參與評論

評論

登錄后參與評論

全部評論(1條)

• 

  符號哥abc 2015-10-28 00:00:00

  【原理】離子交換樹脂是一種合成的高聚物，不溶于水，能吸水膨脹.高聚物分子由能電離的極性基團及非極性的樹脂組成.極性基團上的離子能與溶液中的離子起交換作用，而非極性的樹脂本身物性不變.通常離子交換樹脂按所帶的基團分為強酸(＝R＝S03H)、弱(＝COOH)、強堿 (＝N+＝R：)和弱堿(＝NH2＝NHR＝NR2).離子交換樹脂分離小分子物質(zhì)如氨基酸、腺苷、腺苷酸等是比較理想的.但對生物大于物質(zhì)如蛋白質(zhì)是不適當?shù)?，因為它們不能擴散到樹脂的鏈狀結(jié)構(gòu)中.故如分離生物大子、可選用以多糖聚合物如纖維素、葡聚糖為載體的離子交換劑.本實驗用磺酸陽離子交換樹脂分離酸性氨基酸(天冬氨酸)、中性氨基酸(丙氨酸)堿性氨基酸(賴氨酸)的混合液.在特定的pH條件下，它們解離程度不同，通過改變脫液的pH或離子強度可分別洗脫分離.【材料】1．實驗器材層析柱（1.6X20cm）；恒流泵；梯度混合器；試管及試管架；紫外分光光度計、磺酸陽離子交換樹脂(Dowex 50)2．實驗試劑(1)2mol／L HCl(2)2mol／L NaOH(3)0.1mOl／L HCl(4) 0.1mol／L NaOH(5)pH4.2的檸檬酸緩沖液：0.lmol／L檸檬酸54m1加0.1mol／L檸檬酸鈉46ml(6)pH5的醋酸緩沖液：0.2mol／L NaAc 70ml加 0.2mol／L HAc 30ml(7)0.2％中性茚三酮溶液：0.2g茚三酮加100ml丙酮(8)氨基酸混合液：丙氨酸、天冬氨酸、賴氨酸各10m1加0.1mol／L HCl 3m【方法】1.樹脂的處理100ml燒杯中置約10g樹脂，加25ml 12mo1／L HCl攪拌2h，傾棄酸液，用蒸餾水充洗滌樹脂至中性.加25ml 12mol／L NaOH至上述樹脂中攪拌2h，傾棄堿液，用蒸餾水洗滌至中性.將樹脂懸浮于50ml pH4.2檸檬酸緩沖液中備用.2.裝柱取直徑0.8cm～1.2cm、長度 10cm～12cm的層析柱，底部墊玻璃棉或海綿圓墊，自頂部注入經(jīng)處理的上述樹脂懸浮液，關(guān)閉層柱出口，待樹脂沉降后，放出過量的溶液，在加入一些樹脂，至樹脂沉積至8cm～10cm高度即可.于柱子頂部繼續(xù)加入pH4.2檸檬酸緩沖液洗滌，使流出液pH為4.2為止，關(guān)閉柱子出口，保持液面高出樹脂表面1cm左右.3.加樣、洗脫及洗脫液收集打開山口使緩沖液流出，待液面幾乎平齊樹脂表面時關(guān)閉出口(不可使樹脂表面干燥).用長滴管將15滴氨基酸混合液仔細直接加到樹脂頂部，打開出口使其緩慢流入柱內(nèi).當液面剛平樹脂表面時，加入0.1mol／L HCl 3ml，以10滴／min～12滴／min的流速洗脫，收集洗脫液，每管20滴，逐管收存.當HCl液面剛平樹脂表面時，用1m1 pH4.2檸檬酸緩沖液沖洗柱壁一次，接著用2ml pH4.2檸檬酸緩沖液洗脫，保持流速10滴／min～12滴／min并注意勿使樹脂表面干燥.在收集洗脫液的過程中，逐管用茚三酮檢驗氨基酸的洗脫情況，方法是：于各管洗脫液中加10滴pH5醋酸緩沖液和10滴中性茚三酮溶液，沸水浴中煮10min，如溶液呈紫藍色，表示已有氨基酸洗脫下來.顯色的深度可代表洗脫的氨基酸濃度，可比色測.在用pH4.2檸檬酸緩沖液把第二個氨基酸洗脫出來之后，再收集兩管茚三酮反應(yīng)陰性部分，關(guān)閉層析柱出口，將樹脂頂部剩余的pH4.2檸檬酸緩沖液移去.于樹脂頂部加入2ml 0.1mo1／L NaOH，打開出口使其緩慢流入柱內(nèi)，按上面I續(xù)用0.1mo1／L NaOH洗脫并逐管收集 (注意仍然保持流速10滴／min～12滴／min)，每管20滴.做洗脫液中氨基酸檢驗，在第三個氨基酸用0.1mo1／L NaOH洗脫下來以后，再繼續(xù)收集兩管茚三酮反應(yīng)陰性部分.Z后以洗脫液管號為橫坐標，洗脫液各管光密度（以水作空白，在570nm波長讀取吸光度）或顏色深淺（以 -，±，+，++．．．表示）為縱坐標作圖，即可畫出一條洗脫曲線.【注意事項】1.一直保持流速10滴/min～12滴／min，并注意勿使樹脂表面干燥.2.在裝柱時必須防止氣泡、分層及柱子液面在樹脂表面以下等現(xiàn)象發(fā)生.

  贊(4)

  回復(fù)(0)

  評論

  評論

  登錄后參與評論