食用色素，是色素的一種，即能被人適量食用的可使食物在一定程度上改變?cè)蓄伾氖称诽砑觿?，又稱(chēng)食用染料和著色劑，分為天然和人工合成兩種，合成著色劑因色澤鮮艷，著色力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、價(jià)格低廉等特點(diǎn)而被廣泛使用。

最常用的食品添加有新紅、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán) 、赤蘚紅等，《GB 5009.35-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定》中規(guī)定了這7種合成著色劑的液相分析方法，7種合成著色劑中其中一種著色劑是亮藍(lán)，關(guān)于亮藍(lán)的測(cè)定經(jīng)常聽(tīng)實(shí)驗(yàn)員反饋亮藍(lán)旁邊總是有雜質(zhì)峰，事實(shí)真是這樣嗎？

我們一起來(lái)揭秘真相！

上機(jī)標(biāo)品

準(zhǔn)備亮藍(lán)標(biāo)品， 用水配置成10ppm。

儀器條件

色譜柱： C18-Wp（4.6mm*250mm，5um）

流動(dòng)相：A:甲醇B：0.02M乙酸銨

梯度洗脫：0min 20%A，5min 35% A，12~18min 98%A，20~27min 20%A

柱溫：25℃

波長(zhǎng)：254nm

進(jìn)樣量：20ul

流速：1.0ml/min

實(shí)驗(yàn)譜圖

圖1亮藍(lán)色譜圖（色譜條件1）

圖4 亮藍(lán)色譜圖（色譜條件2）

圖5 亮藍(lán)色譜圖（色譜條件3）

結(jié)果分析

扣除溶劑空白后得到的亮藍(lán)譜圖見(jiàn)圖1，果然不是對(duì)稱(chēng)的色譜峰，而且非但不對(duì)稱(chēng)，看著還像3個(gè)峰。那么到底是什么原因呢，我們從以下方面進(jìn)行了分析。

（1）標(biāo)準(zhǔn)品問(wèn)題。若標(biāo)準(zhǔn)品純度不高，可能會(huì)帶來(lái)雜質(zhì)干擾，查看亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品的證書(shū)標(biāo)識(shí)的純度是87.6%，純度不是特別高，但是是某進(jìn)口知名品牌D公司生產(chǎn)的，無(wú)法確定3個(gè)峰里面是否含有雜質(zhì)峰。

（2）光譜特征。紫外-可見(jiàn)吸收光譜是化合物固有的性質(zhì)，一般不同的化合物其吸收特征是不一樣的，因此可以通過(guò)光譜特征對(duì)化合物進(jìn)行定性分析。那么這3個(gè)峰到低是什么物質(zhì)呢，使用DAD檢測(cè)器對(duì)其進(jìn)行200-800nm范圍內(nèi)的掃描，得到的光譜見(jiàn)圖2，由此可見(jiàn)3個(gè)化合物的紫外吸收特征非常相似，在HPLC-UV分析中這種情況一般都是同分異構(gòu)體。

圖2 亮藍(lán)光譜掃描圖

（3）結(jié)構(gòu)特征。那么亮藍(lán)真的有同分異構(gòu)體嗎，亮藍(lán)的結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖3，為非偶氮類(lèi)酸性染料，主要有3個(gè)同分異構(gòu)體，自然界中常以 3 種同分異構(gòu)體的混合物(間位磺化物:對(duì)位磺化物:鄰位磺化物＝75～85: 15～20:0～8)形式存在，因而液相分析的時(shí)候常常得不到單一對(duì)稱(chēng)的色譜峰。

圖3 亮藍(lán)結(jié)構(gòu)式

（4）定量分析。那么如何對(duì)亮藍(lán)的含量進(jìn)行定量分析是實(shí)驗(yàn)員比較關(guān)心的問(wèn)題，液相色譜定量分析的前提是先分離，嘗試對(duì)流動(dòng)相比例進(jìn)行調(diào)節(jié)，以減緩洗脫能力，我們發(fā)現(xiàn)這3個(gè)峰是可以實(shí)現(xiàn)基線分離的，比如圖4，圖5，不同色譜條件、不同濃度時(shí)各色譜峰面積結(jié)果以信息見(jiàn)表1。

表1 亮藍(lán)色譜峰面積

由此可以看出，不同的色譜條件，相同濃度的亮藍(lán)3個(gè)色譜峰基線分離和未分離時(shí)峰面積存在一定的差異，但是相同的色譜條件下，在2-100ppm的濃度范圍，各個(gè)亮藍(lán)的同分異構(gòu)體峰面積-濃度的線性關(guān)系較好，可能在不同的色譜條件下，亮藍(lán)的響應(yīng)情況會(huì)有稍微的差異，而在特定的色譜條件下，亮藍(lán)各個(gè)組分的同分異構(gòu)體并不會(huì)發(fā)生很大的轉(zhuǎn)變。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

