起源：

習(xí)得性無助現(xiàn)象最 早在20世紀(jì)60年代初由Mowrer博士的一名研究生Richard L. Solomon觀察到的，當(dāng)時他在測試經(jīng)典巴甫洛夫條件作用和工具學(xué)習(xí)這兩個過程在原則上是否可以分離和獨立。他觀察到，適度延長不可控的創(chuàng)傷事件經(jīng)歷會導(dǎo)致后來意想不到的行為變化。之后，Overmier和Seligman于1968年開展了著名的實驗：起初把狗關(guān)在籠子里，只要鈴聲一響，就對它進(jìn)行電擊，狗關(guān)在籠子里逃避不了電擊，多次實驗后，鈴聲一響，還沒進(jìn)行電擊，狗就伏倒在地開始呻吟和顫抖，即使把籠門打開，狗也不會逃走了。他們得出結(jié)論：將受試動物數(shù)小時內(nèi)暴露于一個無法控制的創(chuàng)傷刺激事件中3-5分鐘，會導(dǎo)致受試動物行為應(yīng)對、聯(lián)想學(xué)習(xí)和情緒表達(dá)方面的顯著缺陷，他們將這些現(xiàn)象稱為習(xí)得性無助。

應(yīng)用：

習(xí)得性無助是常見的抑郁模型，常用于轉(zhuǎn)基因、行為干預(yù)和藥理學(xué)研究的抗抑郁的有效性驗證。

關(guān)鍵因素：

習(xí)得性無助源于厭惡刺激（如電擊）的不可控或不可避免的性質(zhì)，而不是厭惡刺激本身。為此在有些文獻(xiàn)中，會將實驗動物分為三組^[1]，分別為可回避電擊組、不可回避電擊組、非電擊組 ，實驗數(shù)據(jù)表明只有不可回避電擊組的老鼠會出現(xiàn)習(xí)得性無助的行為表現(xiàn)。根據(jù)電擊可回避的方式不同，可分為穿梭回避電擊、壓桿停止電擊等。有相關(guān)文獻(xiàn)報道，小鼠實驗中，穿梭逃避的數(shù)據(jù)更好^[2]。

常用的習(xí)得性無助模型有2種^[3]：

1. 急性習(xí)得性無助(acute learned helplessness)，通過讓動物遭受不可避免和不可預(yù)測的電擊而誘發(fā)；

2. 先天性習(xí)得性無助癥(congenital learned helplessness)，通過挑選急性習(xí)得性無助的動物品系選擇性繁育而來。

∨

以急性習(xí)得性無助模型為例，分別介紹兩篇高分文獻(xiàn)中的大小鼠實驗方案。

實驗材料：

動物若干（實驗成功率約為60%，所以需要提前計算造模動物數(shù)量）、Panlab穿梭箱系統(tǒng)（包含隔音箱、電擊發(fā)生器、檢測軟件等）

實驗流程：

整個完整的習(xí)得性無助實驗分為造模時期和檢測時期，研究表明在造模結(jié)束后的24-48h內(nèi)動物習(xí)得性無助表型顯著，72h小時后有所衰退，超過80%的無助動物在至少1周內(nèi)仍處于習(xí)得性無助狀態(tài)^[2]。

1、小鼠^[4]

造模時期：

實驗組：為期5天；將小鼠放入穿梭箱的一側(cè)（單側(cè)箱體尺寸：長20cm*寬17cm*高20cm），關(guān)閉中間隔層的門；之后給予小鼠70次無法逃避的足底電擊，電擊強度為0.5mA；電擊持續(xù)時間為3s，電擊的間隔時間（ITIs）為15s（或隨機間隔5-15s）；

對照組：來自于實驗組的同籠小鼠，將小鼠放入穿梭箱的一側(cè)，關(guān)閉中間隔層的門，與實驗組同等時間處理（與實驗組平行進(jìn)行）。

檢測時期：

將造模后的小鼠放入隔層門打開的穿梭箱中，讓其在穿梭箱兩側(cè)自由探索3分鐘，然后關(guān)閉隔層的門。此階段包括30次電擊測試，每個電擊間隔30秒。每次電擊試驗開始前，隔層的門都會升起來，緊接著給予強度0.5mA、持續(xù)時間為15s的電擊，當(dāng)動物穿梭至另一側(cè)時，則電擊終止。檢測動物從電擊的一側(cè)穿梭至無電擊的另一側(cè)所需的潛伏期（若動物未穿梭，則記錄為逃避失敗，且以15秒作為逃避潛伏期）。造模成功的動物，逃避失敗率顯著提高，且平均逃避潛伏期顯著增長。

2、大鼠^[3]

造模時期：

實驗組：為期5天；將大鼠放入穿梭箱的一側(cè)（單側(cè)箱體尺寸：長30cm*寬25cm*高30cm），關(guān)閉中間隔層的門；40分鐘內(nèi)給予120次不可控?zé)o法逃避的足底電擊，電擊強度為0.8mA；每次電擊的持續(xù)時間隨機在5s-15s不等，且電擊的間隔時間（ITIs）也不可預(yù)測；

