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  涼的不過人心o 2017-09-07 08:51:24

  巨細胞病毒(CMV)是一種皰疹病毒，分布廣泛。CMV感染可引起泌尿生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟、肺、血液循環(huán)系統(tǒng)等病變，并與惡性腫瘤的發(fā)生可能有關(guān)。新近報道，艾滋病與CMV感染可能有關(guān)。常通過傳播。故列為性傳播疾病。 巨細胞病毒感染在人群中較廣泛，能引起全身各器官組織病變，胎兒、嬰兒的嚴重損害，甚至死亡，并可能與宮頸癌等惡性腫瘤的發(fā)生有關(guān)。所以了解巨細胞病毒，積極預(yù)防巨細胞病毒感染很重要。 [病理學] [病原體] CMV又稱為涎病毒，屬于皰疹病毒亞科，是人類皰疹病毒組中Z大的一種病毒。由分子量約為150X106的線狀雙股DNA所組成。其形Z大由162個殼粒（capsomer），正20面體構(gòu)成。有典型的皰疹病毒結(jié)構(gòu)。形態(tài)與單純皰疹病毒及水痘-帶狀皰疹病毒非常相似，不易區(qū)別。 CMV只能在人纖維母細胞的組織培養(yǎng)中增殖，而不能在其他動物細胞中生長，增殖非常緩慢，其復(fù)制周期為36-48小時，比單純皰疹病毒復(fù)制周期8小時要長得多。初次分離需一個多月才能出現(xiàn)特殊的細胞；細胞變園，膨脹，細胞及核巨大化，核周圍出現(xiàn)一輪“暈”的大型嗜酸性包涵體。在活體中的靶細胞主要是上皮細胞。人類CMV各株之間有廣泛交叉反應(yīng)。 CMV在20%中Z多存活2小時。pH<5時，或置于56℃30分鐘，或紫外線照射5分鐘可被充分滅活。CMV的感染性對凍融或存于-20℃或-50℃均不穩(wěn)定，10%的家用漂可使其感染性明顯降低。 CMV感染的特征時出現(xiàn)有典型的胞漿及核內(nèi)包涵體的巨大細胞，故又名巨細胞病毒。它在人體組織中可形成肥大的細胞，引起巨細胞包涵體病。 發(fā)病機理 初次感染后，CMV將在宿主細胞中無限期存在成潛伏狀態(tài)?？赡芾奂岸喾N組織器官，尸檢提示肺、肝、胰、唾液腺、神經(jīng)系統(tǒng)及腸也可能是病毒潛伏場所。先天性感染的嚴重程度，與缺乏產(chǎn)生沉淀抗體的能力和T細胞對CMV的應(yīng)答有關(guān)。兒童和成年人感染CMV后，在外周血中出現(xiàn)具有YZ細胞毒表型的活化T淋巴細胞，如果宿主的T細胞功能受損，潛伏的病毒就可能復(fù)活并引起多種癥候群。組織移植后發(fā)生的慢性刺激，為CMV活化，誘發(fā)疾病提供了條件。某些針對T細胞的強烈免疫YZ劑如抗胸腺細胞球蛋白，與臨床CMV癥候群高發(fā)率有關(guān)。此外，CMV在功能上可作為輔助因子，使?jié)摲腥镜腍IV活化。 傳染源 傳染源是病人及其急性帶毒者。已發(fā)現(xiàn)在血液、唾液、眼淚、尿液、精液、糞便、子宮頸和陰道分泌物、乳汁等中存在CMV。病毒可由乳汁、唾液及尿排出，可持續(xù)數(shù)周到幾年。 易感人群 CMV遍布世界各地，人對其有廣泛的易感性。人是CMV的唯yi宿主。 血清學調(diào)查表明：40-成人有CMV抗體，其流行無季節(jié)性傾向。 不同國家及不同經(jīng)濟狀況感染率不同。在亞洲和非洲90%的人口受感染，其中大多數(shù)人在青少年時期即有抗體，說明感染年齡較早，而西方國家其感染發(fā)生較晚。調(diào)查還表明，低經(jīng)濟收入人群較高經(jīng)濟收入人群感染率高。