（1）亮藍(lán)分析時(shí)出現(xiàn)的疑似雜質(zhì)峰其實(shí)是亮藍(lán)的同分異構(gòu)體，亮藍(lán)有3種同分異構(gòu)體。

（2）實(shí)際應(yīng)用中可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，決定是否要使3個(gè)同分異構(gòu)體完全分離，如果測(cè)試的是總的亮藍(lán)含量，把3個(gè)目標(biāo)峰合并在一起計(jì)算，如果是計(jì)算各個(gè)異構(gòu)體的含量就要通過(guò)調(diào)節(jié)色譜條件使其完全分離后再定量計(jì)算。

食用色素，是色素的一種，即能被人適量食用的可使食物在一定程度上改變?cè)蓄伾氖称诽砑觿?，又稱(chēng)食用染料和著色劑，分為天然和人工合成兩種，合成著色劑因色澤鮮艷，著色力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、價(jià)格低廉等特點(diǎn)而被廣泛使用。靛藍(lán)是食品生產(chǎn)中常用的合成著色劑之一，關(guān)于靛藍(lán)的分析測(cè)試，有實(shí)驗(yàn)員反饋回收率做不好，時(shí)高時(shí)低，事實(shí)真是這樣嗎，我們一起來(lái)揭秘真相！

本文所指的靛藍(lán)，CAS：860-22-0。因許多著色劑中文俗稱(chēng)一樣，在選擇標(biāo)準(zhǔn)品的時(shí)候容易弄錯(cuò)，比如CAS：860-22-0與CAS：482-89-3的著色劑，生活中習(xí)慣均稱(chēng)之為靛藍(lán)，但兩者結(jié)構(gòu)式是不一樣的，CAS：860-22-0的靛藍(lán)可以溶于水，而CAS：482-89-3的靛藍(lán)不溶于水。

CAS：860-22-0

CAS：482-89-3

實(shí)驗(yàn)部分

SPE

小柱：聚酰胺小柱500mg/6mL

活化：5mL甲醇

平衡：5mL 水

上樣：5mL 1ppm靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品，溶劑檸檬酸溶液（pH 3.0~4.0）

淋洗：5mL 甲醇：甲酸：去離子水（4：2：4）（V/V/V），淋洗后抽干小柱中的溶液。

洗脫：3mL*2 10%氨水甲醇

收集洗脫液，并于50℃氮吹至干，用甲醇：0.02M乙酸銨溶液（1:1）定容至1mL，充分溶解后，上機(jī)分析。

儀器條件

色譜柱： C18-Wp（4.6mm*250mm，5um）

流動(dòng)相：A:甲醇  B：乙酸銨(0.02mol/L)

梯度洗脫：0min 15%A，5min 35% A，12~22min 95%A，22.5~30min 15 %A

流速：1.0mL/min

柱溫：25℃

波長(zhǎng)：254nm

進(jìn)樣量：10uL

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

靛藍(lán)的加標(biāo)回收率在60~100%，不同實(shí)驗(yàn)時(shí)間、不同實(shí)驗(yàn)員測(cè)試的結(jié)果不盡相同。

原因分析

那么到底是什么原因?qū)е碌逅{(lán)回收率不穩(wěn)定呢，我們從以下方面進(jìn)行了分析。

1 SPE方法

分布收集SPE上樣、淋洗溶液均未檢測(cè)到靛藍(lán)，對(duì)洗脫后的聚酰胺小柱做第二次洗脫，也未檢測(cè)到目標(biāo)物；

降低SPE小柱上樣溶液的濃度至原來(lái)的1/5,并重復(fù)分布收集過(guò)程，洗脫液中靛藍(lán)的回收率依然不穩(wěn)定，忽高忽低；

換用不同材質(zhì)的容器，塑料容器和玻璃容器收集過(guò)柱溶液，排查盛放過(guò)柱溶液的容器是否吸附靛藍(lán)，結(jié)果并無(wú)差異。

經(jīng)過(guò)對(duì)SPE方法的分析，回收率有時(shí)候可以達(dá)到90%以上，可見(jiàn)SPE方法沒(méi)有問(wèn)題。

2 標(biāo)準(zhǔn)品存放條件

配置500ppm/水的靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，室溫存放一段時(shí)間，肉眼觀察其變化情況?？梢?jiàn)剛配置好溶液為藍(lán)色，然后顏色不斷變化，放置三周后溶液變成黃色并一直保持這個(gè)顏色，可見(jiàn)靛藍(lán)水溶液在室溫存放穩(wěn)定性不好，分析導(dǎo)致其變質(zhì)的原因可能有溫度、時(shí)間、光照、氧氣等因素。

