脂質(zhì)體是由同心磷脂雙分子層組成的磷脂囊泡，這些雙分子層包圍起來形成一個(gè)水性空間[1]（圖1所示）。磷脂尾由兩條疏水的長(zhǎng)脂肪酸鏈組成，它們聚集在一起以ZD限度地減少與水分子的相互作用，即疏水作用。脂質(zhì)體在藥物遞送領(lǐng)域具有重要的意義，因?yàn)槠錈o毒、生物相容性和可生物降解。最重要的是，它們可以通過將藥物插入雙層的疏水部分或脂質(zhì)體的水性內(nèi)部來遞送藥物[2]。此外，脂質(zhì)體可以保護(hù)藥物不被酶降解和被腎臟過濾掉[2]。

圖1 脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)和修飾以將藥物輸送到特定細(xì)胞

為了將脂質(zhì)體輸送到特定類型的細(xì)胞，脂質(zhì)體需要用抗體、配體[2]或其他蛋白質(zhì)或肽進(jìn)行修飾，如圖1所示。一旦修飾的脂質(zhì)體被靶細(xì)胞上的特定受體識(shí)別，它們就會(huì)在稱為受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用的過程中被細(xì)胞吸收（圖2），從而將藥物分子輸送到細(xì)胞質(zhì)中[3, 4]。例如，葉酸（一種配體）及其結(jié)合受體葉酸結(jié)合蛋白（FBP）通常用于研究癌癥研究中的藥物遞送策略，因?yàn)镕BP在多種人類癌癥中過度表達(dá)，例如卵巢癌、腦癌、腎和肺[3, 4]。

圖2 配體修飾脂質(zhì)體的受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用。DY個(gè)脂質(zhì)體被放大以清楚地顯示配體。在典型的細(xì)胞膜上可以看到配體的受體。配體與受體結(jié)合后，細(xì)胞膜在脂質(zhì)體周圍閉合形成囊泡，將攜帶藥物的脂質(zhì)體捕獲在其中，然后在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)一步加工以將藥物釋放到細(xì)胞質(zhì)中。

聚乙二醇（PEG）是眾所周知的一種物質(zhì)，通常用于防止蛋白質(zhì)的表面吸附[5]。對(duì)于脂質(zhì)體的應(yīng)用，通常添加PEG以延長(zhǎng)脂質(zhì)體在人體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，因?yàn)闆]有它，未修飾的脂質(zhì)體將在幾小時(shí)內(nèi)被參與免疫反應(yīng)的吞噬細(xì)胞清楚[2, 3]。這是因?yàn)镻EG的存在阻止了吞噬細(xì)胞的非特異性吸附，例如[3]。然而，用PEG修飾脂質(zhì)體的缺點(diǎn)是由于空間位阻，它可能會(huì)降低脂質(zhì)體上的配體與其特異性受體結(jié)合的能力。因此，必須在延長(zhǎng)脂質(zhì)體循環(huán)時(shí)間和ZD化脂質(zhì)體向靶細(xì)胞的遞送效率之間進(jìn)行折衷[2]。

脂質(zhì)體已固定在表面等離子共振（SPR）傳感表面上以研究藥物和脂質(zhì)體的相互作用[6]，并作為一種放大策略來降低干擾素和細(xì)菌毒素的檢測(cè)限，例如[7]。以下實(shí)驗(yàn)的目的是證明向葉酸修飾脂質(zhì)體中添加PEG2000會(huì)導(dǎo)致與固定在Affinite P4SPR的SPR金傳感表面上的FBP的結(jié)合降低（圖3）。SPR是一種強(qiáng)大的工具，可以實(shí)時(shí)、無標(biāo)記地表征修飾的脂質(zhì)體。此外，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用P4SPR儀器可以讓研究人員即時(shí)執(zhí)行實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，而不是多次使用公共測(cè)試ZX的設(shè)備進(jìn)行反復(fù)測(cè)量，這節(jié)省了大量的寶貴時(shí)間。