對照組：來自于實驗組的同籠大鼠，將大鼠放入穿梭箱的一側(cè)，關(guān)閉中間隔層的門，放置40分鐘（與實驗組平行進(jìn)行）。

檢測時期：

將造模后的大鼠放入穿梭箱內(nèi)，打開中間隔層的門，允許動物在穿梭箱中探索5分鐘；隨后給予30次足底電擊（電擊強度為1.2mA，持續(xù)時間為10秒，隨機ITIs為24±12秒）進(jìn)行習(xí)得性無助行為評估，每次電擊開始時穿梭箱的門將自動升起，如果動物完全穿越到籠子的另一邊，足底電擊終止。評估標(biāo)準(zhǔn)：如果動物在10秒的電擊中沒有逃避，則記錄為逃避失??；如果動物在10秒的電擊時間內(nèi)穿到箱子另一側(cè)，則測量平均逃避潛伏期。造模成功的動物，逃避失敗率顯著提高，且平均逃避潛伏期顯著增長。

【參考文獻(xiàn)】

1. H Anisman et al. Rodent models of depression: learned helplessness induced in mice. Current protocols in neuroscience.doi: 10.1002/0471142301.ns0810cs14(2001)

2. Chourbaji, S. et al. Learned helplessness: Validity and reliability of depressive-like states in mice. Brain Research Protocols 16, 70-78, doi 10.1016/j.brainresprot.2005.09.002 (2005).

3. Li, B. et al. Synaptic potentiation onto habenula neurons in the learned helplessness model of depression. Nature 470, 535-539, doi:10.1038/nature09742 (2011).

4. Brachman, R. A. et al. Ketamine as a Prophylactic Against Stress-Induced Depressive-like Behavior. Biol Psychiatry 79, 776-786, doi:10.1016/j.biopsych.2015.04.022 (2016).

一、光纖記錄工作原理

人類的大腦擁有約900億個神經(jīng)元，神經(jīng)元之間通過突觸相互連接形成了復(fù)雜的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)，并由此產(chǎn)生各種復(fù)雜的功能。大腦能夠合成和釋放上百種神經(jīng)遞質(zhì)，神經(jīng)信號通過突觸釋放的神經(jīng)遞質(zhì)從而在神經(jīng)元之間進(jìn)行傳遞（圖1）。

圖1

當(dāng)神經(jīng)興奮傳導(dǎo)到突觸末端時，會刺激突觸上鈣離子通道打開促使鈣離子大量內(nèi)流，胞內(nèi)鈣離子濃度瞬時上升，驅(qū)動突觸小泡將神經(jīng)遞質(zhì)釋放到突觸間隙中，釋放出的神經(jīng)遞質(zhì)隨即與突觸后膜上的受體結(jié)合，將遞質(zhì)信號傳遞給下一個神經(jīng)元，從而進(jìn)行信息的逐級傳遞（圖2）。這些神經(jīng)元以復(fù)雜的通路投射到多個腦區(qū)，產(chǎn)生了學(xué)習(xí)認(rèn)知、情感、控制、動機、獎勵等豐富的功能。光纖記錄系統(tǒng)則可以通過檢測鈣離子和神經(jīng)遞質(zhì)的熒光變化程度來表征群體神經(jīng)元的活動情況。

圖2

那么光纖記錄是如何檢測神經(jīng)活動的呢？

以鈣離子熒光信號檢測為例，光纖記錄系統(tǒng)的技術(shù)原理是借助鈣離子濃度變化與神經(jīng)元活動之間的嚴(yán)格對應(yīng)關(guān)系，利用特殊的熒光染料或者蛋白質(zhì)熒光探針，將神經(jīng)元中鈣離子的濃度通過熒光強度表現(xiàn)出來，并被光纖記錄系統(tǒng)捕捉，從而達(dá)到檢測神經(jīng)元活動的目的。

在神經(jīng)系統(tǒng)中，靜息狀態(tài)時神經(jīng)元胞內(nèi)鈣離子濃度為50-100nM，而在神經(jīng)元興奮時胞內(nèi)鈣離子濃度能上升10-100倍，因此我們可以通過注射鈣離子基因編碼指示劑（Calcium indicator，如GCaMPs、RCaMPs等）來標(biāo)記鈣離子。鈣離子指示劑帶有熒光蛋白（如GFP、RFP等）及其變異體的蛋白質(zhì)，可與鈣調(diào)蛋白（CaM）和肌球蛋白輕鏈激酶M13域結(jié)合（圖3左）。當(dāng)神經(jīng)活動增強時鈣離子通道打開，大量鈣離子內(nèi)流并與CaM結(jié)合，導(dǎo)致M13和CaM結(jié)構(gòu)域相互作用，引發(fā)cpEGFP結(jié)構(gòu)重排，從而增強綠色熒光信號（圖3 右）。

因此我們可以通過檢測鈣信號的變化來表征神經(jīng)元的活動，進(jìn)而研究神經(jīng)元活動與動物行為的相關(guān)性，探究復(fù)雜行為背后的調(diào)控機制。

圖3

(Marisela Morales, et al. Neuron, 2020)

