②試劑對照,在PCR試劑中不加模板DNA或RNA,進行PCR擴增,以檢測試劑是否污染。

    3. 重復性實驗

    4. 選擇不同區(qū)域的引物進行PCR擴增

    如何避免PCR污染?

    實驗室防污染是重中之重,畢竟影響最終檢測結果,那么我們有哪些防污染的方法呢?



    除了注意避免人工操作引入的污染,我們在實驗時應設立適當的陽性對照和陰性對照,陽性對照以能出現擴增帶的標準病原體核酸為宜,并注意交叉污染的可能性,每次反應都應由一管不加模板的試劑對照及相應不含有被擴增核酸的樣品作陰性對照。同時減少PCR循環(huán)次數,PCR產物達到檢測水平就適可而止。


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無處不在的PCR污染,如何有效避免?

前言

在PCR檢測過程中,不可否認的是,沒有任何檢測是100%準確的,比如我們可能也曾聽過假陽性這個名詞,那為什么會出現假陽性呢?這其實跟實驗操作過程造成的污染相關,在實驗開展過程中,主要有4種污染途徑:標本間交叉污染、PCR試劑污染、PCR擴增產物污染、實驗室克隆質粒污染。

如何對污染進行監(jiān)測?

1. 陽性對照

在建立PCR實驗室及一般的檢驗單位都應設有PCR陽性對照,它是PCR 反應是否成功、產物條帶位置及大小是否符合理論要求的一個重要的參考標志,陽性對照要選擇擴增度中等、復性好,經各種鑒定是該產物的標本,如以重組質粒為陽性對照,其含量宜低不宜高(100個拷貝以下),但陽性對照尤其是重組質粒及高濃度陽性標本,其對檢測或擴增樣品污染的可能性很大,因而當某一PCR試劑經自己使用穩(wěn)定,檢驗人員心中有數時,在以后的實驗中可免設陽性對照。

2. 陰性對照

每次PCR試驗務必做陰性對照,它包括:①標本對照,被檢標本是血清就用鑒定后的正常血清做對照,被檢的標本是組織細胞就用相應的組織細胞做對照;②試劑對照,在PCR試劑中不加模板DNA或RNA,進行PCR擴增,以檢測試劑是否污染。

3. 重復性實驗

4. 選擇不同區(qū)域的引物進行PCR擴增

如何避免PCR污染?

實驗室防污染是重中之重,畢竟影響最終檢測結果,那么我們有哪些防污染的方法呢?



除了注意避免人工操作引入的污染,我們在實驗時應設立適當的陽性對照和陰性對照,陽性對照以能出現擴增帶的標準病原體核酸為宜,并注意交叉污染的可能性,每次反應都應由一管不加模板的試劑對照及相應不含有被擴增核酸的樣品作陰性對照。同時減少PCR循環(huán)次數,PCR產物達到檢測水平就適可而止。


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  樣品研磨均勻性的重要性。樣品研磨磨損的不均是可使多個試樣的平整度發(fā)生變化,多個試樣的研磨不均,會造成研磨壓力不均,同時使得工件平面度不能達到加工要求,同時也會對研磨設備造成損耗。但,樣品的均勻性好,可確保長期加工的工件在批量加工中具有良好的表面細度,從而降低全自動研磨儀的修復頻率,提高樣品研磨效率和合格率,降低實驗應用成本。
  
  全自動組織研磨儀可用于多種行業(yè)領域,其中包括分子生物學、法醫(yī)、考古學鑒定、農業(yè)育種、牙科體檢等行業(yè)領域的應用,特別是隨著生命科學領域的研究日益深入,實驗操作往往是需要從分子生物學角度對其開展分析,而這也就進而導致了對樣品預處理的需求越來越高,而該研磨設備不但可滿足對樣品實驗的所需要求,還可高效快速的助力實驗的完成。
  
  因此在助力樣品研磨的過程中,避免產生對研磨設備的損耗是很重要的,減少損耗的出現,可減少隊研磨設備的維修頻率,進而可更好的應用研磨設備,但在應用期間,對其研磨設備的清洗維護也不可或缺,殘留的研磨液也會侵蝕研磨設備,對其造成損壞。

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