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問(wèn)答社區(qū)

怎么檢驗(yàn)飲料中的大腸桿菌

夢(mèng)冰伊兒 2016-09-29 19:35:19 480  瀏覽
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參與評(píng)論

全部評(píng)論(1條)

  • 紅妝ym5 2016-09-30 00:00:00
    以無(wú)菌操作取25 g樣品,放入裝有225 mL稀釋劑的滅菌均質(zhì)杯內(nèi),于8000 r/min均質(zhì)1~2min,制成1:10樣品勻液(也可用滅菌乳缽研磨的方法代替). 稀釋樣品勻液根據(jù)對(duì)樣品污染情況的估計(jì),用稀釋劑將樣品勻液制成一系列十倍遞增的樣品稀釋液,如10**-2、10**-3、10**-4…….從制備樣品勻液至稀釋完畢,全過(guò)程不得超過(guò)15min. 附:這是一種9管MPN法測(cè)定方法. LST和EC初步篩選: 對(duì)每個(gè)樣品,選擇適宜的三個(gè)連續(xù)稀釋度的樣品稀釋液.每個(gè)稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白(月示)(LST)肉湯,每管接種1mL.將接種管置于36±1℃培養(yǎng)48±2h. 觀察試管的產(chǎn)氣情況:檢查倒管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生,用直徑為3mm的接種環(huán)將所有48±2h內(nèi)產(chǎn)氣的LST肉湯管培養(yǎng)物移種于EC肉湯管中.將所有接種的EC肉湯管在30min內(nèi)放入帶蓋44.5±0.5℃水浴箱內(nèi),培養(yǎng)48±2h. EMB平板: 取其產(chǎn)氣管的培養(yǎng)物劃線接種于伊紅美藍(lán)(EMB)平板,36±1℃培養(yǎng)24±2h. 檢查平板上有無(wú)具黑色ZX有光澤或無(wú)光澤的典型菌落. 如有典型菌落,則從每個(gè)平板上至少挑取2個(gè)典型菌落;如無(wú)典型菌落,則從每個(gè)平板上至少挑取2個(gè)可疑菌落.用接種針接觸菌落ZX部位,移種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上,36±1℃培養(yǎng)18~24h. 平板劃線示例 EMB平板原理及照片 生化試驗(yàn): 將斜面培養(yǎng)物移種到下列培養(yǎng)基中進(jìn)行生化試驗(yàn). 1 色氨酸肉湯:在36±1℃培養(yǎng)24±2h后,加Kovacs氏試劑0.0.3mL,上層出現(xiàn)紅色為靛基質(zhì)陽(yáng)性反應(yīng). 2 MR-VP培養(yǎng)基:在36±1℃培養(yǎng)48±2h.以無(wú)菌操作移取培養(yǎng)物1 mL至13mm×100mm試管中,加5%α-萘酚乙醇溶液0.6mL,40%氫氧化鉀溶液0.2mL和少許肌酸結(jié)晶,振搖試管后靜置2h,如出現(xiàn)伊紅色,為VP試驗(yàn)陽(yáng)性. 將MR-VP培養(yǎng)物的剩余部分再培養(yǎng)48h滴加5 滴甲基紅溶液.如培養(yǎng)物變紅色,為甲基紅試驗(yàn)陽(yáng)性,若變黃色則為陰性反應(yīng). 3 Koser氏枸椽酸鹽肉湯:于36±1℃培養(yǎng)96h記錄有無(wú)生長(zhǎng). 4 LST肉湯:于36±1℃培養(yǎng)48±2h,觀察試管中是否產(chǎn)氣. 5 革蘭氏染色:取18h營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物作革蘭氏染色.大腸桿菌為革蘭氏陰性. 大腸桿菌與非大腸桿菌生化鑒別如下: ━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━━━━ 靛 基 質(zhì)┃ MR ┃ VP ┃ 枸椽酸鹽 ┃ 鑒定(型別) ━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━ + ┃ + ┃ - ┃ - ┃典型大腸桿菌 - ┃ + ┃ - ┃ - ┃非典型大腸桿菌 ━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━ + ┃ + ┃ - ┃ + ┃典型中間型 - ┃ + ┃ - ┃ + ┃非典型中間型 ━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━ - ┃ - ┃ + ┃ + ┃典型產(chǎn)氣腸桿菌 + ┃ - ┃ + ┃ + ┃非典型產(chǎn)氣腸桿菌 ━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━━━━ 如出現(xiàn)上表以外的生化反應(yīng)類型,表明培養(yǎng)物可能不純,應(yīng)重新劃線分離,必要時(shí)做 重復(fù)試驗(yàn). 結(jié)果報(bào)告: 大腸桿菌為革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌,發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣,IMViC試驗(yàn)為++ --或-+--,再根據(jù)LST肉湯陽(yáng)性管數(shù)查MPN表,報(bào)告每克(毫升)樣品中大腸桿菌MPN 值.