圖1  500ppm靛藍(lán)水溶液

將500ppm/水的靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液配置后4℃保存，在不同的時(shí)間取樣，加水溶解稀釋成5ppm的溶液后，立即上機(jī)測(cè)試，并與新紅、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)、赤蘚紅B其他7種著色劑做對(duì)照，7種著色劑的處理方法與靛藍(lán)相同。8種著色劑峰面積測(cè)試結(jié)果見(jiàn)表1。由此可見(jiàn)，除了靛藍(lán)之外，其他7種著色劑在相同的保存條件下含量均無(wú)變化，而靛藍(lán)儲(chǔ)備溶液4℃保存時(shí)，隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，會(huì)不斷降解，一個(gè)月后有效成分只有最初的66%。即使是同時(shí)配置的靛藍(lán)溶液，光照4h后，有效成分也只有最初的83%，光照11h后，有效成分只有最初的63%。

實(shí)驗(yàn)方法改進(jìn)

每次實(shí)驗(yàn)均取固體靛藍(lán)標(biāo)品，現(xiàn)用現(xiàn)配，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中避光操作，實(shí)驗(yàn)前處理時(shí)間控制在1天之內(nèi)，樣品處理完后，立即上機(jī)測(cè)試，結(jié)果靛藍(lán)的回收率可以達(dá)到90~95%，RSD<5%。

小編建議

靛藍(lán)（CAS:860-22-0）性質(zhì)很不穩(wěn)定，不耐光和熱，實(shí)驗(yàn)中靛藍(lán)回收率忽高忽低不穩(wěn)定的原因主要是靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)生了降解或者樣品中的靛藍(lán)在前處理過(guò)程中降解，為了避免靛藍(lán)的損失，每次實(shí)驗(yàn)需要用固體的靛藍(lán)標(biāo)品，現(xiàn)用現(xiàn)配，實(shí)驗(yàn)用到的標(biāo)品包括上機(jī)的和加標(biāo)的，需要同時(shí)配置好并在相同的條件下保存，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中避光操作，合理安排前處理時(shí)間，盡可能快的完成前處理，樣品處理完后，立即上機(jī)測(cè)試。

之前我們?cè)接戇^(guò)亮藍(lán)分析有雜峰干擾的原因和靛藍(lán)分析回收率不穩(wěn)定的原因，亮藍(lán)分析有雜峰干擾是因?yàn)榱了{(lán)存在3個(gè)同分異構(gòu)體，靛藍(lán)回收率不穩(wěn)定是因?yàn)闇囟取⒐庹?、時(shí)間等因素會(huì)影響靛藍(lán)溶液的穩(wěn)定性。

關(guān)于合成著色劑的分析我們有一系列的小知識(shí)想和大家分享，今天為大家?guī)?lái)的是關(guān)于赤蘚紅分析時(shí)回收率不穩(wěn)定的原因。

本文所指的赤蘚紅，CAS是16423-68-0，我們稱(chēng)之為赤蘚紅是參考《GB 5009.35-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定》，在某些文獻(xiàn)資料中大家可能會(huì)看到將CAS是16423-68-0的物質(zhì)稱(chēng)之為赤蘚紅B，主要由于俗稱(chēng)的問(wèn)題。網(wǎng)上搜索赤蘚紅，你一定會(huì)搜索到兩個(gè)不同CAS的化合物，還有一個(gè)CAS號(hào)是568-63-8，通過(guò)比較化學(xué)式，可以看出這兩個(gè)化合物互為同分異構(gòu)體。CAS號(hào)是化合物的身份證，是化合物的WY標(biāo)示，在合成著色劑分析時(shí)受俗稱(chēng)的影響，很容易選錯(cuò)分析對(duì)象，建議大家在選購(gòu)合成著色劑的時(shí)候，一定要將CAS號(hào)作為WY標(biāo)識(shí)。

CAS：16423-68-0 

CAS：568-63-8

在GB 5009.35中有一種合成著色劑的提取方法：聚酰胺吸附法。在操作的時(shí)候很不方便，目前已經(jīng)有商品化的聚酰胺固相萃取小柱代替，比如安譜實(shí)驗(yàn)的CNW Poly-sery PA 聚酰胺小柱，因其操作方便、節(jié)省時(shí)間、節(jié)省試劑、對(duì)多種合成著色劑處理后結(jié)果準(zhǔn)確且回收率高，因而備受廣大消費(fèi)者的青睞，將其用于8種合成著色劑的前處理實(shí)驗(yàn)過(guò)程和結(jié)果如下文所示。

SPE

小柱：CNW Poly-sery PA 聚酰胺小柱  （500mg/6mL）

活化：5mL甲醇

平衡：5mL 水

上樣：5mL 1ppm 8種合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)品，溶劑檸檬酸溶液（pH 3.0~4.0）

