本方案建立了以C18固相萃取柱對豬肉樣品中4種喹諾酮類藥物萃取凈化方法，進行低中高三水平基質加標，都能獲得滿意的實驗結果，回收率介于84%~115%之間，RSD值小于10 %。

實驗過程

樣品提取

準確稱取粉碎均勻的豬肉樣品2.0 g于干凈離心管中，加入10 mL 5%甲酸乙腈溶液，再加入1 g NaCl，2500 r/min渦旋提取10 min，8000 r/min離心2 min，取上清液5 mL氮吹近干，用5 mL 5 %甲酸水溶液復溶，待凈化。

樣品凈化

活化：5 mL甲醇，5 mL水

上樣：上述待凈化液

淋洗：5 mL 10 %甲醇水

洗脫：5 mL 10 %氨水甲醇

收集洗脫液，氮吹近干，初始流動相復溶，上機。

基質標準曲線溶液的制備

選同類型空白豬肉樣品，按上述前處理方法進行操作，取適量的標液配制成合適濃度的基質曲線。

儀器條件

色譜條件

儀器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）

色譜柱：菲羅門 Titank C18 (2.1 mm×50 mm，3 μm)

流動相：A：水（0.1 %甲酸）   B：甲醇（0.1 %甲酸）

洗脫方式：梯度洗脫，見表1

流速：0.3 mL/min

柱溫：30℃

進樣量：5 μL

質譜條件

離子源：HESI

電噴霧電壓：3500 V

鞘氣壓力：40 arb

輔氣壓力：2 arb      

離子傳輸管：380 ℃

輔氣溫度：350 ℃

實驗結果

表3  4種喹諾酮類加標回收實驗結果

訂購信息

前言

       多環(huán)芳烴化合物作為一類常見的有機污染物，廣泛存在于環(huán)境當中。土壤因為其基質復雜更是多環(huán)芳烴的常見載體。目前土壤中的多環(huán)芳烴污染已經比較嚴重，在工業(yè)發(fā)達地區(qū)尤為突出，所以對土壤中多環(huán)芳烴含量的監(jiān)控也就尤為重要。

       加壓流體萃取技術是近年來發(fā)展起來的一種在高溫、高壓條件下快速處理固體或半固體樣品的方法，與常用的索氏提取、超聲提取、微波萃取技術等方法相比，具有節(jié)省溶劑、快速、回收率高、健康環(huán)保、自動化程度高等明顯優(yōu)勢。

       本實驗參考方法HJ 805-2016和HJ 783-2016，簡要介紹了使用萊伯泰科全自動GX快速溶劑萃取儀Flex-HPSE提取土壤中的16種多環(huán)芳烴，SPE1000全自動固相萃取系統(tǒng)凈化，MultiVap-10定量平行濃縮儀濃縮后用氣質聯(lián)用儀進行檢測的一整套方法。實驗方法簡便、回收率較高且平行性良好，適用于土壤中16種多環(huán)芳烴的檢測。

1、實驗部分

1.1儀器與試劑

Flex-HPSE全自動GX快速溶劑萃取儀（萊伯泰科公司）

SPE1000全自動固相萃取系統(tǒng)（萊伯泰科公司）

MultiVap-10定量平行濃縮儀（萊伯泰科公司）

       7890B氣相色譜-5977B質譜聯(lián)用儀（安捷倫公司）；

       16種多環(huán)芳烴標準儲備液（200μg / mL，溶劑為正己烷）；

       二氯甲烷（色譜純）；正己烷（色譜純）；丙酮（色譜純）；

       硅膠固相萃取柱（1g/6mL，LabTech）；弗羅里硅土固相萃取柱（1g/6mL，LabTech）；

       硅藻土（置于馬弗爐中400℃烘4h，冷卻后貯于玻璃瓶中于干燥器內保存）。

1.2標準工作液配置

       移取100μL的多環(huán)芳烴標準儲備液至10mL的容量瓶，用正己烷定容至刻度，搖勻。配成濃度2μg/mL的溶液，作為標準工作液。

1.3土壤樣品處理

1.3.1 提取

       取研細過篩后的環(huán)境土樣20g，與8g硅藻土混合均勻，裝填至34mL的萃取罐中。同樣方法裝填好兩個萃取罐后，置于Flex-HPSE中（雙通道運行，Z多可連續(xù)萃取30個樣品），萃取溶劑為丙酮－正己烷  (1：1，體積比) 混合溶液，系統(tǒng)壓力10.34Mpa，萃取溫度100℃，加熱平衡時間2min，靜態(tài)萃取時間5min，沖洗體積60%，N2吹掃60s。循環(huán)運行兩次。萃取液收集到50mL濃縮杯中。