圖4：VTA-VGluT2神經(jīng)元編碼先天逃避反應(yīng)

光纖記錄檢測神經(jīng)遞質(zhì)信號的原理與上述方法相同，把cpEGFP嵌入特定的神經(jīng)遞質(zhì)受體，受體與神經(jīng)遞質(zhì)結(jié)合后會引發(fā)受體構(gòu)象改變并發(fā)出熒光信號（圖5）。通過病毒注射、轉(zhuǎn)染等技術(shù)手段，可以將這種可遺傳編碼的探針表達(dá)在細(xì)胞或小鼠腦部，借助成像技術(shù)，觀察神經(jīng)遞質(zhì)濃度的實時變化。

圖5

(Yulong Li, et al. Cell, 2018)

圖6：條件反射實驗中伏隔核Nac腦區(qū)的DA釋放

二、光纖記錄實驗方法

在光纖記錄實驗中，首先要選擇合適的熒光病毒。熒光染料或指示劑是通過病毒載體轉(zhuǎn)入目標(biāo)腦區(qū)，常用載體為AAV病毒。根據(jù)實驗的不同，需要選擇特異啟動子或者Cre-FloxP系統(tǒng)來特異標(biāo)記目標(biāo)神經(jīng)元，無特異性的GCaMPs表達(dá)雖然可以觀測群體神經(jīng)元活動但無神經(jīng)元特異性，光纖記錄的作用在于觀測特異類型神經(jīng)元群體的活動。

實驗流程：

1、在目標(biāo)腦區(qū)注射鈣熒光病毒，并在注射位點埋植光纖插針，用于收集熒光；

圖7：病毒注射與陶瓷插針埋植

2、待2-3周鈣熒光病毒表達(dá)后，連接光纖，使用光纖記錄系統(tǒng)采集動物在行為學(xué)實驗中大腦的鈣熒光信號；

圖8：病毒表達(dá)

3、通過分析軟件處理鈣熒光信號數(shù)據(jù)，并結(jié)合行為學(xué)視頻對動物的行為進(jìn)行分析。

圖9：光纖記錄結(jié)合高架十字迷宮實驗

三、光纖記錄數(shù)據(jù)分析

以瑞沃德R820三色光纖記錄系統(tǒng)記錄的數(shù)據(jù)為例。

1、數(shù)據(jù)預(yù)處理。R820三色光纖記錄系統(tǒng)軟件集信號采集與數(shù)據(jù)分析于一體，在數(shù)據(jù)分析中，數(shù)據(jù)預(yù)處理過程包含平滑處理，基線矯正，運動矯正等功能。

平滑處理可以將數(shù)據(jù)中的過多雜信號去除，最大限度的突出目標(biāo)peak?；€矯正多數(shù)針對的是熒光信號因長時間記錄導(dǎo)致漂白信號逐步下降，或者光纖的自發(fā)熒光在長期記錄下逐步被漂白基線逐步下降等情況。此情形的數(shù)據(jù)因為整體呈現(xiàn)下降趨勢，不利于后續(xù)數(shù)據(jù)作圖分析，所以需要進(jìn)行基線矯正。運動矯正用于采用410nm對照通道的數(shù)據(jù)，410nm數(shù)據(jù)可以用于反應(yīng)背景噪音信號，運動矯正即將410nm數(shù)據(jù)與470nm數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，通過算法從470數(shù)據(jù)中去除410nm數(shù)據(jù)的波動，得到真實的熒光數(shù)據(jù)。

圖10：光纖記錄數(shù)據(jù)預(yù)處理

2. 將熒光數(shù)據(jù)與動物行為數(shù)據(jù)同步對比，選擇事件標(biāo)記或者增加事件標(biāo)記，事件相關(guān)信號分析作圖。

圖11：事件分析

3. 將不同組的數(shù)據(jù)進(jìn)行組間對比，即可分析不同處理因素下熒光數(shù)據(jù)的差異。此外，還可結(jié)合行為學(xué)視頻同步分析動物的運動軌跡。

圖12：不同數(shù)據(jù)組間分析

通過以上步驟，原始的熒光數(shù)據(jù)就可以直接出圖啦。

光纖記錄實驗的工作原理，實驗方法以及數(shù)據(jù)分析已經(jīng)全部講完啦….

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讓實驗信號更強更準(zhǔn)

礦產(chǎn)資源是指在地下或地表的可以被開發(fā)利用的具有經(jīng)濟價值的礦物資源。礦石中有用成分(元素或礦物)的單位含量稱為礦石品位。礦石品位常用來衡量礦石的價值。從經(jīng)過礦山中采下來含有某種有價值的礦物質(zhì)的石塊，礦石經(jīng)過破碎、粉磨等逐級加工后，被應(yīng)用在金屬礦山、冶金工業(yè)、化學(xué)工業(yè)、建筑工業(yè)、鐵(公)路施工單位、水泥工業(yè)及砂石行業(yè)等工程領(lǐng)域中。礦產(chǎn)資源按性質(zhì)和用途分為以下幾類：