淋洗：5mL 甲醇：甲酸：去離子水（4：2：4）（V/V/V），淋洗后抽干小柱中的溶液

洗脫：3mL*2 10%氨水甲醇

收集洗脫液，并于50℃氮吹至干，用甲醇：0.02M乙酸銨溶液（1:1）定容至1mL，充分溶解后，上機(jī)分析。

儀器條件

色譜柱： C18-Wp（4.6mm*250mm，5um）

流動(dòng)相：A:甲醇B：0.02M乙酸銨

梯度洗脫：0min 15%A，5min 35% A，12~22min 95%A，22.5~30min 15 %A

流速：1.0mL/min

柱溫：25℃

波長(zhǎng)：254nm

進(jìn)樣量：10ul

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表1 8種合成著色劑實(shí)驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明，除赤蘚紅之外，其他7種合成著色劑的回收率均大于90%，RSD小于5%，唯獨(dú)赤蘚紅回收率較低，且多次實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其回收率在70%~90%之間，回收率不穩(wěn)定。

原因分析

那么到底是什么原因?qū)е鲁嗵\紅回收率不穩(wěn)定呢。仔細(xì)閱讀國(guó)標(biāo)，可以發(fā)現(xiàn)對(duì)于含赤蘚紅的樣品，其提取方法采用的是液液——分配法，而非聚酰胺吸附法，但是國(guó)標(biāo)并沒(méi)有對(duì)赤蘚紅為何不能采用聚酰胺吸附法做解釋說(shuō)明。結(jié)合赤蘚紅的化學(xué)結(jié)構(gòu)和GB 5009.35我們來(lái)分析一下原因。

液-液分配法原理，加鹽酸使赤蘚紅結(jié)構(gòu)上的Na反應(yīng)后變?yōu)镠，赤蘚紅分子上的酚羥基與三正辛胺分子中的氮原子形成氫鍵，生成不溶于水的化合物，被萃取到正丁醇中，加飽和硫酸鈉去除有機(jī)相中殘留的水分，正己烷去除油脂類(lèi)雜質(zhì)，用氨水做反萃溶劑，加入氨水，使化合物的氫鍵斷裂，赤蘚紅進(jìn)入水相，乙酸調(diào)pH至中性，濃縮后待測(cè)。

聚酰胺吸附法的原理，聚酰胺是由酰胺鍵聚合形成的高分子化合物，其酰胺基可與羥基酚類(lèi)、酸類(lèi)、醌類(lèi)、硝基等化合物以氫鍵形式結(jié)合而被吸附。其他7種合成著色劑均含有較多的磺酸鈉基團(tuán)，在酸性條件下轉(zhuǎn)變成磺酸根，與聚酰胺的結(jié)合很緊密，甲醇-甲酸溶液并不能使其分離，可以作為淋洗溶劑，淋洗掉一些雜質(zhì)，加水也不能將其分離，同時(shí)可以洗去一些水溶性雜質(zhì)，加入乙醇-氨水-水，將合成著色劑解析出來(lái)，乙酸調(diào)pH至中性，濃縮后待測(cè)。SPE的方法也是利用了此原理，酸性條件上樣，使目標(biāo)物與聚酰胺結(jié)合，再用一定比例的甲醇：甲酸：去離子水淋洗去除雜質(zhì)，然后用氨水甲醇洗脫掉目標(biāo)物，濃縮復(fù)溶待測(cè)。所以這7種合成著色劑用聚酰胺粉和聚酰胺小柱均能得到較好的結(jié)果。而赤蘚紅在酸性條件下Na反應(yīng)后變?yōu)镠，酚羥基也能與聚酰胺結(jié)合而被吸附，但是在甲醇有機(jī)相存在的條件下，和聚酰胺的結(jié)合并不緊密，容易溶解在甲醇中隨著淋洗液流出，導(dǎo)致洗脫回收率低且不穩(wěn)定。通過(guò)設(shè)計(jì)淋洗和不淋洗步驟進(jìn)行結(jié)果比較，發(fā)現(xiàn)不淋洗時(shí)赤蘚紅的回收率大約93%，明顯高于淋洗時(shí)赤蘚紅的回收率80%左右。因聚酰胺在用于合成著色劑測(cè)定時(shí)淋洗可以除掉一些干擾分析的雜質(zhì)成分，故淋洗步驟很有必要，如果赤蘚紅和其它合成著色劑同時(shí)用聚酰胺小柱分析時(shí)，需要關(guān)注淋洗溶液和基質(zhì)的復(fù)雜程度，決定是否需要在淋洗液中加入甲醇有機(jī)試劑。

除了用聚酰胺小柱測(cè)定赤蘚紅時(shí)淋洗溶液不能用甲酸-甲醇溶液外，要使赤蘚紅的實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、回收率高還需要注意另外兩個(gè)方面的問(wèn)題：