70歲左右人群比20歲左右人群抗體陽性率高。女性易感年齡在20-30歲，男性則在35歲以后，到50-60歲，男女之間抗體陽性率基本相同。雖然體內(nèi)已經(jīng)產(chǎn)生循環(huán)抗體，但病毒仍能夠持續(xù)或間斷排除，因此是致慢性或隱性感染。 多數(shù)人一生中都感染過CMV，但主要為無癥狀的亞臨床感染。成人CMV感染和免疫功能有密切關(guān)系。病毒往往以潛伏感染的形式持續(xù)終生，只有當宿主免疫狀態(tài)失去平衡，如器官和移植、癌癥、數(shù)學、妊娠以及應(yīng)用免疫YZ劑等時，潛伏的病毒才復(fù)活。潛伏病毒的復(fù)活和無癥狀的攜帶者都能引起病毒的傳播。如因器官移植而接受免疫YZ劑ZL者，常因所供器官和輸入血液中有潛伏病毒，或免疫YZ使?jié)摲牟《净罨l(fā)病，艾滋病患者的CMV感染發(fā)病率高。 傳播途徑 巨細胞病毒的傳播途徑有： (1)先天性感染（宮內(nèi)感染）：妊娠期，巨細胞病毒可通過胎盤傳播給胎兒。 (2)獲得性感染（圍產(chǎn)期感染）：分娩時，如宮頸分泌物中有病毒，可經(jīng)產(chǎn)道傳播給新生兒。 (3)在產(chǎn)后，乳汁中可分泌病毒，所以在母乳喂養(yǎng)時可直接傳播給嬰兒。 (4)與排毒者長期接觸，可經(jīng)唾液、尿、眼淚等傳播。 (5)同源性CMV感染：可經(jīng)輸血、器官移植等傳播。同源性CMV感染是輸血和器官移植的一種嚴重危害，多次輸血或一次大量輸血使原發(fā)和再發(fā)感染的危險性，輸入含白細胞血液的危險性更高，器官或移植術(shù)后CMV感染率也高。 (6)傳播：因為病毒常常存在于泌尿生殖道的分泌物、精液或?qū)m頸分泌物中，所以通過可直接傳播。 多從精液，宮頸分泌物，淚液及糞便（口腔性欲，吻肛）感染所致。 CMV感染途徑（環(huán)）表 表1 母親 胎兒 新生兒 嬰幼兒 小兒，成人 陰道感染，接觸感染 （唾液、尿等） 輸血 肝 炎 呼吸道感染 隱性感染 肝炎 呼吸道感染 →成熟不良兒 體重增長慢 (免疫YZ劑等誘發(fā)) 肺炎 胃腸道粘膜 肝 炎 病毒血癥 ┌→無侵襲 │ └→感染 —— →病毒尿陽性的健康新生兒 傳染性單核細胞增多癥 傳染性單核細胞增多癥 傳染性單核細胞 增多癥樣疾患 →病毒尿、肝功障礙 一過性血小板減少 隱性感染 輸血 不明熱 無癥狀感染 →全身性巨細胞包涵體病 ↓ 即或成活也出現(xiàn)智能障礙等體征 [免疫學] CMV感染可引起機體的免疫功能降低，特別是細胞免疫功能下降。CMV感染對胸腺發(fā)育及脾細胞、單核吞噬細胞、NK細胞及CTL細胞的功能有著顯著的影響。 一、對胸腺、的影響 實驗室急性CMV感染的新生豚鼠，胸腺發(fā)育受抑，T細胞數(shù)減少，成年鼠感染CMV后，88%胸腺可檢出CMV。 CMV感染致脾功能受影響，淋巴細胞對conA刺激的增殖下降，脾細胞產(chǎn)生的IL-2顯著降低。 二、對免疫細胞的影響 CMV感染引起的免疫YZ與病毒在細胞內(nèi)的復(fù)制有關(guān)。CMV可以在單核吞噬細胞、T細胞、B細胞及一些尚未確定的單核細胞中復(fù)制，其中單核吞噬細胞Z易感染CMV，淋巴細胞在免疫反應(yīng)中具有重要的調(diào)節(jié)功能和效應(yīng)功能。CMV感染后，可引起淋巴細胞的多種免疫功能受損。 CMV感染多表現(xiàn)為急性單核細胞增多癥。外周血淋巴細胞對有絲分裂原、CMV抗原和HSV抗原增殖反應(yīng)減弱，誘導(dǎo)干擾素水平下降，CD4/CD8比值從1.7±0.7下降為0.2+0.2，T細胞活性降低.