一、金屬礦石

從中可以提取金屬原料的有用礦物資源，按照其工業(yè)用途又可以分為：

黑色金屬礦產(chǎn)：如鐵、錳、鉻、釩、鈦、鎳、鈷、鎢、鉬等;

有色金屬礦產(chǎn)：如銅、鉛、鋅、錫、鉍、銻、汞、鋁、鎂等;

貴金屬礦產(chǎn)：如金、銀、鉑、鈀、鋨、銥、釕、銠等;

稀有金屬礦產(chǎn)：如鈮、鉭、鈹、鋰、鋯、銫、銣、鍶等;

稀土金屬礦產(chǎn)(ΣREE)：包括原子序數(shù)57-71以及39(釔)的16個元素，根據(jù)其地球化學(xué)性質(zhì)和共生關(guān)系，分為如下兩類：

輕稀土金屬礦產(chǎn)(鈰族元素ΣCe)：如鑭、鈰、鐠、釹、钷(人造元素)、釤、銪等;

重稀土金屬礦產(chǎn)(釔族元素ΣY)：如釔、釓、鋱、鏑、鈥、鉺、銩、鐿、镥等;

分散元素礦產(chǎn)：如鍺、鎵、銦、鎘、鉿、錸、鈧、硒、碲等。

二、非金屬礦石

從中可以取得非金屬元素或直接利用的礦物或礦物集合體。工業(yè)上除少數(shù)非金屬礦產(chǎn)是用來提取非金屬元素，如硫、磷之外，大多數(shù)非金屬礦產(chǎn)是利用礦物或礦物集合體的某些物理、化學(xué)性質(zhì)和工藝特性。例如金剛石大多是利用它的硬度和光澤;云母是利用其透明度和絕緣性;水晶是利用它的光學(xué)和壓電性能等等。按照其工業(yè)用途可以分為：

冶金輔助原料：如螢石、菱鎂礦、耐火粘土、白云石和石灰?guī)r等;

化學(xué)工業(yè)原料：如磷灰石、磷塊巖、黃鐵礦、鉀鹽、巖鹽、明礬石、石灰?guī)r等;

工業(yè)制造原料：如石墨、金剛石、云母、石棉、重晶石、剛玉等;

壓電及光學(xué)原料：如壓電石英、光學(xué)石英、冰洲石和螢石等;

陶瓷及玻璃工業(yè)原料：如長石、石英砂、高嶺土和粘土等;

建筑材料及水泥材料：如砂石、礫石、浮石、白堊、石膏、花崗巖、珍珠巖、松脂巖、大理巖等。

 三、寶玉石材料

如金剛石、紅寶石、藍(lán)寶石、翡翠、硬玉、水晶、蛇紋石、葉蠟石、綠松石、瑪瑙等。

 四、可燃性有機巖礦產(chǎn) 

指能夠為工業(yè)和民用提供有機能源的地下資源，它們既是最主要的燃料，也是重要的化工原料。從化學(xué)成分的角度看它們主要由碳?xì)浠衔锝M成，應(yīng)該屬于非金屬礦產(chǎn)，但其形成條件和用途都與上述非金屬礦產(chǎn)明顯不同，因此可以單獨列為一大類。按照它們的物理狀態(tài)又可以分為三類：

固體可燃性有機巖礦產(chǎn)：如煤、泥炭、石煤、油頁巖、地蠟、地瀝青等;

氣體可燃性有機巖礦產(chǎn)：如天然氣等;

液體可燃性有機巖礦產(chǎn)：如石油等。

LCR數(shù)字電橋是用來測量電感、電容、電阻參量的儀器，通常包含Z，Y，θ，Rs，Rp，X，G，B，Ls，Lp，Cs，Cp，Q，D等測量項目，為什么要測量阻抗呢？今天安泰測試就給大家科普一下LCR數(shù)字電橋：

什么是阻抗？

在具有電阻、電感和電容的電路里，對電路中的電流所起的阻礙作用叫做阻抗。不管是數(shù)字電路工程師還是射頻工程師，都在關(guān)注各類器件的阻抗，比如在音響器材中，阻抗是常常提及的重要參數(shù)。

阻抗常用Z表示，是一個復(fù)數(shù)，實部稱為電阻，虛部稱為電抗，其中電容在電路中對交流電所起的阻礙作用稱為容抗 ，電感在電路中對交流電所起的阻礙作用稱為感抗，電容和電感在電路中對交流電引起的阻礙作用總稱為電抗。

電阻，電容，電感的阻抗計算公式：

XR=R；

XL= wL =2πfL；

XC==1/（wC）= 1/（2πfC）；

LCR數(shù)字電橋原理

初期的阻抗測量用的是電橋方法，如圖，隨著現(xiàn)代模擬和數(shù)字技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)代阻抗測量大都使用自動平衡電橋法，不僅測出阻抗，還可以直接顯示L-Q,C-D,R-D和Z-Q電感電容值參數(shù)等。