（1）上機(jī)之前過(guò)濾所用的濾膜不得使用尼龍濾膜，因?yàn)槟猃埖幕瘜W(xué)成分就是聚酰胺，會(huì)吸附合成著色劑；

（2）建議赤蘚紅上機(jī)溶液的溶劑中加入一定比例的甲醇，如甲醇：水（1：1）或甲醇：0.02M乙酸銨（1：1），而非用純水做溶劑。因?yàn)槲覀兌啻螌?shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)經(jīng)過(guò)氮吹濃縮后，純水復(fù)溶，管壁上會(huì)殘留很多肉眼可見(jiàn)的赤蘚紅（紅色），經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的超聲、渦旋都很難溶解掉，上機(jī)分析回收率大約才20%左右，但加入一定比例的甲醇后很容易將赤蘚紅溶解下來(lái)，且甲醇本來(lái)也是流動(dòng)相的一部分，用流動(dòng)相做溶劑合情合理。

       氣相色譜主要是利用物質(zhì)的沸點(diǎn)、極性以及吸附性質(zhì)差異來(lái)實(shí)現(xiàn)混合物的分離，氣相色譜儀由六大系統(tǒng)組成，分別是：載氣系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。氣相分析過(guò)程如圖所示：

       GC基本工作原理是利用試樣中各組份在氣相和固定相間的分配系數(shù)不同，當(dāng)樣品在氣化室氣化后被載氣帶入色譜柱，由于固定相對(duì)各組份的吸附或溶解能力不同進(jìn)行分離，分離后的物質(zhì)進(jìn)入檢測(cè)器后轉(zhuǎn)化為信號(hào)，在數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)中以色譜峰的顯示體現(xiàn)，根據(jù)色譜圖對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。

       在氣相色譜分析時(shí)，經(jīng)常會(huì)因?yàn)楹芏鄦?wèn)題導(dǎo)致譜圖出現(xiàn)異常，到底是什么原因呢？

       在此，我們將走過(guò)的彎路，積累的經(jīng)驗(yàn)分享給您，希望對(duì)您有所幫助。

1

在溶劑驗(yàn)收時(shí)，純?nèi)軇┻M(jìn)樣后出現(xiàn)雜峰，就一定是溶劑有雜質(zhì)？

       如果進(jìn)空白針后 也存在雜峰，連續(xù)進(jìn)針后，峰面積逐漸減少，優(yōu)先考慮儀器系統(tǒng)流路問(wèn)題出現(xiàn)的雜峰?？梢詮囊韵聨讉€(gè)方面逐一排查：

       1）氣源是否有問(wèn)題；

       2）進(jìn)樣針，洗針瓶，隔墊，襯管，分流平板是否有污染；

       3）色譜柱是否有污染；

       4）檢測(cè)器是否有污染等。

2

出現(xiàn)前沿峰

       1）樣品過(guò)載，需稀釋樣品，減少進(jìn)樣量；

       2）載氣流速過(guò)高；

       3）柱溫太低，升高柱溫；

       4）氣化室溫度太低；

       5）可能存在干擾峰，需要優(yōu)化色譜條件；

       6）色譜柱選型錯(cuò)誤，老化程度不夠等。

3

出現(xiàn)拖尾峰

       1）襯管、分流平板或色譜柱被污染，或色譜柱安裝不當(dāng)，存在死體積；

       2）柱溫或進(jìn)樣器溫度低，升高溫度；

       3）載氣流量偏低；

       4）進(jìn)樣量大，減少進(jìn)樣量貨增大分流比；

       5）進(jìn)樣器或氣化室被高沸點(diǎn)雜質(zhì)或殘留污染等。

4

出現(xiàn)鬼峰

       1）色譜柱有殘留，未完全老化；

       2）氣化室、注射針等被污染或載氣純度不夠；

       3）氣化溫度過(guò)高使樣品某些組分分解；

       4）樣品中有空氣或TCD、ECD等密封性差（有漏氣）等。

5

操作條件不變，原來(lái)可以分離的峰不見(jiàn)了？

       1）色譜柱被污染或者失效；

       2）載氣系統(tǒng)被污染（載氣純度低或過(guò)濾器失效）；

       3）注射墊或注射針漏氣等。

6

進(jìn)樣后不出峰或者峰很??？

      1）檢查檢測(cè)器的信號(hào)值，信號(hào)值正常時(shí)，優(yōu)先考慮進(jìn)樣口問(wèn)題；

      2）進(jìn)樣針漏氣或者堵塞；

      3）進(jìn)樣溫度太低導(dǎo)致樣品不能氣化或柱溫太低，導(dǎo)致樣品在柱中冷凝；

      4）如果是FID，需要檢查FID火焰是否點(diǎn)燃等。

7

連續(xù)進(jìn)樣時(shí)，重復(fù)性差

       1）進(jìn)樣技術(shù)差；

       2）載氣泄露或者流速不穩(wěn)定；

       3）檢測(cè)器、色譜柱或襯管等被污染；

       4）注射針有泄漏等。

8

基線向上漂移

       1）檢測(cè)器溫度達(dá)到設(shè)定溫度并穩(wěn)定2h以上，基線不穩(wěn)定，檢測(cè)器受污染，需要進(jìn)行清洗；

       2）色譜柱未完全老化，有殘留；

       3）載氣流速下降，重新調(diào)整載氣壓力；

       4）色譜柱固定相可能被破壞等。

9

基線向下漂移

       1）進(jìn)樣口隔墊漏氣；

       2）氣路系統(tǒng)漏氣或載氣流量波動(dòng)；

       3）色譜柱未老化完全等。

10

樣品分離度下降

       1）色譜柱被樣品或其他雜質(zhì)污染；

       2）色譜柱固定相流失嚴(yán)重導(dǎo)致無(wú)法達(dá)到所需要的柱效或分離度等。

“淘寶直播天天見(jiàn)活動(dòng)”已經(jīng)“滿月”啦

感謝期間一直支持我們的你們！

希望我們的直播可以成為您的”飯后甜點(diǎn)”

