氣相色譜主要是利用物質(zhì)的沸點(diǎn)、極性以及吸附性質(zhì)差異來實現(xiàn)混合物的分離，氣相色譜儀由六大系統(tǒng)組成，分別是：載氣系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。氣相分析過程如圖所示：

       GC基本工作原理是利用試樣中各組份在氣相和固定相間的分配系數(shù)不同，當(dāng)樣品在氣化室氣化后被載氣帶入色譜柱，由于固定相對各組份的吸附或溶解能力不同進(jìn)行分離，分離后的物質(zhì)進(jìn)入檢測器后轉(zhuǎn)化為信號，在數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)中以色譜峰的顯示體現(xiàn)，根據(jù)色譜圖對物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。

       在氣相色譜分析時，經(jīng)常會因為很多問題導(dǎo)致譜圖出現(xiàn)異常，到底是什么原因呢？

       在此，我們將走過的彎路，積累的經(jīng)驗分享給您，希望對您有所幫助。

1

在溶劑驗收時，純?nèi)軇┻M(jìn)樣后出現(xiàn)雜峰，就一定是溶劑有雜質(zhì)？

       如果進(jìn)空白針后 也存在雜峰，連續(xù)進(jìn)針后，峰面積逐漸減少，優(yōu)先考慮儀器系統(tǒng)流路問題出現(xiàn)的雜峰。可以從以下幾個方面逐一排查：