選型方法

LCR數(shù)字電橋根據(jù)被測器件需要的頻率、電平進(jìn)行主機選型；

LCR數(shù)字電橋根據(jù)被測器件封裝進(jìn)行夾具選型；

LCR數(shù)字電橋根據(jù)被測器件是否需要直流偏置，選配偏壓盒、偏流盒； 

測試技巧

1、什么時候加偏壓盒？

當(dāng)需要測試帶有直流偏置的元器件時，比如二極管的導(dǎo)通電容，需要加偏壓測試；類似的，在需要加直流電流偏置時，可以選用偏流盒；

2、品質(zhì)因子Q和損耗因子 D的電學(xué)含義：

電感器的品質(zhì)因子Q是表明器件接近純電抗的程度，品質(zhì)因子越大，說明電抗的值越大，實部串聯(lián)電阻越小，能量損耗小。

對于電容器來說，表示純度的這一項通常用耗散因素(D)，D=1/Q；因此D越小，電容容抗越大，效能越好。

3、LCR表的內(nèi)阻30、50、100Ω如何選擇？

為了降低鐵心材料的非線形，測電感一般用大內(nèi)阻100歐姆，降低測試信號電平；為了與其他家型號的測試儀進(jìn)行數(shù)據(jù)對比，必須保證與其有相同的信號源內(nèi)阻模式。其他阻抗為可提供的選擇，與廠家規(guī)定的內(nèi)阻測試條件一致即可。

30 Ω可類比于：CH107X/GR1689

100 Ω 可類比于：HP4284A/E4980A/Chroma3250

10 Ω/CC可類比于：CH106X/WK3245

50 Ω可類比于：HK3532

另外，10/100內(nèi)阻模式：當(dāng)用戶需要用 100kHz 測量 1uF~10uF 的CBB的損耗時，可以使用這種內(nèi)阻模式，可以提高測量結(jié)果特別是損耗因子的穩(wěn)定性。

4、 為什么說LCR 電橋很難測高Q和低D器件，比如MLCC片式多層陶瓷電容器？

LCR電橋 Q值和 D值測量是依據(jù)如下圖原理公式計算得來：

假定 Q = 10，0 則 ESR 為 1/100 的 XL?？梢?，ESR 在 Z = ESR + j*X中L 占的分量比較小，所以儀器或測量環(huán)境引起 ESR 微弱的變化都會被放大 100 倍，反應(yīng)出的現(xiàn)象就是：Q 值穩(wěn)定性不好或測量數(shù)據(jù)跳動較大。同樣的道理也適用于電容 D 的測量。

用戶能做的就是盡量選擇好一點的測試夾具改善效果，原則：能用 0m 的不要用 1m 的，能用 4 端測量不要用 2 端測量。

本文由安泰測試整理發(fā)布，歡迎各位關(guān)注微信公眾號“安泰測試”留言探討，更多儀器知識歡迎訪問安泰測試網(wǎng)。

得益于多孔塑料和精密注塑兩大技術(shù)平臺的應(yīng)用，逗點生物多孔過濾板一經(jīng)推出就得到各方好評，目前已廣泛應(yīng)用于蛋白純化、樣品制備、質(zhì)譜分析等多種樣品前處理。

這些過濾板專為高通量應(yīng)用而設(shè)計，不同孔徑的高純度UHMW-PE篩板可滿足復(fù)雜樣本的過濾需求，且與多種自動化液體處理設(shè)備兼容，是固液相過濾分離的品質(zhì)之選。

產(chǎn)品特性

微米以上級別過濾

滿足各類復(fù)雜樣本過濾需求，過濾性能優(yōu)越

符合ANSI/SBS標(biāo)準(zhǔn)

由高純度、具有生物惰性的聚丙烯注塑而成，產(chǎn)品尺寸符合標(biāo)準(zhǔn)

便于自動化操作

提供互補適配的收集板，可配合正負(fù)壓及離心機使用

高精度自動化生產(chǎn)

穩(wěn)定可靠，交付快速，大大提高樣品通量及反應(yīng)的平行處理效率

如何選擇

逗點生物過濾板家族規(guī)格多、品類全、交期短，提供不同體積、孔徑及裙板形狀等配置，可根據(jù)您的具體應(yīng)用進(jìn)行適配。

菌液過濾板

【產(chǎn)品亮點】專用于過濾菌液粘稠樣本

【推薦產(chǎn)品】

004905-1：96孔過濾板、1.0mL/孔

004905-4：96孔過濾板、1.5mL/孔

微孔過濾板

【產(chǎn)品亮點】各個微孔單獨封裝濾膜配合可取下的導(dǎo)流板和收集板，實現(xiàn)無縫整合

【推薦產(chǎn)品】

M0096-PTFE-H-45：96孔微孔過濾板、50-250μL、親水性PTFE、0.45μm

M0096-PTFE-22：96孔微孔過濾板、50-250μL、有機系PTFE、0.22μm

多孔過濾板

【產(chǎn)品亮點】篩板精選粒徑均一的UHMW-PE原材料燒結(jié)而成不同孔徑的篩板可滿足復(fù)雜樣本的過濾需求【推薦產(chǎn)品】

004901-5：96孔過濾板、1.0mL/孔、1個5μm篩板/孔

004902-20：96孔過濾板、1.5mL/孔、1個20μm篩板/孔

泡沫特性測定儀與潤滑油抗泡性的評定

    抗泡性潤滑油在運轉(zhuǎn)過程中，由于有空氣存在，常會產(chǎn)生泡沫，尤其是當(dāng)油品中含有具有表面活性的添加劑時，則更容易產(chǎn)生泡沫，而且泡沫還不易消失。潤滑油使用中產(chǎn)生泡沫會使油膜破壞，使摩擦面發(fā)生燒結(jié)或增加磨損，并促進(jìn)潤滑油氧化變質(zhì)，還會使?jié)櫥到y(tǒng)氣阻，影響潤滑油循環(huán)。