給您的工作帶來(lái)些許助力！

（每個(gè)工作日中午12：45開(kāi)播哦）

6月15日-24日精彩課程預(yù)告

還在因?yàn)闆](méi)搶到過(guò)禮品而懊惱嗎？

時(shí)值618，神秘大禮已備好！

就等你來(lái)！

趕緊加入安譜實(shí)驗(yàn)粉絲群

提前了解禮品信息吧~

直播鏈接

      每天直播前，打開(kāi)淘寶app，店鋪搜索“安譜實(shí)驗(yàn)直播平臺(tái)”，進(jìn)入店鋪，即可看到直播預(yù)告。

      或者，復(fù)制下面這段話，打開(kāi)淘寶即可進(jìn)入店鋪：

      緮置這段話￥gW841o3pUsq￥打開(kāi)氵匋寶【上海安譜實(shí)驗(yàn)直播平臺(tái)】

絡(luò)合滴定

絡(luò)合滴定是以絡(luò)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的滴定分析方法，又稱(chēng)為配位滴定。絡(luò)合反應(yīng)亦是路易斯酸和路易斯堿結(jié)合生成簡(jiǎn)單絡(luò)合物或螯合物的反應(yīng)（金屬離子作為路易斯酸提供空軌道，接受路易斯堿所提供的未成鍵電子對(duì)形成化學(xué)鍵）。

簡(jiǎn)單絡(luò)合物由ZX離子和單齒配體組成，如同多元弱酸一般，常形成逐級(jí)絡(luò)合物，存在逐級(jí)解離平衡關(guān)系，限制了其在滴定分析中的應(yīng)用，一般常用作掩蔽劑、顯色劑和指示劑。

螯合物由同一金屬離子與兩個(gè)或多個(gè)配位體形成螯合環(huán)的環(huán)狀結(jié)構(gòu)配合物。螯合物也存在逐級(jí)絡(luò)合現(xiàn)象，但可以通過(guò)控制適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)條件，得到實(shí)驗(yàn)所需的絡(luò)合物，常被用做滴定劑和掩蔽劑。例如乙二胺四乙酸（EDTA）是含有羧基和氨基的螯合劑，能與多種硬酸、軟酸型陽(yáng)離子結(jié)合形成具有多個(gè)五原子環(huán)的穩(wěn)定螯合物。其結(jié)構(gòu)式如圖1所示，由于其良好的穩(wěn)定性及成本低廉等原因成為分析化學(xué)中應(yīng)用最廣泛的螯合劑。

EDTA結(jié)構(gòu)式

在絡(luò)合滴定中，通常利用一種能與金屬離子生成有色絡(luò)合物的顯色劑來(lái)判斷滴定反應(yīng)是否達(dá)到反應(yīng)終點(diǎn)，這種顯色劑稱(chēng)為金屬離子指示劑。下表為絡(luò)合滴定中常用金屬指示劑。

在絡(luò)合滴定中，根據(jù)金屬離子絡(luò)合物穩(wěn)定常數(shù)、絡(luò)合速率、指示劑封閉效應(yīng)、溶液酸堿度等要求，我們可以采用不同的滴定方法來(lái)滿足實(shí)驗(yàn)需求并將其運(yùn)用到實(shí)際生產(chǎn)中去。

       過(guò)濾產(chǎn)品如針式濾器、玻璃纖維濾紙等都是前處理實(shí)驗(yàn)中常用的過(guò)濾耗材，正確的使用不僅能確保樣品前處理工藝的完善，更有利于獲得jing準(zhǔn)可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，那么在使用過(guò)程中：

       您是否對(duì)于如何選擇一款合適的玻璃纖維而煩惱？

       您是否對(duì)于濾器的孔徑產(chǎn)生懷疑？

       安譜實(shí)驗(yàn)小編帶你一起來(lái)探究其中的奧秘吧

問(wèn)：我購(gòu)買(mǎi)的濾器孔徑準(zhǔn)嗎？

答：必須準(zhǔn)，安譜實(shí)驗(yàn)濾器均經(jīng)過(guò)泡點(diǎn)測(cè)試證明濾膜的孔徑大小和完整度。泡點(diǎn)壓力就是迫使氣泡通過(guò)一個(gè)濕孔所需的Z小壓力，它和孔的大小成反比，和潤(rùn)濕膜片的液體的表面張力相關(guān)，通過(guò)計(jì)算測(cè)試的泡點(diǎn)值得出孔徑大小。