1.3.2 濃縮

       將濃縮杯置于MultiVap-10中，濃縮溫度35℃，使用定容模式。濃縮過程中使用正己烷淋洗杯壁，Z后置換溶劑為正己烷，樣品體積在1mL左右。

1.3.3 凈化

凈化過程采用弗羅里硅土柱凈化和硅膠柱凈化兩種方式。具體方法如下：

（1）弗羅里硅土柱凈化

       按照圖1方法進行凈化實驗，其中二氯甲烷正己烷溶液配比為1：9，體積比。收集液用MultiVap-10濃縮至近干，用正己烷定容至1mL，待測。

圖1.弗羅里硅土柱凈化方法

（2）硅膠柱凈化

       按照圖2方法進行凈化實驗，其中二氯甲烷正己烷溶液配比為1：1，體積比。收集液用MultiVap-10濃縮至近干，用正己烷定容至1mL，待測。

圖2.硅膠柱凈化方法

1.4樣品加標處理

       按1.3.1方法裝填樣品過程中，加1mL的1.2方法所配的標準工作液至34mL的萃取罐中，然后按照1.3.1~1.3.3方法進行實驗，兩種凈化實驗各六組，Z后用正己烷定容至1mL，用來測定加標回收率。

1.5 GC/MS檢測條件

       色譜柱：HP-5MS，30m*0.25mm*0.25μm；進樣口溫度：280℃；不分流進樣；柱流速：1.0mL/min；恒流模式；進樣量：1.0μL；柱溫：50℃保持3min，以10℃/min升至280℃，保持12min。

       電子轟擊源（EI）；四極桿溫度：150℃；離子源溫度：230℃；輔助加熱溫度：290℃；掃描模式：全掃描；掃描范圍：45amu~450amu；溶劑延遲時間：10min。

2、實驗結果

2.1多環(huán)芳烴標準液總離子流譜圖

圖3多環(huán)芳烴標準液總離子流譜圖

2.2 加標樣品的總離子流譜圖

圖4樣品加標的總離子流譜圖

2.3 加標樣品的回收率

表1硅膠柱凈化加標樣品回收率

表2弗羅里硅土柱凈化加標樣品回收率

3、實驗結論

       由表1和表2可知，加壓流體萃取-固相萃取-氣質法測定土壤中的16種多環(huán)芳烴，加標回收率為63.6%~116.9%， RSD為3.1%~8.8%。本方法測定的樣品加標濃度為0.1mg/kg。

       用該方法進行實際土壤樣品檢測，其中萘的含量為7.1 ug/kg，芴的含量為15.2ug/kg，二苯并[a, h]蒽的含量為12.5 ug/kg，其余13種多環(huán)芳烴未檢出。

       50mL濃縮杯同時適用于Flex-HPSE和MultiVap-10兩種儀器，實驗過程中盡可能減少液體的轉移，能夠有效減少轉移過程中造成的損失。

       綜上所述，加壓流體萃取-固相萃取-氣質法測定土壤中的16種多環(huán)芳烴這一實驗中，萊伯泰科Flex-HPSE全自動GX快速溶劑萃取儀、SPE1000全自動固相萃取系統(tǒng)和MultiVap-10定量平行濃縮儀能夠GX、穩(wěn)定地達到實驗的要求，可以提供領域范圍內的良好應用。

4、參考標準

1、HJ 805-2016 土壤和沉積物  多環(huán)芳烴的測定  氣相色譜-質譜法

2、HJ 783-2016 土壤和沉積物  有機物的提取   加壓流體萃取法

前言

       2016年5月31日，《土壤污染FZ行動計劃》(簡稱“土十條”)正式由國務院印發(fā)實施。此次詳查對檢測項目、分析方法和參考標準做了明確的規(guī)定，其中關于土壤中有機氯農藥的測定，采用《土壤和沉積物 有機氯農藥的測定 氣相色譜-質譜法》報批稿測試方法。

       加壓流體萃取技術是近年來發(fā)展起來的一種在高溫、高壓條件下快速處理固體或半固體樣品的方法，與常用的索氏提取、超聲提取、微波萃取技術等方法相比，具有節(jié)省溶劑、快速、回收率高、健康環(huán)保、自動化程度高等明顯優(yōu)勢。

       本實驗介紹了使用萊伯泰科全自動GX快速溶劑萃取儀Flex-HPSE提取土壤中的26種有機氯，SPE1000全自動固相萃取系統(tǒng)凈化，MultiVap-10定量平行濃縮儀濃縮后用氣質聯(lián)用儀進行檢測的一整套方法。