潤滑油抗泡性的評定方法：

　　潤滑油的抗泡性是以油品生成泡沫的傾向及泡沫的穩(wěn)定性來評定。評定方法為潤滑油泡沫性質(zhì)測定法：在1000ml的長筒中注人試油約200mL,以94±5ml/min的流量將空氣通入油中，經(jīng)5min后記下量簡中泡沫的體積，即為起泡傾向(FT),筒靜置10min后再次記下泡沫體積，即泡沫穩(wěn)定性(FS)。試驗油溫為24℃及93℃兩點?？古菪院玫臐櫥推鹋輧A向要小，泡沫穩(wěn)定性要低。

　　試驗的油溫也可以根據(jù)需要而定，結(jié)果也可用記錄油高加泡沫高(cm)，或油的高度及消泡時間(s)，并計算成發(fā)泡系數(shù)(泡高/油高)來表示。潤滑油的泡沫高度小，發(fā)泡系數(shù)小，消泡時間短，抗泡沫性能就好。

1、什么是PCR

PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction）的簡稱，其是一種用于放大擴增特定的DNA（或RNA）片段的分子生物學(xué)技術(shù)。這種技術(shù)模擬體內(nèi)DNA的天然復(fù)制過程，能將微量的DNA進(jìn)行特異性的擴增，在短時間內(nèi)獲得足夠的DNA，是分子生物學(xué)研究中不可缺少的一員。

2、標(biāo)準(zhǔn)PCR的過程

此項技術(shù)是模擬DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物，在整個PCR過程中包含了變性——退火（復(fù)性）——延伸三個基本反應(yīng)步驟。

• DNA變性（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。

• 退火（復(fù)性）（40℃-65℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部雙鏈。

• 延伸（68℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右最佳的活性）的作用下，以dNTP為原料，從引物的5′端→3′ 端延伸，合成與模板互補的DNA鏈。

每一循環(huán)經(jīng)過變性、退火和延伸，DNA含量既增加一倍。

3、為什么要使用梯度PCR儀呢

梯度PCR儀是指一次性PCR擴增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件的儀器，因為不同的DNA片段其最適退火溫度不同，采用梯度PCR儀通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴增，從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達(dá)量高的最適退火溫度，優(yōu)化反應(yīng)條件，進(jìn)行有效的擴增。

在理想狀態(tài)下，退火溫度足夠低，以保證引物同目的序列有效退火，同時還要足夠高，以減少非特異性結(jié)合。

使用普通的PCR儀進(jìn)行擴增時，只能運行一個特定的退火溫度，當(dāng)目的基因的退火溫度不適時，就可能出現(xiàn)假陽性，影響實驗結(jié)果。而對于梯度PCR儀，不但可以作為普通PCR儀使用，也可以通過設(shè)置不同的溫度梯度（通常為12個梯度溫度），研究未知DNA退火溫度的擴增，有效降低或避免假陽性，同時在不理想的工作條件下擴增出產(chǎn)物，既節(jié)約成本也提高了實驗效率。

適用于分子生物學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、食品科學(xué)和農(nóng)學(xué)等領(lǐng)域，進(jìn)行分子克隆、基因表達(dá)分析、基因型鑒定、測序、病原微生物分析等實驗研究。

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工業(yè)顯微鏡怎么分類?有幾個種類?每種顯微鏡的優(yōu)缺點是什么?用在哪些領(lǐng)域?怎么選?面對市場上琳瑯滿目的顯微鏡，一堆的問號盤旋在腦海。下面讓行業(yè)內(nèi)的老司機奧林巴斯給大家說說關(guān)于顯微鏡的知識，希望在選擇工業(yè)顯微鏡時有所幫助。

顯微鏡的分類有很多種方式，按照使用目鏡的數(shù)目可分為單目、雙目、三目顯微鏡;根據(jù)其用途以及應(yīng)用范圍可分為生物顯微鏡、金相顯微鏡、體視顯微鏡等，按照光學(xué)原理可分為偏光、相差和微差干涉對比顯微鏡等。而奧林巴斯工業(yè)顯微鏡分類很細(xì)致，根據(jù)不同用途和目的將其分成了7類，分別是激光共焦顯微鏡、數(shù)碼顯微鏡、測量顯微鏡、清潔度顯微鏡、金相顯微鏡、半導(dǎo)體與平板顯示顯微鏡、體視顯微鏡，每一種的特點和應(yīng)用也有所不用。