       1）氣源是否有問題；

       2）進(jìn)樣針，洗針瓶，隔墊，襯管，分流平板是否有污染；

       3）色譜柱是否有污染；

       4）檢測器是否有污染等。

2

出現(xiàn)前沿峰

       1）樣品過載，需稀釋樣品，減少進(jìn)樣量；

       2）載氣流速過高；

       3）柱溫太低，升高柱溫；

       4）氣化室溫度太低；

       5）可能存在干擾峰，需要優(yōu)化色譜條件；

       6）色譜柱選型錯誤，老化程度不夠等。

3

出現(xiàn)拖尾峰

       1）襯管、分流平板或色譜柱被污染，或色譜柱安裝不當(dāng)，存在死體積；

       2）柱溫或進(jìn)樣器溫度低，升高溫度；

       3）載氣流量偏低；

       4）進(jìn)樣量大，減少進(jìn)樣量貨增大分流比；

       5）進(jìn)樣器或氣化室被高沸點(diǎn)雜質(zhì)或殘留污染等。

4

出現(xiàn)鬼峰

       1）色譜柱有殘留，未完全老化；

       2）氣化室、注射針等被污染或載氣純度不夠；

       3）氣化溫度過高使樣品某些組分分解；

       4）樣品中有空氣或TCD、ECD等密封性差（有漏氣）等。

5

操作條件不變，原來可以分離的峰不見了？

       1）色譜柱被污染或者失效；

       2）載氣系統(tǒng)被污染（載氣純度低或過濾器失效）；

       3）注射墊或注射針漏氣等。

6

進(jìn)樣后不出峰或者峰很小？

      1）檢查檢測器的信號值，信號值正常時，優(yōu)先考慮進(jìn)樣口問題；

      2）進(jìn)樣針漏氣或者堵塞；

      3）進(jìn)樣溫度太低導(dǎo)致樣品不能氣化或柱溫太低，導(dǎo)致樣品在柱中冷凝；

      4）如果是FID，需要檢查FID火焰是否點(diǎn)燃等。

7

連續(xù)進(jìn)樣時，重復(fù)性差

       1）進(jìn)樣技術(shù)差；

       2）載氣泄露或者流速不穩(wěn)定；

       3）檢測器、色譜柱或襯管等被污染；

       4）注射針有泄漏等。

8

基線向上漂移

       1）檢測器溫度達(dá)到設(shè)定溫度并穩(wěn)定2h以上，基線不穩(wěn)定，檢測器受污染，需要進(jìn)行清洗；

       2）色譜柱未完全老化，有殘留；

       3）載氣流速下降，重新調(diào)整載氣壓力；

       4）色譜柱固定相可能被破壞等。

9

基線向下漂移

       1）進(jìn)樣口隔墊漏氣；

       2）氣路系統(tǒng)漏氣或載氣流量波動；

       3）色譜柱未老化完全等。

10

樣品分離度下降

       1）色譜柱被樣品或其他雜質(zhì)污染；

       2）色譜柱固定相流失嚴(yán)重導(dǎo)致無法達(dá)到所需要的柱效或分離度等。

食用色素，是色素的一種，即能被人適量食用的可使食物在一定程度上改變原有顏色的食品添加劑，又稱食用染料和著色劑，分為天然和人工合成兩種，合成著色劑因色澤鮮艷，著色力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、價格低廉等特點(diǎn)而被廣泛使用。靛藍(lán)是食品生產(chǎn)中常用的合成著色劑之一，關(guān)于靛藍(lán)的分析測試，有實驗員反饋回收率做不好，時高時低，事實真是這樣嗎，我們一起來揭秘真相！

本文所指的靛藍(lán)，CAS：860-22-0。因許多著色劑中文俗稱一樣，在選擇標(biāo)準(zhǔn)品的時候容易弄錯，比如CAS：860-22-0與CAS：482-89-3的著色劑，生活中習(xí)慣均稱之為靛藍(lán)，但兩者結(jié)構(gòu)式是不一樣的，CAS：860-22-0的靛藍(lán)可以溶于水，而CAS：482-89-3的靛藍(lán)不溶于水。

CAS：860-22-0

CAS：482-89-3

實驗部分

SPE

小柱：聚酰胺小柱500mg/6mL

活化：5mL甲醇

平衡：5mL 水

上樣：5mL 1ppm靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品，溶劑檸檬酸溶液（pH 3.0~4.0）

淋洗：5mL 甲醇：甲酸：去離子水（4：2：4）（V/V/V），淋洗后抽干小柱中的溶液。

洗脫：3mL*2 10%氨水甲醇

收集洗脫液，并于50℃氮吹至干，用甲醇：0.02M乙酸銨溶液（1:1）定容至1mL，充分溶解后，上機(jī)分析。

儀器條件

色譜柱： C18-Wp（4.6mm*250mm，5um）

流動相：A:甲醇  B：乙酸銨(0.02mol/L)

梯度洗脫：0min 15%A，5min 35% A，12~22min 95%A，22.5~30min 15 %A

流速：1.0mL/min

柱溫：25℃

波長：254nm

進(jìn)樣量：10uL

實驗結(jié)果

靛藍(lán)的加標(biāo)回收率在60~100%，不同實驗時間、不同實驗員測試的結(jié)果不盡相同。

原因分析

那么到底是什么原因?qū)е碌逅{(lán)回收率不穩(wěn)定呢，我們從以下方面進(jìn)行了分析。

1 SPE方法

分布收集SPE上樣、淋洗溶液均未檢測到靛藍(lán)，對洗脫后的聚酰胺小柱做第二次洗脫，也未檢測到目標(biāo)物；

降低SPE小柱上樣溶液的濃度至原來的1/5,并重復(fù)分布收集過程，洗脫液中靛藍(lán)的回收率依然不穩(wěn)定，忽高忽低；

換用不同材質(zhì)的容器，塑料容器和玻璃容器收集過柱溶液，排查盛放過柱溶液的容器是否吸附靛藍(lán)，結(jié)果并無差異。

經(jīng)過對SPE方法的分析，回收率有時候可以達(dá)到90%以上，可見SPE方法沒有問題。

2 標(biāo)準(zhǔn)品存放條件

配置500ppm/水的靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，室溫存放一段時間，肉眼觀察其變化情況?？梢妱偱渲煤萌芤簽樗{(lán)色，然后顏色不斷變化，放置三周后溶液變成黃色并一直保持這個顏色，可見靛藍(lán)水溶液在室溫存放穩(wěn)定性不好，分析導(dǎo)致其變質(zhì)的原因可能有溫度、時間、光照、氧氣等因素。

