請問細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后想獲得穩(wěn)定細(xì)胞系，是先用流式細(xì)胞儀篩選后再用抗
水筆小新-
請問細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒后想獲得穩(wěn)定細(xì)胞系，是先用流式細(xì)胞儀篩選后再用抗性培養(yǎng)基篩選嗎？一般是轉(zhuǎn)染后多久開始進行篩選
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- 腎移植后B細(xì)胞監(jiān)測
晚期腎?。‥SRD）患者接受免疫抑 制劑的治 療后，能夠在體內(nèi)維持一種免疫平衡的狀態(tài)，此時的T細(xì)胞的免疫功能狀態(tài)已經(jīng)有過系統(tǒng)的研究了，但是B細(xì)胞的免疫功能狀態(tài)還未有過系統(tǒng)的研究。
盡管免疫抑制劑主要作用于T細(xì)胞，但是考慮到免疫抑制劑過量使用時會造成病毒的機會感染，表明其對B細(xì)胞仍然有一定的影響，因而本文即將介紹的一篇文章就對腎移植后服用免疫抑制劑后的患者體內(nèi)的B細(xì)胞亞群及功能狀態(tài)做了闡明。
本研究選擇了2012-2016年間接受腎移植的103名病人，入組了其中73位處于未排斥且未感染的免疫平衡狀態(tài)的病人，作者將其分成了2組，一組34人為接受移植后一年，另一組39人為移植后五年，同時還入組了35名未接受移植的腎透析ESRD病人和36名參與健康體檢的健康對照。
為詳細(xì)描繪B細(xì)胞的免疫分型及功能狀態(tài)，本文使用了8種流式抗體進行染色，抗體的詳細(xì)信息如下：
此Panel為貝克曼公司推出的Duraclone IM全套抗體組合方案中的第2種（貨號B53318）。該產(chǎn)品的優(yōu)點是粉末裝，保存的時間比液體更久；而且預(yù)混抗體也能節(jié)省實驗時間，相比于自己混勻抗體后分裝染色，樣本間的一致性會更高。產(chǎn)品質(zhì)量滿足ISO 9001認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)（ISO 9001-2008）。
所有樣本染色好后使用貝克曼庫爾特的3激光13色流式分析儀CytoFlex分析。本儀器可以輕松做到10色以上的流式分析，本文使用的8色Panel，檢測分析起來較為簡單。
文章檢測完所有樣本之后，使用的圈門策略模式圖如下圖所示。
研究發(fā)現(xiàn)，總的B細(xì)胞比例在病人體內(nèi)明顯下降，但是不同組的病人之間沒有顯著差異，說明B細(xì)胞比例的降低并不是免疫抑制劑造成的，而有可能是晚期腎病的臨床表現(xiàn)之一。
隨后對B細(xì)胞的細(xì)分亞群及功能狀態(tài)進行分析，如以下各圖所示。
可以看到，使用Duraclone IM全套抗體組合方案種的B細(xì)胞亞群試劑（貨號B53318）和Beckman CytoFlex流式儀檢測得到的流式結(jié)果圖，分群清晰明了，這對于后面結(jié)果的判斷十分重要，流式圖分群清晰才能使后續(xù)的結(jié)論更可信。
總的來說，腎移植后的病人Breg(CD38hiCD27+CD24+)、過渡型B細(xì)胞(IgM+CD38hiCD24hi)、邊緣區(qū)B細(xì)胞(IgD-CD27+)、亞型轉(zhuǎn)換記憶B細(xì)胞(IgM-IgD-CD38lowCD27+)比例降低，而非轉(zhuǎn)換記憶B細(xì)胞(IgM+IgD+CD38lowCD27+)比例升高，漿細(xì)胞(CD38hiCD27+CD24-)的比例在ESRD病人中最 高，CD38lowCD21- B細(xì)胞比例在移植后5年病人組最 高 。即主要的B細(xì)胞亞群都在病人和健康人組之間有差異，但是腎透析和腎移植組的病人之間則很少有差異。由此可以說明，腎移植組病人的這些B細(xì)胞亞群的差異，并不是由于免疫抑制劑造成的，而主要是晚期腎病的臨床表現(xiàn)。
如果讀者對于B細(xì)胞的每種細(xì)胞亞群的詳細(xì)功能有疑問，可以詳細(xì)查看2019年發(fā)表于Frontiers in Immunology上的一篇綜述【1】，詳細(xì)解釋了B細(xì)胞的亞群怎樣細(xì)分以及每種細(xì)胞亞群的功能，相信對于讀者會有一定的啟示意義。
文章來源：
Q. Zhuang, H. Li, M. Yu, et al., Profiles of B-cell subsets in immunologically stable renal allograft recipients and end-stage renal disease patients, Transplant Immunology(2018), https://doi.org/10.1016/j.trim.2019.101249
B細(xì)胞分群及功能的參考文獻：
【1】 Sanz I, Wei C, Jenks SA, Cashman KS, Tipton C, Woodruff MC, Hom J and Lee FE-H (2019) Challenges and Opportunities for Consistent Classification of Human B Cell and Plasma Cell Populations. Front. Immunol. 10:2458. doi: 10.3389/fimmu.2019.02458
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