激光共焦顯微鏡

奧林巴斯激光共焦顯微鏡采用的是高級光學(xué)系統(tǒng)，可通過非破壞觀察法生成高畫質(zhì)圖像并進(jìn)行精確的3D測量，用來觀察樣品表面亞微米程度的三維形態(tài)和形貌，又可以測量多種微小的尺寸，諸如體積、晶粒、膜厚、線粗糙度、面粗糙度等。

數(shù)碼顯微鏡

奧林巴斯數(shù)碼顯微鏡，可從宏觀到微觀的多種應(yīng)對方案，僅需此套系統(tǒng)即可同時應(yīng)對初步檢驗和微米級分析，廣泛應(yīng)用在汽車、電子器件、集成電路、金屬制品、化學(xué)材料、玻璃陶瓷等方面。

測量顯微鏡

多功能性、高可靠性、超高精度和耐用性是奧林巴斯測量顯微鏡的優(yōu)點，對亞微米級精度的零部件、電子元件等進(jìn)行高性能的測量。

清潔度顯微鏡

此顯微鏡專為需要保持高要求清潔度標(biāo)準(zhǔn)的生產(chǎn)制造商而研發(fā)的整體解決方案，可依照企業(yè)和國際標(biāo)準(zhǔn)對技術(shù)清潔度檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行快速采集、處理和存檔，主要應(yīng)用在航空航天、汽車行業(yè)。

金相顯微鏡

金相顯微鏡主要用來鑒定和分析金屬內(nèi)部結(jié)構(gòu)組織，是金屬學(xué)研究金相的重要儀器，是工業(yè)部分鑒定產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵設(shè)備，專門用于觀察金屬和礦物等不透明物體金相組織的顯微鏡，還廣泛應(yīng)用于電子、化工和儀器儀表行業(yè)觀察不透明的物質(zhì)和透明的污漬。

半導(dǎo)體顯微鏡

奧林巴斯半導(dǎo)體顯微鏡擁有快速入門、簡易操作、圖像清晰等優(yōu)點，而且采用靈活的模塊設(shè)計，定制化的系統(tǒng)更能適應(yīng)各類有難度的檢測，對晶圓、平板顯示器、印刷電路板、以及其他大型樣本也可進(jìn)行高品質(zhì)的觀察。

體視顯微鏡

體視顯微鏡又稱為立體顯微鏡，是一種具有正像立體感的目視儀器，廣泛應(yīng)用于紡織制品、考古研究、地質(zhì)勘探、機械制造等眾多領(lǐng)域。它具有兩個完整的光路，所以觀察時物體呈現(xiàn)立體感。

奧林巴斯工業(yè)顯微鏡的分類很全面，配置也很優(yōu)秀，你所需要在這都能找到。然而在整個顯微鏡的解決方案中，我們除了知道工業(yè)顯微鏡怎么分類之外，還需要了解顯微鏡的配套裝置，比如數(shù)碼顯微照相裝置、圖像分析軟件、精品反射率測定儀、物鏡、用于整合的顯微鏡部件等。

如果說無損檢測是設(shè)備的眼睛，那么顯微鏡就是無損檢測眼珠子，重要性不言而喻，好的顯微鏡可以提高檢測的效率。而作為檢測人員，對于工業(yè)顯微鏡怎么分類，有哪些特點，應(yīng)用在什么行業(yè)，你得做到心中有數(shù)，這樣更能對樣品進(jìn)行有效且準(zhǔn)確的檢測。

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最近一段時間，隨著疾病診療的精 準(zhǔn)化，各個版本新冠診療指南的出爐，淋巴細(xì)胞亞群、精細(xì)亞群和細(xì)胞因子等與免疫力監(jiān)控高度相關(guān)的指標(biāo)受到了高度關(guān)注。

在眾多的免疫指標(biāo)中，選擇哪些監(jiān)測指標(biāo)，如何建立自建方案并驗證，如何建立與疾病診療相關(guān)指標(biāo)的Cutoff值，這些都是當(dāng)下流式工作者們開展更多免疫指標(biāo)時會遇到的一些難題。下面這篇文章對上面提到的幾個問題做了詳細(xì)的解答。

01.背景介紹

免疫檢查點抑 制劑治 療，特別是聯(lián)合PD-1/CTLA-4 阻斷，顯著提高了轉(zhuǎn)移性黑色素瘤患者的治 療率和總生存率 。但同時，與免疫相關(guān)的不良反應(yīng)，如肝炎和結(jié)腸炎，是免疫抑 制劑治 療過程中常見的并發(fā)癥，其嚴(yán)重的時候可以危及到生命 。在接受PD-1和CTLA-4的一些晚期黑色素瘤患者中，巨細(xì)胞病毒 (CMV)引起的特異性記憶 T 細(xì)胞反應(yīng)會導(dǎo)致肝損傷，而有研究表明治 療前血液中 CD4+ 效應(yīng)記憶 T 細(xì)胞 (TEM) 的擴增能夠可靠地預(yù)測肝炎；所以如果有一種方案可以監(jiān)測效應(yīng)記憶T細(xì)胞，從而預(yù)測不良反應(yīng)的發(fā)生，其將具有很好的臨床意義。