圖1  500ppm靛藍(lán)水溶液

將500ppm/水的靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液配置后4℃保存，在不同的時間取樣，加水溶解稀釋成5ppm的溶液后，立即上機(jī)測試，并與新紅、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)、赤蘚紅B其他7種著色劑做對照，7種著色劑的處理方法與靛藍(lán)相同。8種著色劑峰面積測試結(jié)果見表1。由此可見，除了靛藍(lán)之外，其他7種著色劑在相同的保存條件下含量均無變化，而靛藍(lán)儲備溶液4℃保存時，隨著保存時間的延長，會不斷降解，一個月后有效成分只有最初的66%。即使是同時配置的靛藍(lán)溶液，光照4h后，有效成分也只有最初的83%，光照11h后，有效成分只有最初的63%。

實驗方法改進(jìn)

每次實驗均取固體靛藍(lán)標(biāo)品，現(xiàn)用現(xiàn)配，在整個實驗過程中避光操作，實驗前處理時間控制在1天之內(nèi)，樣品處理完后，立即上機(jī)測試，結(jié)果靛藍(lán)的回收率可以達(dá)到90~95%，RSD<5%。

小編建議

靛藍(lán)（CAS:860-22-0）性質(zhì)很不穩(wěn)定，不耐光和熱，實驗中靛藍(lán)回收率忽高忽低不穩(wěn)定的原因主要是靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)生了降解或者樣品中的靛藍(lán)在前處理過程中降解，為了避免靛藍(lán)的損失，每次實驗需要用固體的靛藍(lán)標(biāo)品，現(xiàn)用現(xiàn)配，實驗用到的標(biāo)品包括上機(jī)的和加標(biāo)的，需要同時配置好并在相同的條件下保存，在整個實驗過程中避光操作，合理安排前處理時間，盡可能快的完成前處理，樣品處理完后，立即上機(jī)測試。

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀跑出的質(zhì)譜圖該怎樣分析呢？

之前我們曾探討過亮藍(lán)分析有雜峰干擾的原因和靛藍(lán)分析回收率不穩(wěn)定的原因，亮藍(lán)分析有雜峰干擾是因為亮藍(lán)存在3個同分異構(gòu)體，靛藍(lán)回收率不穩(wěn)定是因為溫度、光照、時間等因素會影響靛藍(lán)溶液的穩(wěn)定性。

關(guān)于合成著色劑的分析我們有一系列的小知識想和大家分享，今天為大家?guī)淼氖顷P(guān)于赤蘚紅分析時回收率不穩(wěn)定的原因。

本文所指的赤蘚紅，CAS是16423-68-0，我們稱之為赤蘚紅是參考《GB 5009.35-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測定》，在某些文獻(xiàn)資料中大家可能會看到將CAS是16423-68-0的物質(zhì)稱之為赤蘚紅B，主要由于俗稱的問題。網(wǎng)上搜索赤蘚紅，你一定會搜索到兩個不同CAS的化合物，還有一個CAS號是568-63-8，通過比較化學(xué)式，可以看出這兩個化合物互為同分異構(gòu)體。CAS號是化合物的身份證，是化合物的WY標(biāo)示，在合成著色劑分析時受俗稱的影響，很容易選錯分析對象，建議大家在選購合成著色劑的時候，一定要將CAS號作為WY標(biāo)識。

CAS：16423-68-0 

CAS：568-63-8

在GB 5009.35中有一種合成著色劑的提取方法：聚酰胺吸附法。在操作的時候很不方便，目前已經(jīng)有商品化的聚酰胺固相萃取小柱代替，比如安譜實驗的CNW Poly-sery PA 聚酰胺小柱，因其操作方便、節(jié)省時間、節(jié)省試劑、對多種合成著色劑處理后結(jié)果準(zhǔn)確且回收率高，因而備受廣大消費(fèi)者的青睞，將其用于8種合成著色劑的前處理實驗過程和結(jié)果如下文所示。