圖3 使用Affinite的P4SPR檢測(cè)聚乙二醇化和非聚乙二醇化葉酸修飾脂質(zhì)體的方案

實(shí)驗(yàn)步驟

使用P4SPR在靜態(tài)條件下測(cè)量SPR。為了固定葉酸受體，通過在MilliQ水中注射500 μL的EDC:NHS 20:5mM來激活16-MHA涂層的金棱鏡，并反應(yīng)20分鐘。通過注入1mL 100mM磷酸鹽緩沖液徹底清洗表面。然后，在由100mM磷酸鹽緩沖液（pH=5）、4mM巰基乙醇和10% v/v 甘油組成的緩沖液中注入300 μL 40nM葉酸結(jié)合蛋白（FBP）并反應(yīng)1小時(shí)。FBP固定后，表面用1mL 100mM磷酸鹽緩沖液沖洗，以評(píng)估生物傳感器表面吸附的FBP。注入1mL 1M乙醇胺并反應(yīng)5min以滅活未反應(yīng)的NHS基團(tuán)。傳感器用1mL 1×PBS（pH=7.4）沖洗，并注入500μL脂質(zhì)體樣品。所有脂質(zhì)體懸浮液的濃度為10μM，并固定10min。注入的樣品列于表1中，區(qū)別僅在于在第二個(gè)樣品中添加了DOPE-PEG 2000-NH2。在脂質(zhì)體固定期間，依次用 1 mL 1 x PBS (pH=7.4) 和 1 mL 10 mM 甘氨酸 (pH=1.5) 沖洗表面 5min，ZH用 1 x PBS (pH=7.4)沖洗。

表1

結(jié)果

圖4顯示了一組初步檢測(cè)結(jié)果，其中顯示了每個(gè)樣品的傳感圖（sensorgrams）。首先，數(shù)據(jù)顯示P4SPR能夠通過葉酸和FBP結(jié)合親和力檢測(cè)脂質(zhì)體，如從~60s到~750s（綠色）和~60s和~800s（黑色）的兩條關(guān)聯(lián)曲線所示）。此外，可以看到，與未聚乙二醇化的葉酸修飾脂質(zhì)體樣品（~110RU，黑色）相比，聚乙二醇化葉酸修飾的脂質(zhì)體樣品（綠色）的共振單位相對(duì)變化（~40RU）較低。這表明脂質(zhì)體表面PEG的存在因?yàn)榭臻g位阻而YZ了葉酸修飾脂質(zhì)體與FBP修飾傳感器表面的一些結(jié)合，即PEG阻止脂質(zhì)體上的葉酸與固定在傳感器表面上的FBP的結(jié)合。

圖4 顯示了每個(gè)脂質(zhì)體樣品獲得共振單位的部分傳感圖

從傳感器表面的表面活化和葉酸修飾到脂質(zhì)體樣品的ZZ注射，該實(shí)驗(yàn)大約需要3小時(shí)才能完成。總SPR運(yùn)行時(shí)間可能更短，因?yàn)樵诔跏歼M(jìn)樣和ZZ進(jìn)樣之間進(jìn)行了一些樣品濃度優(yōu)化。研究人員可以隨時(shí)更改實(shí)驗(yàn)條件這一事實(shí)是在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)擁有P4SPR儀器的優(yōu)勢(shì)。ZH，即使觀察到注射尖峰并且可以優(yōu)化表面化學(xué)和脂質(zhì)體濃度等其他條件，您可以隨時(shí)在P4SPR上重復(fù)和進(jìn)一步開發(fā)實(shí)驗(yàn)。

結(jié)論

Affinite P4SPR能夠檢測(cè)葉酸修飾的脂質(zhì)體，更重要的是，由于PEG引起的空間位阻，可以區(qū)分PEG和未聚乙二醇化的葉酸修飾脂質(zhì)體之間的差異，從而降低葉酸對(duì)FBP的親和力。Affinite P4SPR儀器可用作研究人員的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)平臺(tái)，在進(jìn)行生物測(cè)定或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步測(cè)試之前，以快速簡(jiǎn)單的方式表征脂質(zhì)體以獲得藥代動(dòng)力學(xué)特征[8]，從而避免浪費(fèi)寶貴的研究時(shí)間、資源和動(dòng)物。最重要的是，因?yàn)椴恍枰褂霉矞y(cè)試ZX的SPR儀器，P4SPR儀器觸手可及的加速了脂質(zhì)體的研究開發(fā)，

致謝

我們感謝 Félix Lussier 博士提供傳感圖數(shù)據(jù)。 Félix Lussier 博士來自Max Planck Institute醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞生物物理學(xué)系。

Affinite Instruments P4SPR儀器

Affinité Instruments 的 P4SPR 是一款出色的 SPR 儀器，可以提供高質(zhì)量的實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)以滿足您的研究需求。 與執(zhí)行 ELISA 檢測(cè)相比，它不需要標(biāo)記或二次反應(yīng)，并減少了大量寶貴的研究時(shí)間。 由于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，它還可以以比 ELISA 更高的靈敏度檢測(cè)低親和力相互作用。

參考文獻(xiàn)

[1] Parveen Kumar, Peipei Huo, and Bo Liu, “Formulation Strategies for Folate-Targeted Liposomes and Their Biomedical Applications”, Pharmaceutics, 11, 381 (2019).