這種變化有的可持續(xù)相當長時間，病后10個月，大多數(shù)患者T細胞亞群比例仍未完全恢復(fù)正常。 CMV感染的免疫YZ作用主要是被病毒感染的大單核細胞和CD8細胞的功能異常所致。單核吞噬細胞在抗CMV免疫中起著樞紐作用，不但可以直接吞噬、殺傷病毒，更重要的是可以處理、提呈抗原，分泌細胞因子，調(diào)控和擴大免疫反應(yīng)。當CMV感染后，單核吞噬細胞功能受到影響，CMV感染巨噬細胞引起其吞噬功能降低，細胞內(nèi)氧自由基產(chǎn)生減少，F(xiàn)C受體、補體受體的表達發(fā)生改變，且其抗原提呈功能降低，產(chǎn)生IL-1降低，對IL-1及IL-2的反應(yīng)亦降低。Moses等用胸腺細胞增殖試驗檢測，IL-1活性降低，IL-1產(chǎn)生降低可引起TH/TS細胞比例失衡。 NK細胞有拮抗CMV擴散的作用。NK細胞積極參與了抗CMV感染的全過程，但存在高的NK活力不一定是保護性應(yīng)答，而是活動性感染的證明。NK細胞雖不能阻止原發(fā)性CMV感染的出現(xiàn)，但一旦存在感染后，NK細胞能在CMV感染早期出現(xiàn)，有限制擴散、使感染局限的作用。NK細胞、CTL細胞是抗CMV的重要效應(yīng)細胞。在CMV復(fù)制早期，感染性病毒體產(chǎn)生前，它們能裂解感染細胞，使病毒在細胞間擴散流產(chǎn)。在小鼠模型中，病毒作用了3-5天時，抗病毒效應(yīng)由NK細胞介導(dǎo)，NK細胞活性可由IFN增強。6-21天，脾、外周血存在CTL細胞的殺傷活性。NK細胞、CTL細胞活性的高低決定了機體對CMV感染的敏感性及感染恢復(fù)的難易性。但CMV感染時，NK細胞及CTL細胞活性亦受到嚴重影響。此外，特異性細胞免疫有阻止CMV感染再發(fā)作用。有人檢測了20個發(fā)生CMV感染腎移植受者T細胞應(yīng)答，發(fā)現(xiàn)有14個有CMV細胞毒應(yīng)答，而6個不出現(xiàn)細胞毒應(yīng)答者有嚴重的臨床后果。因此，特異性T細胞存在，有阻止CMV感染再發(fā)的作用。 三、抗體有降低CMV感染的毒力作用 機體受CMV的感染后，可出現(xiàn)多種抗體。乳汁、宮頸分泌物、唾液中盡管有特異性抗體出現(xiàn)，包括中和抗體。但仍能檢出CMV，說明抗體并不能阻止病毒擴散。胎兒從母體被動獲得的抗體不能阻斷經(jīng)宮內(nèi)、產(chǎn)道或乳汁傳播的感染。研究證明，致死性CMV攻擊前，在小鼠腹腔或靜脈注入0.2mlGX價抗CMV球蛋白，可完全保護動物免于死亡。1個月后再用CMV等二次攻擊，動物仍全部存活，表明抗體有降低CMV的毒力作用。 孕婦感染了巨細胞病毒會有何后果? 孕婦感染了巨細胞病毒后，病毒可通過胎盤感染胎兒，造成胎兒先天性感染，流產(chǎn)和死胎。 先天性感染的嬰兒出生時可無癥狀，但也有嚴重者可累及多臟器，甚至死亡。有癥狀者可見肝脾腫大，黃疸，瘀斑或紫癜，脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎，小頭畸形等。所有活著的患兒都會出現(xiàn)不同程度的聽力、視力減退，意識、運動障礙，智力遲鈍等。嬰兒出生后經(jīng)產(chǎn)道或哺乳感染的，為后天獲得性感染，一般癥狀輕，預(yù)后良好，個別有肝功異常。 [臨床表現(xiàn)] 巨細胞病毒感染有何癥狀? 