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    評(píng)論

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儀器配置

儀器:CT-1Plus多功能全自動(dòng)滴定儀

電極:pH 非水復(fù)合電極

 

分析方法

滴定類型:非水滴定

非水滴定法是在非水溶劑中進(jìn)行滴定的方法,主要用于測(cè)定有機(jī)堿及其氫鹵酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽或有機(jī)鹽。糖精鈉屬于有機(jī)弱堿,利用冰醋酸做酸性溶劑,使其顯著增強(qiáng)相對(duì)堿性,利于使用高氯酸進(jìn)行滴定。電位滴定法無(wú)需使用指示劑,依據(jù)溶液電位值突越判定終點(diǎn)。

0.3g 干燥后的純品試樣,或者樣品經(jīng)過(guò)加熱除去二氧化碳和醇類,加入20ml 冰乙酸和5ml 乙酸酐,溶解后使用高氯酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液:c(HCLO4)=0.1mol/L 進(jìn)行滴定。


參考標(biāo)準(zhǔn)

GB 1883.18-2015 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑 糖精鈉》


計(jì)算公式

非水滴定法,是國(guó)內(nèi)外藥典含量測(cè)定采用較多的一種方法,特別是對(duì)于弱堿性藥物及其鹽類含量測(cè)定,準(zhǔn)確度高、方法簡(jiǎn)便、測(cè)定快速,而且測(cè)試成本低,重現(xiàn)性好。



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√  瑞士萬(wàn)通還有哪些儀器可以進(jìn)行食品和飲料分析?


瑞士萬(wàn)通網(wǎng)絡(luò)講座


直播預(yù)告

講座時(shí)間

北京時(shí)間10月22日 22:00


面向?qū)ο?/strong>

—食品、飲料企業(yè)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員

—第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員

—食品安全監(jiān)管部門實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員

—高校及科研院所從事食品安全、營(yíng)養(yǎng)相關(guān)內(nèi)容研究的師生

—對(duì)食品檢測(cè)感興趣的人員


講座內(nèi)容

—HPLC與IC的差異性

—瑞士萬(wàn)通英藍(lán)樣品前處理技術(shù)在食品和飲料分析中的應(yīng)用

—如何使用瑞士萬(wàn)通離子色譜以及瑞士萬(wàn)通其它設(shè)備進(jìn)行食品和飲料分析


主講人

Gabriele Zierfels 博士

Metrohm AG


Gabriele Zierfels博士,瑞士萬(wàn)通總部實(shí)驗(yàn)室高級(jí)應(yīng)用專家,博士期間主要從事食品化學(xué)方面的研究,開(kāi)發(fā)了檢測(cè)動(dòng)物食品中抗生素含量的HPLC方法。入職瑞士萬(wàn)通十幾年來(lái),一直從事食品行業(yè)離子色譜檢測(cè)方法的開(kāi)發(fā)以及對(duì)客戶的支持與培訓(xùn)工作,在食品檢測(cè)方面具有十分豐富的經(jīng)驗(yàn)。


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