下圖為安譜實(shí)驗(yàn)出具的濾器COA報(bào)告樣張，顯示孔徑的測(cè)試結(jié)果。

問(wèn)：怎么選擇一款對(duì)檢測(cè)項(xiàng)目沒(méi)干擾的濾器呢？

答：對(duì)檢測(cè)項(xiàng)目無(wú)干擾即要求濾膜材質(zhì)無(wú)溶出、對(duì)目標(biāo)物也無(wú)吸附，例如分析蛋白質(zhì)和DNA建議選擇PES或者PVDF而不是尼龍，小編在這里也給大家一些經(jīng)驗(yàn)參考，如尼龍材質(zhì)對(duì)于色素、磺胺類(lèi)獸殘等會(huì)有吸附。并且由于每個(gè)項(xiàng)目條件不一樣，建議在化學(xué)可耐受的情況下選擇不同材質(zhì)濾器進(jìn)行嘗試確定。

問(wèn)：過(guò)濾時(shí)濾膜破裂了怎么辦？

答：濾膜破裂原因：一是材質(zhì)無(wú)法耐受樣品溶劑被溶解，二是過(guò)濾時(shí)超過(guò)濾器所能承受的壓力。那么對(duì)應(yīng)的解決方案就是選擇耐受樣品溶劑的濾膜和給與適當(dāng)?shù)膲毫?，尤其是在使用較小直徑的濾器時(shí)（濾器的耐受壓請(qǐng)參考對(duì)應(yīng)COA）。

送福利啦

小編也為大家整理了一份化學(xué)耐受性表以供參考

詳見(jiàn)下圖二維碼

問(wèn)：過(guò)濾樣品時(shí)流速太慢影響效率怎么做？

答：當(dāng)出現(xiàn)流速太慢時(shí)，我們需要確定樣品中是否顆粒物含量高、樣品粘度太大，這種情況下可進(jìn)行高速離心去除顆粒物、選擇合適的溶劑稀釋或者使用更大直徑的濾器。

問(wèn)：玻璃纖維濾紙與常規(guī)尼龍等微孔濾膜有什么區(qū)別？

答：從過(guò)濾機(jī)理角度，玻璃纖維濾紙屬于深層型過(guò)濾，顯著特點(diǎn)是將顆粒物同時(shí)截留在表面和介質(zhì)基體當(dāng)中，具體深度過(guò)濾、流速快、負(fù)載量大特點(diǎn)；而尼龍等微孔濾膜厚度較薄，傾向于表面過(guò)濾。從材質(zhì)角度，玻璃纖維是采用純硼硅酸玻璃纖維， CNW玻璃纖維濾紙均是無(wú)粘結(jié)劑的可耐500℃ 高溫，而尼龍等微孔濾膜是高分子聚合物膜。

       CNW無(wú)粘結(jié)劑玻璃纖維濾紙由于其具有流速快、負(fù)載量高、微小的截留顆粒、耐高溫、本底低等優(yōu)勢(shì)應(yīng)用領(lǐng)域廣泛，小編整理了一份不同等級(jí)玻璃纖維濾紙應(yīng)用領(lǐng)域及對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)可供于參考使用。

圈ZD，實(shí)用干貨來(lái)啦

不同等級(jí)玻璃纖維濾紙應(yīng)用領(lǐng)域及對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)下表

問(wèn)：石英纖維和玻璃纖維濾紙兩者在應(yīng)用上有什么區(qū)別？

答：玻璃纖維是采用純硼硅酸玻璃制成，而石英纖維是由純二氧化硅制成，性質(zhì)非常穩(wěn)定，相比于玻璃纖維濾紙具有高耐溫性（可達(dá)900°C及以上）、高純度本底低的優(yōu)點(diǎn)，適用于重金屬、化學(xué)物質(zhì)檢測(cè)和腐蝕性環(huán)境中空氣的采樣（除HF））等。如在做空氣監(jiān)測(cè)如環(huán)烴類(lèi)分析、重金屬分析要求耐溫性和材質(zhì)本底純度更佳時(shí)選擇石英玻璃纖維。

       CNW 石英玻璃纖維均是經(jīng)過(guò)高溫預(yù)處理，每批提供痕量金屬元素測(cè)試，適用于本底要求高，用于PM10監(jiān)測(cè)、EPA、ISO等標(biāo)準(zhǔn)。

在色譜分析檢測(cè)中（GC&HPLC），我們經(jīng)常要使用到衍生化技術(shù)手段來(lái)達(dá)到對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的定性定量分析，按照衍生化發(fā)生在色譜分析前后，分為柱前衍生和柱后衍生，今天我們就和小編一起學(xué)習(xí)衍生化目的、原理、分類(lèi)和應(yīng)用等。