健康的成年人發(fā)生巨細胞病毒感染時多無明顯的臨床癥狀，部分患者可有與傳染性單核細胞增多癥相似的表現(xiàn)，癥狀為低熱，乏力，咽痛，淋巴結(jié)腫大，關(guān)節(jié)肌肉酸痛，多發(fā)性神經(jīng)炎，周圍血中有不典型淋巴細胞，脾大等。 妊娠期宮內(nèi)感染可對胎兒造成損害，容易發(fā)生自然流產(chǎn)和死胎或是早產(chǎn)。新生兒癥狀可見肝脾腫大，黃疸，肝炎，血小板減少性紫癜，溶血性貧血，神經(jīng)系統(tǒng)的退行性變化，小頭畸形，智力低下，及視力、聽力障礙等。 新生兒感染可無全身癥狀，有的僅表現(xiàn)為呼吸障礙癥狀，也有的可出現(xiàn)肝功能異常。不會出現(xiàn)神經(jīng)損傷。 CMV感染的自然史很復(fù)雜，在原發(fā)性感染以后排毒，往往持續(xù)數(shù)周、數(shù)月甚至數(shù)年，然后感染轉(zhuǎn)為潛伏。常有復(fù)發(fā)感染伴重新排毒。甚至在原發(fā)感染后很多年，潛伏病毒再激活，也可能有不同抗原性病毒株的再感染。CMV感染的臨床表現(xiàn)與個體免疫功能和年齡有關(guān)。從表2所示，不論從垂直感染、平行傳播或醫(yī)源性感染所出現(xiàn)的癥狀與體征都是多種多樣的。 表2CMV感染癥臨床經(jīng)過與病型（Baerlocher等） 1.新生兒感染（先天性） a.重癥型：黃疸、貧血、肝脾腫大、血小板減少性紫癜，侵犯神經(jīng)，肺炎，心肌炎） b.輕癥型：假死，心臟肥大，高膽紅素血癥 2．出生后無癥狀期，乳兒期再感染CMV（先天性/后天性？） a.全身型 b.呼吸系型（百日咳樣）c.肝脾腫大 d.胃腸型 e.腎型？ 3．后天型 a.流感型 b.單核細胞增多癥型 c.呼吸系型 d.胃腸型 e.肝炎 f.因特殊YL防御能力低下 g.無癥型？ 4．1、2、3項的后果即精神、運動發(fā)育遲緩 關(guān)于后天性CMV感染癥，在臨床中常見于輸血后的單核細胞增多癥，由于免疫功能缺陷而發(fā)生血管、網(wǎng)膜炎、肺炎以及消化道感染。并且大多數(shù)患者合并格-巴氏綜合征。 [診斷] 僅靠臨床表現(xiàn)，不能診斷CMV感染，必須依靠實驗室手段，從臨床標本中分離出病毒或其特異性抗體（呈出4倍以上增加或持續(xù)抗體滴度升高）才能確診。 一、病毒分離 Z好用唾液、尿液、生殖道分泌物、乳汁和白細胞，接種到人的成纖維細胞內(nèi)繁殖和分離，細胞病變效應(yīng)（CPE）在1天或數(shù)周后出現(xiàn)，經(jīng)固定和HE染色后可觀察到巨細胞，核內(nèi)有內(nèi)包涵體，核周暈圈及嗜酸性胞漿內(nèi)包涵體，很象“貓頭鷹眼”（owl′s eye）亦可用單克隆或多克隆抗體的熒光染色等方法檢查。 二、血清抗體檢測 Z常用的有補體結(jié)合試驗（CF）、間接免疫熒光試驗（IIF）、免疫酶試驗（EIA）、間接血凝試驗（IHA）和放射免疫試驗（RIA）等檢測CMV-IgG和IgM抗體。當單份血清標本已確定既往有CMV感染時，應(yīng)當立即留血清標本，以及間隔2周、4周、8周再留血清標本，結(jié)合病毒分離可作原發(fā)感染診斷。 三、DNA探針 已廣泛應(yīng)用于檢測CMV，其中以32P標記的探針敏感性Z高，對某些標本來說，雜交方法可能比病毒分離更敏感。 四、聚合酶鏈式反應(yīng)（PCR） （一）標本的采集及處理 采集的標本包括患者的血液、尿，以及腺體組織等。由全血制備的血沉棕黃層（buffy coats）可保存于-80℃；尿液標本可保存于液氮中。凍存標本應(yīng)避免反復(fù)凍融。 尿液標本經(jīng)2500r/min離心10min，以除去細胞碎片，收集上清液。