SPE

小柱：CNW Poly-sery PA 聚酰胺小柱  （500mg/6mL）

活化：5mL甲醇

平衡：5mL 水

上樣：5mL 1ppm 8種合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)品，溶劑檸檬酸溶液（pH 3.0~4.0）

淋洗：5mL 甲醇：甲酸：去離子水（4：2：4）（V/V/V），淋洗后抽干小柱中的溶液

洗脫：3mL*2 10%氨水甲醇

收集洗脫液，并于50℃氮吹至干，用甲醇：0.02M乙酸銨溶液（1:1）定容至1mL，充分溶解后，上機(jī)分析。

儀器條件

色譜柱： C18-Wp（4.6mm*250mm，5um）

流動相：A:甲醇B：0.02M乙酸銨

梯度洗脫：0min 15%A，5min 35% A，12~22min 95%A，22.5~30min 15 %A

流速：1.0mL/min

柱溫：25℃

波長：254nm

進(jìn)樣量：10ul

實驗結(jié)果

表1 8種合成著色劑實驗結(jié)果

結(jié)果表明，除赤蘚紅之外，其他7種合成著色劑的回收率均大于90%，RSD小于5%，唯獨(dú)赤蘚紅回收率較低，且多次實驗發(fā)現(xiàn)其回收率在70%~90%之間，回收率不穩(wěn)定。

原因分析

那么到底是什么原因?qū)е鲁嗵\紅回收率不穩(wěn)定呢。仔細(xì)閱讀國標(biāo)，可以發(fā)現(xiàn)對于含赤蘚紅的樣品，其提取方法采用的是液液——分配法，而非聚酰胺吸附法，但是國標(biāo)并沒有對赤蘚紅為何不能采用聚酰胺吸附法做解釋說明。結(jié)合赤蘚紅的化學(xué)結(jié)構(gòu)和GB 5009.35我們來分析一下原因。

液-液分配法原理，加鹽酸使赤蘚紅結(jié)構(gòu)上的Na反應(yīng)后變?yōu)镠，赤蘚紅分子上的酚羥基與三正辛胺分子中的氮原子形成氫鍵，生成不溶于水的化合物，被萃取到正丁醇中，加飽和硫酸鈉去除有機(jī)相中殘留的水分，正己烷去除油脂類雜質(zhì)，用氨水做反萃溶劑，加入氨水，使化合物的氫鍵斷裂，赤蘚紅進(jìn)入水相，乙酸調(diào)pH至中性，濃縮后待測。

聚酰胺吸附法的原理，聚酰胺是由酰胺鍵聚合形成的高分子化合物，其酰胺基可與羥基酚類、酸類、醌類、硝基等化合物以氫鍵形式結(jié)合而被吸附。其他7種合成著色劑均含有較多的磺酸鈉基團(tuán)，在酸性條件下轉(zhuǎn)變成磺酸根，與聚酰胺的結(jié)合很緊密，甲醇-甲酸溶液并不能使其分離，可以作為淋洗溶劑，淋洗掉一些雜質(zhì)，加水也不能將其分離，同時可以洗去一些水溶性雜質(zhì)，加入乙醇-氨水-水，將合成著色劑解析出來，乙酸調(diào)pH至中性，濃縮后待測。SPE的方法也是利用了此原理，酸性條件上樣，使目標(biāo)物與聚酰胺結(jié)合，再用一定比例的甲醇：甲酸：去離子水淋洗去除雜質(zhì)，然后用氨水甲醇洗脫掉目標(biāo)物，濃縮復(fù)溶待測。所以這7種合成著色劑用聚酰胺粉和聚酰胺小柱均能得到較好的結(jié)果。而赤蘚紅在酸性條件下Na反應(yīng)后變?yōu)镠，酚羥基也能與聚酰胺結(jié)合而被吸附，但是在甲醇有機(jī)相存在的條件下，和聚酰胺的結(jié)合并不緊密，容易溶解在甲醇中隨著淋洗液流出，導(dǎo)致洗脫回收率低且不穩(wěn)定。通過設(shè)計淋洗和不淋洗步驟進(jìn)行結(jié)果比較，發(fā)現(xiàn)不淋洗時赤蘚紅的回收率大約93%，明顯高于淋洗時赤蘚紅的回收率80%左右。因聚酰胺在用于合成著色劑測定時淋洗可以除掉一些干擾分析的雜質(zhì)成分，故淋洗步驟很有必要，如果赤蘚紅和其它合成著色劑同時用聚酰胺小柱分析時，需要關(guān)注淋洗溶液和基質(zhì)的復(fù)雜程度，決定是否需要在淋洗液中加入甲醇有機(jī)試劑。