[2] Robert J. Lee and Philip S. Low, “Delivery of Liposomes into Cultured KB Cells via Folate Receptor-mediated Endocytosis”, J. Biol. Chem., 269, 3198-3204 (1994).

[3] Alberto Gabizon, Aviva T. Horowitz, Dorit Goren, Dina Tzemach, Hilary Shmeeda, and Samuel Zalipsky, “In Vivo Fate of Folate-Targeted Polyethylene-Glycol Liposomes in Tumor-Bearing Mice”, Clin. Cancer Res., 9, 6551–6559 (2003).

[4] Mary Jo Turk, David J. Waters, Philip S. Low, “Folate-conjugated liposomes preferentially target macrophages associated with ovarian carcinoma”, Cancer Lett., 213, 165-172 (2004).

[5] Roger Michel, Stephanie Pasche, Marcus Textor, and David G. Castner, ”The Influence of PEG Architecture on Protein Adsorption and Conformation”, Langmuir, 21, 12327-12332 (2005).

[6] Cheryl L. Baird, Elizabeth S. Courtenay, and David G. Myszka, “Surface plasmon resonance characterization of drug/liposome interactions”, Anal. Biochem., 310, 93-99 (2002).

[7] Agustina Gomez-Hens, Juan Manuel Fernandez-Romero, “The role of liposomes in analytical processes”, Trends Analyt. Chem., 24, 9-19 (2005).

[8] B.J. Crielaard, A. Yousefi, J.P. Schillemans, C. Vermehren, K. Buyens, K. Braeckmans, T. Lammers, G. Storm, “An in vitro assay based on surface plasmon resonance to predict the in vivo circulation kinetics of liposomes”, J. Control. Release, 156, 307-314 (2011).

下一代創(chuàng)新性儀器：Affinité Instruments便攜多通道表面等離子體共振分析儀P4SPR

便攜式，四通道SPR
憑借緊湊的設(shè)計(jì)，您可以通過減少樣品制備時(shí)間和在工作臺(tái)或現(xiàn)場(chǎng)使用SPR來更快地進(jìn)行分析測(cè)試。我們獨(dú)特的技術(shù)不僅可以檢測(cè)和監(jiān)測(cè)生物分子如小肽和大蛋白，還可以檢測(cè)和監(jiān)測(cè)農(nóng)藥、微量藥物、自組裝單層和納米材料。
 

•    4通道微流體

•    2750 nm/RI靈敏度

技術(shù)規(guī)格

• 外形物理尺寸（mm）：175 × 155 × 55

• 重量：＜1.3 kg

• USB供電

• 微流體細(xì)胞Z小體積：150 μL

• 金薄膜SPR的典型靈敏度

• 動(dòng)態(tài)范圍從1.30到1.39折射率單位

• 信號(hào)變化系數(shù)＞0.6%

• 多色光源

• LabVIEW作為控制軟件（開源）

• 兼容Ridgeview的TraceDrawer

                              

特點(diǎn)與特色

• 便攜/可用

• 高精確度，高準(zhǔn)確度，一次分析包括三次測(cè)量和一次測(cè)控
  

• 復(fù)雜介質(zhì)中直接檢測(cè)

• 可與其他分析技術(shù)（例如HPLC、MS、Raman、Fluo）整合

• 維護(hù)費(fèi)用低

• 強(qiáng)大

• 低吞吐量

• 使用方便

                             

經(jīng)濟(jì)實(shí)惠
P4SPR顯著降低了與大多數(shù)商業(yè)SPR技術(shù)相關(guān)的成本障礙。以很小的成本獲取基準(zhǔn)SPR技術(shù)，以充分利用SPR的優(yōu)勢(shì)并加速您的發(fā)現(xiàn)。

1年保修
我們對(duì)學(xué)生測(cè)試的P4SPR的穩(wěn)健性充滿信心，這就是為什么我們提供一年保修的原因。

專家支持
我們的團(tuán)隊(duì)由表面等離子體共振、分析化學(xué)和儀器科學(xué)、蛋白質(zhì)科學(xué)和工業(yè)分析過程開發(fā)方面的專家組成。我們隨時(shí)準(zhǔn)備為您提供支持。

適用于分子和化學(xué)測(cè)試的無標(biāo)記和實(shí)時(shí)SPR傳感技術(shù)
P4SPR的3 Ms：主要特點(diǎn)是釋放研究的全部潛力