由于尿液中含有PCRYZ劑，因此需用聚乙二醇（PEG6000）進行預(yù)處理：50?l尿上清與50?l 20%PEG6000和25?l 2mol/L NaCl混合，置冰浴中6h；15000r/min離心30min收集沉淀。再于6400r/min離心3min；盡可能吸去上清，將沉淀懸浮于蒸餾水中。該懸液可直接用于PCR擴增；擴增時應(yīng)于100℃加熱10min，迅速置冰浴中冷卻。 （二）模板DNA的制備 1．由血液標本制備模板DNA 方法A：向血清中加入NaCl使Z終濃度為150mmol/L；取10?l 此血清于70℃處理45s后即可直接進行PCR擴增。 方法B：由血沉棕黃層（BCP）制備：① 用PBS洗滌BCP兩次，收取沉淀。② 加入500?l 6mol/L鹽酸胍，勻漿。③ 加入30?l 10mmol/L EDTA，10mmol/L NaCl，30?l20% Sarcosyl和5?l 蛋白酶K（10mg/ml），混合均勻，60℃反應(yīng)1h。④ 加入1130?l 的乙醇，-20℃沉淀1～2h。⑤ 離心收集DNA沉淀。⑥ 用70%乙醇洗兩次，Z后將沉淀懸浮于少量10mmol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA中。置4℃?zhèn)溆谩? 2.由冰凍組織標本制備模板DNA：① 用恒冷切片機切取一塊5～10?m冰凍組織塊，置于1.5ml塑料管中。② 加入10%用緩沖液配制的福馬林。③ 10min后離心1～2min輕輕傾去上清液，沉淀用乙醇洗2次。④ 于室溫干燥10～60min。⑤ 加入抽提緩沖液（100mmol/L Tris-HCl，4mmol/L EDTA、pH8.0，400?g/ml蛋白酶K），使剛好浸沒沉淀物（約50～100?l ）；將沉淀搗碎。福馬林固定的或石蠟包埋組織經(jīng)脫蠟和干燥后也可按此處理。⑥ 37℃放置過液。⑦ 置沸水中7min滅活蛋白酶K。⑧ 離心收集上清，取1～10?l 即可進行PCR擴增。 3.由尿液標本制備模板DNA：①100?l 尿上清液與100?l 6mol/L異硫氰酸胍，7?l 2mol/L NaCl和20?l 玻璃粉懸液（DNA PREP，Asahi Glass Co，Tokyo）混合。② 室溫放置10min后，6400r/min離心2min，收集沉淀。③ 沉淀用50%乙醇，10mmo/L Tris-HCl、pH7.4， 50mmol/L NaCl洗一次，6400r/min離心1min。④ 同樣洗滌沉淀2次，收集沉淀。⑤ 加入50?l 蒸餾水，于55℃作用15min。⑥ 15000r/min離心2min，收集上清（含HCMV DNA），進行PCR擴增，將此懸液于100℃加熱10min，并迅速于冰浴中冷卻。 （三）引物及探針 引物及探針的設(shè)計是根據(jù)已發(fā)表的CMV的直接早期蛋白基因的啟動子區(qū)和開始的4個外顯子序列、晚期抗原gp64基因以及磷酸化蛋白pp71基因序列。常用的引物和探針列在表3中。 （四）PCR擴增步驟 1．10×反應(yīng)緩沖液：100mmol/L Tris-HCl、pH8.4，500mmol/L KCl，25mmol/L MgCl2，2mg/ml明膠。 Taq DNA 聚合酶：5U/?l 。 10×dNTP：4種dNTP各2.0mmol/L。 引物：100pmol/L。 2．常規(guī)PCR擴增 10×反應(yīng)混合物（50?l）反應(yīng)緩沖液 5?l 10×dNTP 5?l 模板DNA 5?l Taq DNA聚合酶 0.2?l (IU) 引物 各0.5?l 蒸餾水 3.8?l 加1～2滴礦物油。 