ELISA實(shí)驗(yàn)中加樣應(yīng)注意的問(wèn)題

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　　ELISA實(shí)驗(yàn)以其靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，就有可能產(chǎn)生不準(zhǔn)確的結(jié)果。今天我們就來(lái)介紹一下實(shí)驗(yàn)中加樣可能會(huì)碰到的問(wèn)題。

　　1、加樣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))。遇到這種情況，如果標(biāo)本為血清的話，可以將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘;如果標(biāo)本為血漿，就必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。

　　2、手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱的時(shí)候需要等待。如果標(biāo)本較多時(shí)，可以分批操作，加樣后一定要及時(shí)放入孵箱。

　　3、加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外，血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。遇到這種情況，可以在加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，請(qǐng)選擇FAME或其他處理儀器加酶試劑。

　　為了得到準(zhǔn)確的結(jié)果，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行加樣，同時(shí)做好室內(nèi)質(zhì)控，要以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度檢測(cè)每一份標(biāo)本。

　　公司主體是一批有理想、有抱負(fù)、勇于創(chuàng)新的年輕人，目前員工百余人，ELISA試劑盒均來(lái)自全國(guó)各高校的多學(xué)科專業(yè)，為技術(shù)提供一份力量。

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　　做ELISA實(shí)驗(yàn)需要注意哪些問(wèn)題?

　　Elisa實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該注意的問(wèn)題,包括樣品稀釋、試劑盒平衡、樣品和試劑的混勻、加樣、溫育等問(wèn)題.Elisa試劑盒有著準(zhǔn)確性高、靈敏度高、特異性強(qiáng)的諸多優(yōu)點(diǎn),深受廣大用戶朋友的喜愛(ài).然而,在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,也需要注意很多問(wèn)題.對(duì)此,上海哈靈生物提醒你您,需要遵守一些規(guī)則,才能更好地進(jìn)行實(shí)驗(yàn),取得較好的實(shí)驗(yàn)成果.

　　Elisa方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定.在Elisa測(cè)定中影響因素較多,在檢測(cè)過(guò)程中除正常反應(yīng)外,有時(shí)常見(jiàn)到一些錯(cuò)誤的結(jié)果.引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：標(biāo)本因素;試劑因素;操作因素.

　　1.樣品稀釋

　　一般產(chǎn)品的樣品稀釋倍數(shù)均通過(guò)大量試驗(yàn)確定,以保證試驗(yàn)的靈敏度和特異性.酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng),如果血清不稀釋,不可避免會(huì)產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng),出現(xiàn)假陽(yáng)性.

　　2.試劑盒平衡

　　Elisa中所有試劑和板條均應(yīng)在試驗(yàn)前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20～30分鐘以上.平衡時(shí)間太短會(huì)造成試劑混勻不夠,樣品孵育時(shí)間相對(duì)縮短,ELISA反應(yīng)不夠充分.冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘.

　　3.樣品和試劑的混勻

　　在稀釋前、后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗(yàn)的均一性.

　　4.加樣

　　加樣是一項(xiàng)很重要的步驟.加樣不可太快,要避免加在孔壁上部,不可濺出和產(chǎn)生氣泡.加樣太快,無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性.加在孔壁上部的非包被區(qū),易導(dǎo)致非特異吸附.

　　5.溫育

　　溫育是ELISA測(cè)定中影響測(cè)定成敗為關(guān)鍵的一個(gè)因素.ELISA作為一種固相免疫測(cè)定,抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行,要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原完全結(jié)合,必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間.

　　6.洗板

　　固相免疫測(cè)定技術(shù)是一種非均相免疫測(cè)定技術(shù),需以洗滌操作將特異結(jié)合于固相的抗原或抗體與反應(yīng)溫育過(guò)程中吸附的非特異成份分離開來(lái),以保證ELISA測(cè)定的特異性.洗液盡量不要溢出孔外;加洗液后要靜置1分鐘,甩去板孔中洗液后,一定要大力拍干;及時(shí)更換吸水紙,尤其是拍過(guò)酶標(biāo)記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗(yàn)結(jié)果.

　　7.顯色

　　顯色一定要控制時(shí)間,根據(jù)試劑盒說(shuō)明操作即可.一般來(lái)說(shuō),顯色時(shí)間過(guò)短,結(jié)果偏低;顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng),空白增高或者非特異性顯色增加.

　　8.比色

　　比色要注意波長(zhǎng)的選擇.以TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用,而前者比色波長(zhǎng)為450nm,后者為492nm,濾光片需根據(jù)要求隨時(shí)更換.因此,容易出現(xiàn)濾光片錯(cuò)用的問(wèn)題.

　　做ELISA實(shí)驗(yàn)需要注意哪些問(wèn)題? 我司由具有行業(yè)背景和豐富市場(chǎng)經(jīng)驗(yàn)的業(yè)人士組成，于為生命科學(xué)研究域提供產(chǎn)品，為廣大科研工作者提供服務(wù)。 既能滿足研發(fā)類客戶對(duì)產(chǎn)品種類、包裝的特殊要求，也能滿足生產(chǎn)型企業(yè)從小試、中試到規(guī)模化生產(chǎn)各個(gè)階段的綜合需求。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作，共創(chuàng)美好的未來(lái)。

　　Elisa實(shí)驗(yàn)：Elisa如果加樣，有哪些小竅門!

　　ELISA實(shí)驗(yàn)中，加樣 一定是繞不開的一環(huán)!ELISA測(cè)定操作非常簡(jiǎn)單，一般涉及到樣本的收集保存、試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、洗板、顯色、結(jié)果判斷和結(jié)果報(bào)告及解釋等方面，其中任一步驟的不當(dāng)都會(huì)影響測(cè)定結(jié)果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。

　　ELISA實(shí)驗(yàn)中一般需要 4 次加樣，即加樣本、加檢測(cè)抗體、加底物和加終止液。

　　● 實(shí)驗(yàn)室使用的微量加樣器應(yīng)注意保養(yǎng)并定期校正。ELISA比較敏感，每孔加入液體量誤差會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)差別，因此避免儀器帶來(lái)誤差。

　　● 加樣前，溶液充分混勻，加樣時(shí)不可90度向孔中滴加液體，否則會(huì)導(dǎo)致液體殘留在吸頭上，加樣不準(zhǔn)確。正確加樣方法應(yīng)為45度，吸頭貼著孔壁和液面的交界處加入。

　　● 加樣品時(shí)，單孔用量要求：≥50ul/指標(biāo)，如需要做復(fù)孔則所需樣本量≥100ul/指標(biāo)。如果樣本量不充足，具體用量可咨詢您的專屬銷售。

　　● 加樣時(shí)速度不可過(guò)快，否則無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。

　　● 加樣時(shí)避免液體濺出，如有樣本濺出，應(yīng)用吸水紙輕輕拭干，并做相應(yīng)記錄。

　　● 每次加樣順序一致，尤其底物、終止液順序一致，保證每個(gè)孔顯色時(shí)間相同。

　　● 加完顯色液后，放入一個(gè)可推拉的抽屜內(nèi)，就可以避光振蕩了。

　　| 加樣防錯(cuò)小竅門

　　● 用一張寫滿字的紙，字越多越好，比如報(bào)紙，墊在下面，這樣，加過(guò)標(biāo)本的小孔看過(guò)去下面的字會(huì)變小，沒(méi)加的字正常，非常容易區(qū)分。

　　● 可以利用液面反光與沒(méi)有加的孔加以區(qū)別。

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