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  紫色的憂傷38 2016-03-28 00:00:00

  氨基酸的分離鑒定——紙層析法 一，實驗?zāi)康? 掌握氨基酸紙層析的方法和原理，學(xué)會分析待 測樣品的氨基酸成分. 二，實驗原理 紙層析是以濾紙為惰性支持物的分配層析.濾紙纖維上的羥基具有親水性，吸附一層水作為固定相，有機(jī)溶劑為流動相.當(dāng)有機(jī)相流經(jīng)固定相時，物質(zhì)在兩相間不斷分配而得到分離. 溶質(zhì)在濾紙上的移動速度用Rf值表示: Rf=原點到層析斑點ZX的距離/原點到溶劑前沿的距離 在一定的條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù).Rf值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，性質(zhì)，溶劑系統(tǒng)，層析濾紙的質(zhì)量和層析溫度等因素有關(guān).本實驗利用紙層析法分離氨基酸. 三，實驗器材 (1)大燒杯(5000mL):1只/組 (2)微量注射器(100 L):1只/ 組. (3)噴霧器:公用. (4)培養(yǎng)皿:1只/組. (5)層析濾紙(長22cm，寬14cm的新華一號濾紙):1張/組. (6)直尺，鉛筆:自備. (7)電吹風(fēng):1只/組. (8)托盤，針，白線:1套/組. (9)手套:1雙/組. (10)塑料薄膜:公用. (11)小燒杯:50mL，1只/組. 四，實驗試劑 (1)擴(kuò)展劑:將4體積正丁醇和1體積冰醋酸放入分液漏斗中，與5體積水混合，充分振蕩，靜置后分層，棄去下層水層. (2)氨基酸溶液:0.5%的已知氨基酸溶液3種(賴氨酸，苯丙氨酸，纈氨酸)，0.5%的待測氨基酸液1種. (3)顯色劑:0.1%水合茚三酮正丁醇溶液. 實驗試劑 五，實驗操作 檢查培養(yǎng)皿是否干燥，潔凈;若否，將其洗凈并置于干燥箱內(nèi)120℃烘干. (1)平衡:剪一大塊塑料薄膜鋪在桌面上，將層析缸或大燒杯到置于塑料薄膜上，再把盛有約20mL展層溶液的小燒杯置于倒置的層析缸或大燒杯中，用塑料薄膜密封起來，平衡20min. (2)規(guī)劃:帶上手套，取寬約14cm，高約22cm的層析濾紙一張.在紙的下端距邊緣2cm處輕輕用鉛筆劃一條平行于底邊的直線A，在直線上做4個記號，記號之間間隔2cm，這就是原點的位置.另在距左邊緣1cm處畫一條平行于左邊緣的直線B，在B線上以A，B兩線的交點為原點標(biāo)明刻度(以厘米為單位)，參見左圖. (3)點樣:用微量注射器分別取10mL左右的氨基酸樣品(每取一個樣之前都要用蒸餾水洗滌微量注射器，以免交叉污染)，點在這四個位置上.擠一滴點一次，同一位置上需點2～3次，2～3mL/次，每點完一點，立刻用電吹風(fēng)熱風(fēng)吹干后再點，以保證每點在紙上擴(kuò)散的直徑Z大不超過3mm.每人須點4個樣，其中3個是已知樣，1個是待測樣品. (4)層析:用針，線將濾紙縫成筒狀，紙的兩側(cè) 邊緣不能接觸且要保持平行，參見圖3-3.向培養(yǎng)皿中加入擴(kuò)展劑，使其液面高度達(dá)到1cm左右，將點好樣的濾紙筒直立于培養(yǎng)皿中(點樣的一端在下，擴(kuò)展劑的液面在A線下約1cm)，罩上大燒杯，仍用塑料薄膜密封.當(dāng)擴(kuò)展劑上升到A線時開始計時，每隔一定時間測定一下擴(kuò)展劑上升的高度，填入表3-1中.當(dāng)上升到15～18cm，取出濾紙，剪斷連線，立即用鉛筆描出溶劑前沿線，迅速用電吹風(fēng)熱風(fēng)吹干. (5)顯色:用噴霧器在通風(fēng)廚中向濾紙上均勻噴上0.1%茚三酮正丁醇溶液，然后立即用熱風(fēng)吹干，即可顯出各層析斑點，參見左圖. (6)計算各種氨基酸的Rf值，并判斷混合樣品中都有哪些氨基酸，各人將自己的實驗結(jié)果貼在實驗報告上，見表3-2. (7)以層析時間為橫坐標(biāo)，擴(kuò)展劑上升高度為縱坐標(biāo)畫圖，求出擴(kuò)展劑上升到18cm時所需要的時間. (8)將微量注射器內(nèi)外用蒸餾水清洗干凈，倒掉用過的展層液和平衡液，將培養(yǎng)皿洗凈，整理好桌面上的儀器和試劑

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