 

模塊化
適用于不同的光學(xué)條件、流體要求和其他分析技術(shù)如電化學(xué)、HPLC和MS。

移動(dòng)化
比普通教科書本更小更輕。USB供電的P4SPR可以在幾分鐘內(nèi)打包或準(zhǔn)備。便于在實(shí)驗(yàn)室和現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)測(cè)試。

多通道
四通道設(shè)計(jì)，提供經(jīng)過背景校正的三重采樣數(shù)據(jù)，每次都能獲得精確、準(zhǔn)確的結(jié)果。

                            

應(yīng)用

• 對(duì)慢動(dòng)力學(xué)和弱生物分子相互作用具有高靈敏度

• 實(shí)驗(yàn)開發(fā)

• 結(jié)合確認(rèn)

• 半定量測(cè)試

• 質(zhì)量控制

• OEM系統(tǒng)集成

                        
 
合作者和客戶
 
 

紡織工業(yè)中如何實(shí)現(xiàn)紡織物具有耐久的顏色,功能表面？等離子表面處理應(yīng)用于紡織工業(yè)對(duì)產(chǎn)品表面進(jìn)行改性技術(shù),提高親水性,面料、纖維和紗線的功能涂層與功能化等離子處理。

等離子體技術(shù)在紡織物加工中能改善復(fù)合纖維的粘結(jié),改善表面性能，提高表面的潤(rùn)濕度等，這種處理技術(shù)是干法處理，經(jīng)過驗(yàn)證的，有效的，經(jīng)濟(jì)的和環(huán)保的表面處理方法，傳統(tǒng)工藝中，紡織物在印染前還有經(jīng)過多種煮漂等工序，耗水耗能，對(duì)環(huán)境污染極大，而等離子技術(shù)是讓生產(chǎn)過程綠色環(huán)保，有效減少污染，低價(jià)經(jīng)營(yíng)成本和工藝得到提高。因此從發(fā)展趨勢(shì)看，等離子清洗機(jī)的應(yīng)用在紡織物表面改性上具有很大的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

等離子體技術(shù)處理紡織物的作用是：

1. 改善吸濕性

2. 改善抗靜電性

3. 改善染色性

4. 提高防粘性

大氣等離子清洗機(jī)和真空等離子清洗機(jī)都能應(yīng)用于紡織工業(yè)制造過程中，低溫等離子體中的高能活性粒子于纖維表面相互作用，例如表面活化、接枝聚合、表面清洗等，改變了紡織物表面的形貌特征和化學(xué)組成，進(jìn)而改善紡織物表面功能特性，還能借助等離子體表面技術(shù)，研發(fā)創(chuàng)造新的功能性涂層面料，賦予產(chǎn)品新的附加值，提高企業(yè)的核心競(jìng)爭(zhēng)力。不過根據(jù)不同的材料、處理目的和生產(chǎn)工藝的差異化，廠家會(huì)選用不同的設(shè)備。

金鉑利萊科技有限公司（http://www.sz-kimberlite.com）能為客戶定制專屬的解決方案，讓企業(yè)在生產(chǎn)過程中環(huán)保、減少原料的浪費(fèi)。等離子清洗設(shè)備能搭載客戶原有的流水線設(shè)備，一體化在線生產(chǎn)。

同時(shí)測(cè)試體積和表面電阻，需要配專業(yè)的測(cè)試屏蔽箱，對(duì)體積電阻和表面電阻測(cè)試進(jìn)行切換，這個(gè)在選購(gòu)儀器時(shí)需要和廠家進(jìn)行確認(rèn)，我們公司一直都在用的是北京冠測(cè)儀器公司GEST121體積表面電阻率測(cè)試儀，專門用于體積和表面電阻的測(cè)試，有專業(yè)的測(cè)試屏蔽箱，還可以根據(jù)試樣大小進(jìn)行電極的更換。

主要用于測(cè)試絕緣材料的絕緣電阻、體積電阻及表面電阻值，本儀器是一臺(tái)通用試驗(yàn)儀器，只要不超過主機(jī)的測(cè)試量程，都可以測(cè)試，配備不同的電極，適用于橡膠、塑料、薄膜、及粉體、液體、及固體和膏體形狀的各種絕緣材料體積和表面電阻值的測(cè)定

技術(shù)指標(biāo)

1、電阻測(cè)量范圍： 0.01×104Ω ～1×1018Ω。

2、電流測(cè)量范圍為： 2×10-4A～1×10-16A

3、顯 示 方 式：數(shù)字液晶顯示

4、內(nèi)置測(cè)試電壓： 10V 、50V、100V、250、500、1000V

5、基本準(zhǔn)確度：1% (*注)