除了用聚酰胺小柱測定赤蘚紅時淋洗溶液不能用甲酸-甲醇溶液外，要使赤蘚紅的實驗結(jié)果準(zhǔn)確、回收率高還需要注意另外兩個方面的問題：

（1）上機(jī)之前過濾所用的濾膜不得使用尼龍濾膜，因為尼龍的化學(xué)成分就是聚酰胺，會吸附合成著色劑；

（2）建議赤蘚紅上機(jī)溶液的溶劑中加入一定比例的甲醇，如甲醇：水（1：1）或甲醇：0.02M乙酸銨（1：1），而非用純水做溶劑。因為我們多次實驗發(fā)現(xiàn)經(jīng)過氮吹濃縮后，純水復(fù)溶，管壁上會殘留很多肉眼可見的赤蘚紅（紅色），經(jīng)過長時間的超聲、渦旋都很難溶解掉，上機(jī)分析回收率大約才20%左右，但加入一定比例的甲醇后很容易將赤蘚紅溶解下來，且甲醇本來也是流動相的一部分，用流動相做溶劑合情合理。

食用色素，是色素的一種，即能被人適量食用的可使食物在一定程度上改變原有顏色的食品添加劑，又稱食用染料和著色劑，分為天然和人工合成兩種，合成著色劑因色澤鮮艷，著色力強(qiáng)、穩(wěn)定性好、價格低廉等特點(diǎn)而被廣泛使用。

最常用的食品添加有新紅、檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán) 、赤蘚紅等，《GB 5009.35-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測定》中規(guī)定了這7種合成著色劑的液相分析方法，7種合成著色劑中其中一種著色劑是亮藍(lán)，關(guān)于亮藍(lán)的測定經(jīng)常聽實驗員反饋亮藍(lán)旁邊總是有雜質(zhì)峰，事實真是這樣嗎？

我們一起來揭秘真相！

上機(jī)標(biāo)品

準(zhǔn)備亮藍(lán)標(biāo)品， 用水配置成10ppm。

儀器條件

色譜柱： C18-Wp（4.6mm*250mm，5um）

流動相：A:甲醇B：0.02M乙酸銨

梯度洗脫：0min 20%A，5min 35% A，12~18min 98%A，20~27min 20%A

柱溫：25℃

波長：254nm

進(jìn)樣量：20ul

流速：1.0ml/min

實驗譜圖

圖1亮藍(lán)色譜圖（色譜條件1）

圖4 亮藍(lán)色譜圖（色譜條件2）

圖5 亮藍(lán)色譜圖（色譜條件3）

結(jié)果分析

扣除溶劑空白后得到的亮藍(lán)譜圖見圖1，果然不是對稱的色譜峰，而且非但不對稱，看著還像3個峰。那么到底是什么原因呢，我們從以下方面進(jìn)行了分析。

（1）標(biāo)準(zhǔn)品問題。若標(biāo)準(zhǔn)品純度不高，可能會帶來雜質(zhì)干擾，查看亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品的證書標(biāo)識的純度是87.6%，純度不是特別高，但是是某進(jìn)口知名品牌D公司生產(chǎn)的，無法確定3個峰里面是否含有雜質(zhì)峰。