將反應(yīng)混合物于94℃加熱5min；然后于95℃ 30s，55℃ 40s，72℃ 60s，擴增35～40循環(huán)。 表3 CMV PCR擴增所用的引物及探針 引物及 探針 序列（5′→3′） 位置 片段 大小 IE1 CCACCCGTGGTGCCAGCTCC 早期基因 159（bp） IE2 CCCGCTCCTCCTGAGCACCC IE3（探針） CTGGTGTCACCCCCAGAGTCCCCTGTACCCGCGACTATCC LA1 CCGCAACCTGGTGCCCATGG 晚期gp64 139 LA2 CGTTTGGGTTGCGCAGCGGG LA3（探針） TTCTTCTGGGACGCCAACGACATCTACCGCATCTTCGCCG IE1a AGATCGCCTGGAGACGCCAT 早期外顯子1 139 IE1b GGAATCCGCGTTCCAATGCA IE2a ATGGAGTCCTCTGCCAAGAG 早期外顯子2 72 IE2b CCGTGGCACCTTGGAGGAAG IE3a GTGACCAAGGCCACGACGTT 早期外顯子3 167 IE3b TCTGCCAGGACATCTTTCTC IE4a ACAGATTAAGGTTCGAGTGC 早期外顯子4 179 IE4b CAATACACTTCATCTCCTCG IE4c TTACCAAGAACTCAGCCTTC 早期外顯子4 158 IE4d GTGCGTGAGCACCTTGTCTC IE4e TATACCCAGACGGAAGAGAAATTCA 早期外顯子4 426 IE4f ATAAGCCATAATCTCATCAGGGGAG Pp1a TAGCGCGCATACATCCCGAGTACAT Pp71基因 316 Pp1b ATGACGTTGCTCCGTGGAAAGAGACC Pp71 3．套式（nested）PCR擴增：①反應(yīng)混合物的組成同（2），僅引物為IE2a和IE4b（包括了整個外顯子3，共721b），各100pmol。于94℃ 60s，52℃150s，72℃ 480s，擴增20循環(huán)。② 取2?l 上述擴增產(chǎn)物，各加100pmol的引物IE3a和IE3b補加其他試劑。然后，于94℃ 60s，52℃150s，72℃180s，擴增20循環(huán)。 （五）產(chǎn)物鑒定 擴增產(chǎn)物的分析可采用固相（濾膜）雜交和液相雜交試驗。 1． 固相雜交： ① 預(yù)雜交液為3×SSPE，5×Denhardt，0.5%SDS和25%甲酰胺.含有擴增產(chǎn)物的濾膜于42℃預(yù)雜交30～60min。② 加入標記探針（10cpm/?g，2ng/ml），雜交30～60min。③ 用0.2×SSPE，.01%SDS分別于室溫洗滌濾膜3次，5min/次;于60℃洗一次，10min/次;再于室溫洗一次以上，5min/次。④ 自顯影。 2． 液相雜交及電泳分析： ① 取1/10體積的擴增產(chǎn)物與0.5～1.0pmol末端記的探針混合。② 加入Z終濃度為150mmol/L NaCl，10mmol/L磷酸鈉及1mmol/L EDTA溶液，使總體積為20?l 。③ 95℃ 10min，然后于56℃ 60min。④ 離心10s加入樣品緩沖液，于8%聚丙烯酰胺凝膠中進行電泳。⑤ 電泳畢，用溴化乙錠染色，然后對X線片曝光，自顯影。 HCMV DNA分子很大，其堿基序列尚未全部搞清。雖然它的DNA的限制性內(nèi)切酶片段長度具多形性，但是對其基因組的離散性還不清楚。