一、衍生化的目的

衍生化包括分析物與衍生化試劑之間發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)，其目的是改變?cè)摲治鑫锏睦砘再|(zhì)，主要有以下幾個(gè)目的：

?提高檢測(cè)性能

?改變分析物的分子結(jié)構(gòu)或極性以獲得更出色的色譜分離

?增加揮發(fā)性

?改變基質(zhì)性質(zhì)以實(shí)現(xiàn)更好的分離

?穩(wěn)定分析物

二、常用的衍生化試劑

1.硅烷化試劑

?硅烷基指三甲基硅烷Si(CH₃)₃或稱(chēng)TMS；

?硅烷化作用是指將硅烷基引入到分子中，一般是取代活性氫；

?活性氫被硅烷基取代后降低了化合物的極性，增強(qiáng)了揮發(fā)性和穩(wěn)定性；

?對(duì)于不揮發(fā)或者200-300℃的穩(wěn)定性，可以使用硅烷化試劑衍生；

?硅烷化試劑容易吸潮失效，因此在使用過(guò)程中需要對(duì)樣品和試劑脫水。

2.?；苌噭?/strong>

?酰基化能降低羥基、氨基、巰基的極性，減小色譜峰拖尾，增強(qiáng)揮發(fā)性；

?能增強(qiáng)某些容易氧化的化合物（如：兒茶酚胺）的穩(wěn)定性；

?引入含有鹵離子的酰基，可以提高電子捕獲檢測(cè)器（ECD）的靈敏度。

3.紫外衍生試劑

紫外衍生化試劑主要是給一些沒(méi)有紫外吸收或者紫外吸收很弱的化合物分子引入強(qiáng)紫外吸收的基團(tuán)，使得目標(biāo)物能被紫外檢測(cè)器檢測(cè)。

4.熒光衍生化試劑

液相色譜檢測(cè)中熒光檢測(cè)器的靈敏度要比紫外檢測(cè)的靈敏度高出幾個(gè)數(shù)量級(jí)，但是大多數(shù)化合物沒(méi)有熒光，通過(guò)熒光衍生化試劑將目標(biāo)物上接上能發(fā)出熒光的生色基團(tuán)，以達(dá)到熒光檢測(cè)的目的，由于熒光衍生物的激發(fā)波長(zhǎng)與發(fā)射波長(zhǎng)與衍生化試劑不同，即使衍生化試劑過(guò)量或者有副反應(yīng)，也不干擾熒光衍生物的檢測(cè)。

5.電化學(xué)衍生化試劑

電化學(xué)檢測(cè)器（ECD）是根據(jù)電化學(xué)原理和物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)的，在液相色譜中常用來(lái)檢測(cè)無(wú)紫外和無(wú)熒光的，但是有電活性的化合物，其檢測(cè)靈敏度高，選擇性強(qiáng)，對(duì)于沒(méi)有電活性的化合物，與電化學(xué)衍生試劑反應(yīng)，生成具有電化學(xué)活性的衍生物就可以使用ECD檢測(cè)，由于硝基具有電化學(xué)活性，因此常用來(lái)作為電化學(xué)衍生試劑，常見(jiàn)電化學(xué)衍生試劑化如下：

三、衍生化在HPLC及GC中的應(yīng)用案例分享

HPLC中的應(yīng)用案例-氨基甲酸酯農(nóng)藥檢測(cè)（GB23200.112-2018）

甲奈威和克百威屬于氨基甲酸酯一類(lèi)的廣譜殺蟲(chóng)劑，常用于水稻和玉米作物，其本身無(wú)熒光，通過(guò)高溫堿性條件下，將其水解為甲基胺，再與鄰苯二甲醛(OPA) 和2-巰基乙醇(RSH) 反應(yīng)，生成具有強(qiáng)熒光性的異吲哚衍生物，可用于熒光檢測(cè)，檢測(cè)級(jí)別可到達(dá)ppt級(jí)別。

GB23200.112-2018中9種氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥及其代謝物的柱后衍生譜圖

GC中的應(yīng)用案例-氯丙醇及其脂肪酸脂的檢測(cè)（GB5009.191-2016）：

?；芙档土u基、氨基、巰基的極性，改善這些化合物的色譜性能（減少峰拖尾），并能提高這些化合物的揮發(fā)性，也能增強(qiáng)某些容易氧化的化合物的穩(wěn)定性，當(dāng)?；瘯r(shí)引入了含有鹵素離子的?；鶗r(shí)，還能提高使用ECD檢測(cè)的靈敏度。

GBGB5009.191-2016中，采用七氟丁酰咪唑作為衍生化試劑，在溫和的條件下將羥基鈍化反應(yīng)生成具較好穩(wěn)定性、良好揮發(fā)性和強(qiáng)電負(fù)性的衍生物，并使用GCMS檢測(cè)。