全部評(píng)論(5條)
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- wq1102521807 2012-06-28 00:00:00
- 當(dāng)然要滅菌啊，要是提取液里有雜菌，很容易提出雜菌的DNA和RNA啊~
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- vg枯產(chǎn)喏 2012-06-20 00:00:00
- 我做過CTAB提前取，其實(shí)提DNA的話是無所謂的，畢竟DNAase沒這么多哦。提RNA的時(shí)候要注意高壓滅菌，主要是對(duì)RNAase進(jìn)行滅活，防止其對(duì)RNA的降解。不知道你是準(zhǔn)備做什么，一般提取植物用CTAB多一點(diǎn)哦。如有問題繼續(xù)追問。
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- asd704616717a 2012-06-20 00:00:00
- 怕有DNAase和RNAase把要提取的東東都降解了！
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- a340244226 2015-09-26 00:00:00
- 否則會(huì)混入細(xì)菌的DNA和rna
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- af05522 2016-03-30 10:00:40
- CTAB法原理 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化銨)，是一種陽離子去污劑，具有從低離子強(qiáng)度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性.在高離子強(qiáng)度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB與蛋白質(zhì)和多聚糖形成復(fù)合物，只是不能沉淀核酸.通過有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白，多糖，酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來. CTAB提取緩沖液的經(jīng)典配方 Tris-HCl (pH8.0)提供一個(gè)緩沖環(huán)境，防止核酸被破壞； EDTA螯合Mg2+或Mn2+離子，YZDNase活性； NaCl 提供一個(gè)高鹽環(huán)境，使DNP充分溶解，在于液相中； CTAB溶解細(xì)胞膜，并結(jié)合核酸，使核酸便于分離； β-巰基乙醇是抗氧化劑，有效地防止酚氧化成醌，避免褐變，使酚容易去除 PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的絡(luò)合物，能與多酚形成一種不溶的絡(luò)合物質(zhì)，有效去除多酚，減少DNA中酚的污染；同時(shí)它也能和多糖結(jié)合，有效去除多糖. 用酚抽提細(xì)胞DNA時(shí)，有什么作用? 使蛋白質(zhì)變性，同時(shí)YZ了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時(shí)，由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相. 使用酚的優(yōu)點(diǎn)：1.有效變性蛋白質(zhì)；2YZ了DNase的降解作用.缺點(diǎn)：1.能溶解10-15%的水，從而溶解一部分poly(A)RNA.2.不能完全YZRNase的活性. 氯仿的作用? 氯仿：克服酚的缺點(diǎn)；加速有機(jī)相與液相分層. Z后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的跡量酚.（酚易溶于氯仿中） 用酚-氯仿抽提細(xì)胞基因組DNA時(shí)，通常要在酚-氯仿中加少許異戊醇，為什么? 異戊醇：減少蛋白質(zhì)變性操作過程中產(chǎn)生的氣泡.異戊醇可以降低表面張力，從而減少氣泡產(chǎn)生.另外，異戊醇有助于分相，使離心后的上層含DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機(jī)溶劑相維持穩(wěn)定. 用乙醇沉淀DNA時(shí)，為什么加入單價(jià)的陽離子? 用乙醇沉淀DNA時(shí)，通常要在溶液中加入單價(jià)的陽離子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的負(fù)電荷，減少DNA分子之間的同性電荷相斥力，而易于聚集沉淀. 簡(jiǎn)言之，無論哪種抽提方法，藥品的作用基本都是一樣的
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