1、實驗部分

1.1儀器和設備

Flex-HPSE全自動GX快速溶劑萃取系統(tǒng)（萊伯泰科公司）；

SPE1000全自動固相萃取系統(tǒng)（萊伯泰科公司）；

MultiVap-10定量平行濃縮儀（萊伯泰科公司）；

7890B氣相色譜-5977B質譜聯(lián)用儀（安捷倫公司）。

1.2 試劑和樣品

       正己烷（農殘級）；丙酮（農殘級）；

       快速溶劑萃取溶劑：正己烷-丙酮混合溶劑， 1+1 （V/V）；

       固相萃取洗脫溶劑：正己烷-丙酮混合溶劑，9+1 （V/V）； 

       有機氯標準使用液（200μg / mL，溶劑為正己烷）；

       內標使用液（10 mg/L，溶劑為正己烷）；

       替代物使用液（10 mg/L，溶劑為正己烷）；

       弗羅里硅土固相萃取柱（1g/6mL，LabTech）；

       硅藻土（置于馬弗爐中450℃烘4h，冷卻后貯于玻璃瓶中于干燥器內保存）。

1.3土壤樣品處理

1.3.1 提取

       取研細過篩后的環(huán)境土樣5g，與3g硅藻土混合均勻，裝填至11mL的萃取罐中。同樣方法裝填好兩個萃取罐后，置于Flex-HPSE中（雙通道運行，Z多可連續(xù)萃取30個樣品），萃取溶劑為丙酮－正己烷  (1：1，體積比) 混合溶液，系統(tǒng)壓力10.34Mpa，萃取溫度100℃，加熱平衡時間2min，靜態(tài)萃取時間6min，沖洗體積60%，N2吹掃60s。循環(huán)運行兩次。萃取液收集到50mL濃縮杯中。

1.3.2 濃縮

       將濃縮杯置于MultiVap-10中，濃縮溫度35℃，使用定容模式。濃縮過程中使用正己烷淋洗杯壁，Z后置換溶劑為正己烷，樣品體積在1mL左右。

1.3.3 凈化

       凈化過程采用弗羅里硅土柱凈化方式。具體方法如下：

       按照圖1方法進行凈化實驗，其中丙酮正己烷溶液配比為1：9，體積比。收集液用MultiVap-10濃縮至近干，用正己烷定容至1mL，待測。

圖1.弗羅里硅土柱凈化方法

1.4樣品加標回收率實驗

       按1.3.1方法裝填樣品，進行加標實驗，加標濃度為20μg/kg，然后按照1.3.1~1.3.3方法進行實驗，共進行三組6個平行樣品，Z后用正己烷定容至1mL，用來測定加標回收率。

1.5 GC/MS檢測條件

       色譜柱：HP-5MS，30m*0.25mm*0.25μm；進樣口溫度：280℃；不分流進樣；載氣流速：1.0mL/min；恒流模式；進樣量：1.0μL；柱溫：50℃保持3min，以10℃/min升至280℃，保持12min。

       離子源：電子轟擊源，70eV；四極桿溫度：180℃；離子源溫度：280℃；輔助加熱溫度：290℃；溶劑延遲時間：3.0min；掃描模式：SIM+Scan（化合物保留時間，定量和定性離子見下表）

表1 有機氯定量和定性選擇離子

2、實驗結果

2.1  26種有機氯農藥色譜圖分離情況（含內標和替代）

圖2 有機氯標準液總離子流譜圖

2.2  6個平行加標離子流重疊圖

圖3  6個平行加標離子流重疊圖

2.3 加標樣品的回收率

表2弗羅里硅土柱凈化加標樣品回收率

3、實驗結論

       由表2可知，加壓流體萃取-固相萃取-氣質法測定土壤中的26種有機氯，加標回收率為70.7%~104.8%，替代物標品回收率為94.3%~101.2%。 RSD在6%以下。本方法測定的樣品加標濃度為20μg/kg。

       50mL濃縮杯同時適用于Flex-HPSE和MultiVap-10兩種儀器，實驗過程中盡可能減少液體的轉移，能夠有效減少轉移過程中造成的損失。

       綜上所述，加壓流體萃取-固相萃取-氣質法測定土壤中的有機氯這一實驗中，萊伯泰科Flex-HPSE全自動GX快速溶劑萃取儀、SPE1000全自動固相萃取系統(tǒng)和MultiVap-10定量平行濃縮儀能夠GX、穩(wěn)定地達到實驗的要求，可以提供領域范圍內的良好應用。

4、參考標準

1、《土壤和沉積物 有機氯農藥的測定 氣相色譜-質譜法》報批稿

2、HJ 783-2016 土壤和沉積物 有機物的提取 加壓流體萃取法