6、使用環(huán)境： 溫度：0℃～40℃，相對(duì)濕度<80%

7、機(jī)內(nèi)測(cè)試電壓： 10V/50V/100/250/500/1000V 任意切換

8、供電形式： AC 220V，50HZ，功耗約5W

9、儀器尺寸： 285ｍｍ× 245ｍｍ× 120 mm

10、質(zhì)量： 約2.5KG

PFAS(全氟和多氟烷基物質(zhì))是一種廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)中的人造化合物，其耐高溫，防污防滑的特性使得它在不粘炊具，食品快餐盒，消防泡沫，防污織物和家具中被廣泛應(yīng)用。因極難在環(huán)境中降解，具有長(zhǎng)距離遷移及生物累積性的特點(diǎn)，使得PFAS一旦進(jìn)入人體，就會(huì)一直留在人體之中。PFAS類物質(zhì)的累積會(huì)引起諸多人類健康問題，如癌癥、內(nèi)分泌紊亂和不孕癥等。因此，對(duì)他們的監(jiān)測(cè)至關(guān)重要。

最近CEM北美實(shí)驗(yàn)室用EDGE加壓流體萃取系統(tǒng)分別對(duì)隨機(jī)購(gòu)買的黃瓜、紙杯蛋糕及微波食品進(jìn)行PFAS的提取，同時(shí)以土壤為樣本進(jìn)行低中高濃度的PFAS加標(biāo)實(shí)驗(yàn)。

為確保實(shí)驗(yàn)不受PFAS干擾，已對(duì)EDGE系統(tǒng)中可能存在PFAS的材料進(jìn)行了全面替換，并在測(cè)試過程中，避免使用可能含有PFAS的耗材及檢測(cè)設(shè)備。

實(shí)驗(yàn)方法

依據(jù)FDA 21CFR 177.1550 方法，對(duì)黃瓜、紙杯蛋糕、卷餅面包皮進(jìn)行測(cè)試。

EDGE優(yōu)勢(shì)

?自動(dòng)化程度高

?提取過程完成凈化

?操作簡(jiǎn)單

?方法設(shè)置靈活

?不含PFAS（P/N906725）

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

Cucumber黃瓜

Snack Cake 杯子蛋糕

Turnover 卷餅面包皮

Soil土壤

EDGE對(duì)低、中、高濃度加標(biāo)的土壤樣品的提取，單樣品提取時(shí)間小于10分鐘，并可獲得理想回收率及RSD值，同時(shí)，在黃瓜、紙杯蛋糕、微波食品中均檢出PFAS物質(zhì)。

欲了解更多文章、儀器相關(guān)信息，請(qǐng)與我們聯(lián)系，聯(lián)系電話：010-65528800，郵箱：sales@pynnco.com。

PFAS(全氟和多氟烷基物質(zhì))是一種廣泛應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)中的人造化合物，其耐高溫、防污、防滑的特性使得它在不粘炊具，食品快餐盒，消防泡沫，防污織物和家具中被廣泛應(yīng)用。因極難在環(huán)境中降解，具有長(zhǎng)距離遷移及生物累積性的特點(diǎn)，使得 PFAS 一旦進(jìn)入人體，就會(huì)一直留在人體之中。PFAS 類物質(zhì)的累積會(huì)引起諸多人類健康問題，如癌癥、內(nèi)分泌紊亂和不孕癥等。因此，對(duì)他們的監(jiān)測(cè)至關(guān)重要。 

最近 CEM 北美實(shí)驗(yàn)室用 EDGE 加壓流體萃取系統(tǒng)分別對(duì)隨機(jī)購(gòu)買的黃瓜、紙杯蛋糕及微波食品進(jìn)行 PFAS 的提取，同時(shí)以土壤為樣本進(jìn)行低中高濃度的 PFAS 加標(biāo)實(shí)驗(yàn)。為確保實(shí)驗(yàn)不受 PFAS 干擾，已對(duì) EDGE 系統(tǒng)中可能存在 PFAS 的材料進(jìn)行了全面替換，并在測(cè)試過程中，避免使用可能含有 PFAS 的耗材及檢測(cè)設(shè)備。

EDGE 對(duì)低、中、高濃度加標(biāo)的土壤樣品的提取，單樣品提取時(shí)間小于 10 分鐘，并可獲得理想回收率及 RSD 值。同時(shí)，在黃瓜、紙杯蛋糕、微波食品中均檢出 PFAS 物質(zhì)。