全部評(píng)論(4條)
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- chenbufen0275 2013-03-13 00:00:00
- 首先要分離這個(gè)蛋白酶，這個(gè)你要了解該蛋白的性質(zhì)，
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- 韓倏?jī)?/a> 2013-04-06 00:00:00
- 首先，你必須確定目標(biāo)蛋白的表達(dá)在細(xì)胞外或細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞外，通過(guò)離心收集發(fā)酵液中收集細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌破碎的物理和化學(xué)方法，如凍 - 融，機(jī)械破碎，使用溶菌酶。后純化所需的色譜。
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- 飾演故事角色 2013-04-07 00:00:00
- 首先，你必須確定目標(biāo)蛋白的表達(dá)在細(xì)胞外或細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞外，通過(guò)離心收集發(fā)酵液中收集細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌破碎的物理和化學(xué)方法，如凍 - 融，機(jī)械破碎，使用溶菌酶。后純化所需的色譜。
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- 蕾*Kong專(zhuān)屬 2013-03-09 00:00:00
- 首先，去CJ體和殘余的發(fā)酵液，一般高速離心就可以，5000r/min離心1min.取上清。此部要根據(jù)蛋白質(zhì)的特點(diǎn)來(lái)做。若果蛋白酶是在細(xì)胞內(nèi)那么要先破碎細(xì)胞，如果該酶的分子量過(guò)大，那么要減小離心轉(zhuǎn)速。 其次，蛋白酶溶液中根據(jù)酶的性質(zhì)，處理純化或提取。常用方法是有機(jī)溶劑提取法，陰、陽(yáng)離子交換柱層析發(fā)，液相色譜法等。這要根據(jù)蛋白質(zhì)的性質(zhì)，是否帶電荷帶什么電荷等。 關(guān)于酶活，應(yīng)該每一步都要測(cè)定酶活，可用該酶分解蛋白質(zhì)的特點(diǎn)，看一定的酶量在單位時(shí)間里分解蛋白的量，如果有特殊吸收峰的話可用紫外分光光度計(jì)測(cè)吸光度。 表達(dá)量，一般定量表達(dá)，常用方法是基因水平Realtime-PCR，蛋白水平，westen-blot法。也可參考其他相關(guān)文獻(xiàn)的方法。
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