用單一引物對進行PCR擴增，可鑒定90%的HCMV野型分離株；而采用針對不同HCMV序列的兩套以上的引物對，則可檢測幾乎所有的病毒株。因此，可根據(jù)情況使用兩對或兩對以上的位于基因組不同區(qū)域的引物進行PCR檢測。 在HCMV模板DNA制備過程中，有時會產(chǎn)生一些小片段DNA，在PCR反應(yīng)時常導(dǎo)致一定水平的本底產(chǎn)物，從而影響對結(jié)果的判定。在這種情況下可采用套式PCR法，其基本原理就是靶DNA的擴增分為兩步：首先利用一對引物，擴增包括靶DNA在內(nèi)的長片段DNA；然后取少量的擴增產(chǎn)物，利用只針對靶DNA的引物再進行第二次擴增。通過控制每步中的擴增循環(huán)數(shù)，即可防止由小片段DNA引起的假陽性。這種方法也可避免產(chǎn)生假陰性結(jié)果。 PCR檢測HCMV標本具有很高的敏感性。從HCMV感染的組織培養(yǎng)上清可檢測到相當于幾十個病毒的DNA分子或1～5PFU病毒的DNA序列。用非放射性寡核苷酸探針進行Southern雜交分析擴增產(chǎn)物，可從尿液標本中檢測到1pgHCMV DNA序列的水平；利用該系統(tǒng)，在4×104個細胞中只有一個病毒基因組即可檢測出，較斑點印跡雜交提高2×103倍。 PCR技術(shù)對HCMV感染的檢測具有臨床應(yīng)用價值，因為體液中病毒DNA先于病毒感染的臨床癥狀或血清學證據(jù)的出現(xiàn)，可作為HCMV感染的早期指標。由于HCMV可通過胎盤內(nèi)感染、產(chǎn)道感染等途徑傳播，而且受感染的新生兒死亡率較高，因此利用PCR進行早期診斷及采取及時的ZL措施，對優(yōu)生優(yōu)育也有重要意義。利用這種方法，還可鑒定器官或組織移植手術(shù)中供體是否為HCMV與許多嚴重病癥的關(guān)系。再者，PCR檢測指標穩(wěn)定，還可進行半定量分析，因此可作為評價各種抗病物LX的手段。 [ZL] 如果在妊娠早期發(fā)現(xiàn)有原發(fā)巨細胞病毒感染時，應(yīng)盡快終止妊娠。妊娠中、晚期感染者應(yīng)進一步檢查胎兒有無畸形而采取相應(yīng)的ZL措施。對于有臨床癥狀或者是先天巨細胞病毒病者可用抗病物ZL。如阿糖胞苷、磺苷、干擾素等，但LX尚待進一步觀察。 巨細胞病毒感染的ZL，可應(yīng)用各種抗病毒制劑如GCV、抗巨細胞病毒的免疫球蛋白制劑、干擾素及轉(zhuǎn)移因子等。但這些藥物并不能解決根本問題，往往停藥后病毒又潛伏地回升，鑒于此種病毒可能作為艾滋病的病因之一，各國學者均在致力于控制其感染的研究。Z近，美國學者研制出兩種活疫苗，初試后頗見效。一種是由AD169菌株研制成的；另一種是從TOWn菌株制成的，經(jīng)非腸道給藥后，已明顯表現(xiàn)出有抗巨細胞病毒的效能，CMV抗體升高，導(dǎo)致免疫功能增強。 [預(yù)防] 巨細胞病毒對人類的危害性很大，所以我們應(yīng)積極預(yù)防其發(fā)生。 (1)進行有意識的身體素質(zhì)的鍛煉。提高機體免疫機能及抗病能力，特別是育齡期婦女，以減少巨細胞病毒對胎兒的嚴重危害。 (2)對于孕婦或有慢性消耗性疾病、免疫力低下等患者要注意保護，使她們遠離傳染源。 (3)注意環(huán)境衛(wèi)生、飲食衛(wèi)生。 (4)乳汁中巨細胞病毒陽性者，不應(yīng)哺乳。 (5)免疫FZ。尚在研究和探索中。 臨床癥狀變化很大，可隨年齡、病人機體狀況、感染途徑不同而異。 待續(xù)…… 目前對CMV感染尚無療法。 