（2）光譜特征。紫外-可見吸收光譜是化合物固有的性質(zhì)，一般不同的化合物其吸收特征是不一樣的，因此可以通過光譜特征對化合物進(jìn)行定性分析。那么這3個峰到低是什么物質(zhì)呢，使用DAD檢測器對其進(jìn)行200-800nm范圍內(nèi)的掃描，得到的光譜見圖2，由此可見3個化合物的紫外吸收特征非常相似，在HPLC-UV分析中這種情況一般都是同分異構(gòu)體。

圖2 亮藍(lán)光譜掃描圖

（3）結(jié)構(gòu)特征。那么亮藍(lán)真的有同分異構(gòu)體嗎，亮藍(lán)的結(jié)構(gòu)式見圖3，為非偶氮類酸性染料，主要有3個同分異構(gòu)體，自然界中常以 3 種同分異構(gòu)體的混合物(間位磺化物:對位磺化物:鄰位磺化物＝75～85: 15～20:0～8)形式存在，因而液相分析的時候常常得不到單一對稱的色譜峰。

圖3 亮藍(lán)結(jié)構(gòu)式

（4）定量分析。那么如何對亮藍(lán)的含量進(jìn)行定量分析是實驗員比較關(guān)心的問題，液相色譜定量分析的前提是先分離，嘗試對流動相比例進(jìn)行調(diào)節(jié)，以減緩洗脫能力，我們發(fā)現(xiàn)這3個峰是可以實現(xiàn)基線分離的，比如圖4，圖5，不同色譜條件、不同濃度時各色譜峰面積結(jié)果以信息見表1。

表1 亮藍(lán)色譜峰面積

由此可以看出，不同的色譜條件，相同濃度的亮藍(lán)3個色譜峰基線分離和未分離時峰面積存在一定的差異，但是相同的色譜條件下，在2-100ppm的濃度范圍，各個亮藍(lán)的同分異構(gòu)體峰面積-濃度的線性關(guān)系較好，可能在不同的色譜條件下，亮藍(lán)的響應(yīng)情況會有稍微的差異，而在特定的色譜條件下，亮藍(lán)各個組分的同分異構(gòu)體并不會發(fā)生很大的轉(zhuǎn)變。

實驗結(jié)論

（1）亮藍(lán)分析時出現(xiàn)的疑似雜質(zhì)峰其實是亮藍(lán)的同分異構(gòu)體，亮藍(lán)有3種同分異構(gòu)體。

（2）實際應(yīng)用中可以根據(jù)自己的實驗?zāi)康?，決定是否要使3個同分異構(gòu)體完全分離，如果測試的是總的亮藍(lán)含量，把3個目標(biāo)峰合并在一起計算，如果是計算各個異構(gòu)體的含量就要通過調(diào)節(jié)色譜條件使其完全分離后再定量計算。

在色譜分析檢測中（GC&HPLC），我們經(jīng)常要使用到衍生化技術(shù)手段來達(dá)到對目標(biāo)物質(zhì)的定性定量分析，按照衍生化發(fā)生在色譜分析前后，分為柱前衍生和柱后衍生，今天我們就和小編一起學(xué)習(xí)衍生化目的、原理、分類和應(yīng)用等。

一、衍生化的目的

衍生化包括分析物與衍生化試劑之間發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)，其目的是改變該分析物的理化性質(zhì)，主要有以下幾個目的：