由于巨細胞病毒的先天性感染和致癌作用，一些學者考慮用疫苗以阻斷CMV感染。由于受技術(shù)的限制，還無法培養(yǎng)出經(jīng)濟實用的、可做死疫苗的高價效CMV，目前應(yīng)用的是命名為Towne的減毒活疫苗。 參考資料： 你知道巨細胞病毒感染是致畸的潛伏元兇嗎? 人巨細胞病毒是一種雙鏈DNA病毒，是Z大的動物病毒之一。人是人巨細胞病毒唯yi可感染的對象。同其他病毒相比，由于人巨細胞病毒的毒力較弱，侵入機體后一般不會使器官和組織受到嚴重損傷，但是該病毒基因整合在受精卵細胞的相關(guān)基因后，則可阻止或影響后者的復(fù)制和表達，Z后導(dǎo)致不可逆的形態(tài)和結(jié)構(gòu)的異常。巨細胞病毒主要在早孕3個月內(nèi)感染致胎兒畸形，腦是巨細胞病毒Z易侵襲的器官，胎兒腦組織中的神經(jīng)元細胞、神經(jīng)膠質(zhì)細胞均可受侵犯。顱內(nèi)鈣鹽沉著、腦軟化、腦積水是人巨細胞病毒感染Z常見的臨床表現(xiàn)，其后遺癥也以神經(jīng)系統(tǒng)Z為嚴重。Z常見的是智力低下，其他如粗大運動異常，精神運動異常，感覺神經(jīng)性耳聾，脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎等。雖然在聽力和神經(jīng)方面明顯存在著高風險，甚至可能有后遺癥，只有5%的被感染嬰兒會在新生兒期就表現(xiàn)巨細胞病毒感染征象。而90%的先天性感染的胎兒出生時無任何臨床癥狀。因此，加強監(jiān)測，盡早診斷是預(yù)防巨細胞病毒感染致畸的重要措施。懷孕時初次感染巨細胞病毒的孕婦，其胎兒的感染率是30%，而被感染的孕婦在分娩時有40%可傳染給胎兒。妊娠期，巨細胞病毒感染至今尚無特殊療法，所以關(guān)鍵在預(yù)防。對早孕婦女，不僅可監(jiān)測其抗體，還可用特殊方法監(jiān)測其抗原，如果發(fā)現(xiàn)孕婦體內(nèi)有巨細胞病毒活躍復(fù)制，應(yīng)采取果斷措施，終止妊娠，以避免畸形兒出生。此外，要提高人們的文化素質(zhì)，講究衛(wèi)生，杜絕病毒感染的各種機會，并注意保持和增強人體免疫功能，這樣就有可能防止或減少育齡婦女巨細胞病毒感染。 巨細胞包涵體病對小兒智力有影響嗎? 巨細胞包涵體病是由于巨細胞病毒感染后，引起的全身多個器官損害并出現(xiàn)臨床癥狀的疾病。若在出生時就有臨床癥狀，則為宮內(nèi)感染(先天感染)，出生后數(shù)天或數(shù)周發(fā)病多為出生后感染。巨細胞病毒感染很廣泛，是先天病毒感染的重要病原之一。巨細胞病毒感染可引起胎兒腦組織廣泛損傷，是小兒智力低下的Z主要原因。 巨細胞病毒感染較廣泛，大多數(shù)人一生中不同時期均可獲得感染。居住擁擠、經(jīng)濟條件差、衛(wèi)生條件差的人易感染。女性較同齡男性感染率高。晚期孕婦宮頸排出巨細胞病毒者達28% ，是先天性巨細胞病毒感染的重要原因。母乳排毒者約13%～27%，且排毒時間長，易引起后天感染。 巨細胞病毒感染后，臨床表現(xiàn)有多種類型。如為先天感染，出生后即有低體重，呼吸不規(guī)則，黃疸重，肝臟、腫大，抽搐，視力受損，肌肉癱瘓，智力低下等。如為后天感染，一般癥狀較輕，多表現(xiàn)為肝炎癥狀。 因此，育齡婦女懷孕前應(yīng)做體檢，如果發(fā)現(xiàn)有巨細胞病毒感染應(yīng)抗病毒ZL，使血中巨細胞病毒抗體轉(zhuǎn)陰，子宮頸分泌物檢查巨細胞病毒為陰性方可受孕。

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