?提高檢測性能

?改變分析物的分子結(jié)構(gòu)或極性以獲得更出色的色譜分離

?增加揮發(fā)性

?改變基質(zhì)性質(zhì)以實現(xiàn)更好的分離

?穩(wěn)定分析物

二、常用的衍生化試劑

1.硅烷化試劑

?硅烷基指三甲基硅烷Si(CH₃)₃或稱TMS；

?硅烷化作用是指將硅烷基引入到分子中，一般是取代活性氫；

?活性氫被硅烷基取代后降低了化合物的極性，增強(qiáng)了揮發(fā)性和穩(wěn)定性；

?對于不揮發(fā)或者200-300℃的穩(wěn)定性，可以使用硅烷化試劑衍生；

?硅烷化試劑容易吸潮失效，因此在使用過程中需要對樣品和試劑脫水。

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??；芙档土u基、氨基、巰基的極性，減小色譜峰拖尾，增強(qiáng)揮發(fā)性；

?能增強(qiáng)某些容易氧化的化合物（如：兒茶酚胺）的穩(wěn)定性；

?引入含有鹵離子的?；?，可以提高電子捕獲檢測器（ECD）的靈敏度。

3.紫外衍生試劑

紫外衍生化試劑主要是給一些沒有紫外吸收或者紫外吸收很弱的化合物分子引入強(qiáng)紫外吸收的基團(tuán)，使得目標(biāo)物能被紫外檢測器檢測。

4.熒光衍生化試劑

液相色譜檢測中熒光檢測器的靈敏度要比紫外檢測的靈敏度高出幾個數(shù)量級，但是大多數(shù)化合物沒有熒光，通過熒光衍生化試劑將目標(biāo)物上接上能發(fā)出熒光的生色基團(tuán)，以達(dá)到熒光檢測的目的，由于熒光衍生物的激發(fā)波長與發(fā)射波長與衍生化試劑不同，即使衍生化試劑過量或者有副反應(yīng)，也不干擾熒光衍生物的檢測。

5.電化學(xué)衍生化試劑

電化學(xué)檢測器（ECD）是根據(jù)電化學(xué)原理和物質(zhì)的電化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行檢測的，在液相色譜中常用來檢測無紫外和無熒光的，但是有電活性的化合物，其檢測靈敏度高，選擇性強(qiáng)，對于沒有電活性的化合物，與電化學(xué)衍生試劑反應(yīng)，生成具有電化學(xué)活性的衍生物就可以使用ECD檢測，由于硝基具有電化學(xué)活性，因此常用來作為電化學(xué)衍生試劑，常見電化學(xué)衍生試劑化如下：

三、衍生化在HPLC及GC中的應(yīng)用案例分享

HPLC中的應(yīng)用案例-氨基甲酸酯農(nóng)藥檢測（GB23200.112-2018）

甲奈威和克百威屬于氨基甲酸酯一類的廣譜殺蟲劑，常用于水稻和玉米作物，其本身無熒光，通過高溫堿性條件下，將其水解為甲基胺，再與鄰苯二甲醛(OPA) 和2-巰基乙醇(RSH) 反應(yīng)，生成具有強(qiáng)熒光性的異吲哚衍生物，可用于熒光檢測，檢測級別可到達(dá)ppt級別。

GB23200.112-2018中9種氨基甲酸酯類農(nóng)藥及其代謝物的柱后衍生譜圖

GC中的應(yīng)用案例-氯丙醇及其脂肪酸脂的檢測（GB5009.191-2016）：

?；芙档土u基、氨基、巰基的極性，改善這些化合物的色譜性能（減少峰拖尾），并能提高這些化合物的揮發(fā)性，也能增強(qiáng)某些容易氧化的化合物的穩(wěn)定性，當(dāng)?；瘯r引入了含有鹵素離子的?；鶗r，還能提高使用ECD檢測的靈敏度。

GBGB5009.191-2016中，采用七氟丁酰咪唑作為衍生化試劑，在溫和的條件下將羥基鈍化反應(yīng)生成具較好穩(wěn)定性、良好揮發(fā)性和強(qiáng)電負(fù)性的衍生物，并使用GCMS檢測。