本文章作者開發(fā)并驗證了一個10色流式細(xì)胞方案，用于可靠地量化外周血樣本中的 CD4+ TEM細(xì)胞和其他 irAE 風(fēng)險的生物標(biāo)志物。與以前的方案相比，文章作者的新方案在測量CD4+ TEM細(xì)胞方面表現(xiàn)出色，并且在從CD4+ CD197+ CD45RA+ 幼稚T細(xì)胞（Na?ve T）分辨CD4+ CD197+ CD45RA- 中 央記憶T細(xì)胞 (TCM) 方面表現(xiàn)出色。它還能夠精確量化 CD14+單核細(xì)胞。

02.實驗方案

CD4+ TEM細(xì)胞的標(biāo)記為CD45+ CD3+ CD4+ CD8- CD45RA- CD197- 。單核細(xì)胞的相同標(biāo)記為 CD45+CD14+，同時加上將 CD16，以對經(jīng)典、中間和非經(jīng)典單核細(xì)胞進(jìn)行更精細(xì)的分類。有研究表明將 CD8+ T 細(xì)胞中的 CD279 (PD-1) 表達(dá)確定為黑色素瘤患者接受 PD-1/CTLA-4 治 療后臨床反應(yīng)的標(biāo)志物 ，因此加上 CD45+ CD3+ CD4- CD8+ CD279+ 。為了提高細(xì)胞類型定義的準(zhǔn)確性，方案中還包括了一個譜系排除 (Lin) 通道（CD19、CD20、CD56 和 CD66b）來排除B 細(xì)胞、NK 細(xì)胞和粒細(xì)胞。因此，新panel包括 10 個參數(shù)：CD45、Lin、CD3、CD4、CD8、CD45RA、CD197 (CCR7)、CD279 (PD-1)、CD14 和 CD16，作者將該方案命名為“monocyte and T cell”，簡稱“MoT”。

該方案用Beckman Coulter的液體試劑進(jìn)行驗證，并在驗證完成后，作者將該方案定制成干粉形式，由于干粉產(chǎn)品相比較液體試劑，不僅可室溫保存，并且保存時間更久，同時還可以減少實驗操作，樣本間一致性也更高等優(yōu)點，便于日常診斷工作并最 大限度地減少差異。

貝克曼庫爾特公司不僅可以提供Duraclone干粉成品試劑，還可以提供客戶定制CDS，可以根據(jù)客戶需求，個性化組合定制干粉方案。相比較液體方案來說，定制化的干粉組合方案，不僅有液體單抗方案的自由組合的優(yōu)點，而且還有干粉試劑的優(yōu)點。

03.方案圈門策略

該方案用貝克曼庫爾特公司的Navios 3激光10色儀器進(jìn)行數(shù)據(jù)的采集，并使用Kaluza軟件進(jìn)行分析。

3.1  對CD45+ 白細(xì)胞進(jìn)行圈門；

3.2  對CD3+ T 細(xì)胞和CD3- 細(xì)胞進(jìn)行圈門；

3.3  對CD3-內(nèi)的譜系陰性 (Lin-) 細(xì)胞進(jìn)行圈門；對CD14+ 單核細(xì)胞進(jìn)行圈門；對由 CD14 和 CD16 表達(dá)定義的單核細(xì)胞亞群進(jìn)行圈門；

3.4  對CD3+ T 細(xì)胞內(nèi)的CD4+ 和 CD8+ T細(xì)胞進(jìn)行圈門；對CD4+ 記憶T細(xì)胞亞群進(jìn)行圈門；圈門CD279+ CD8+ T細(xì)胞。

04.檢測性能驗證

文章作者將此方案與貝克曼庫爾特公司的DURAClone IM T 細(xì)胞亞群管 和 DURAClone IM Basic管平行分析了來自 83 名患有II、III 或 IV期疾病的黑色素瘤患者的樣本，其中II 期(n = 52)、III期(n = 11) 或IV期(n = 20)。除CD14+ 單核細(xì)胞外，其他參數(shù)均觀察到方法之間的強相關(guān)性，CD14+ 單核細(xì)胞顯示出中等相關(guān)性。

DURAClone IM Basic和DURAClone IM T是貝克曼庫爾特公司的Duraclone IM全套抗體組合方案中的第1管與第3管。該產(chǎn)品的優(yōu)點是干粉，保存的時間比液體更久；而且預(yù)混抗體也能節(jié)省實驗時間，相比于自己混勻抗體后分裝染色，樣本間的一致性會更高。產(chǎn)品質(zhì)量滿足ISO 9001認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)（ISO 9001-2008）。

文章作者之前確立了一個cutoff值≥16% CD4+ TEM 細(xì)胞作為 CMV Ig+ 患者檢查點阻斷相關(guān)肝炎的預(yù)測因子。因此在將患者分類為 CD4+ TEM ≥16% 或 CD4+ TEM <16% 時，DURAClone IM T 細(xì)胞亞群管和 MoT測試管結(jié)果在 81/83 例 (98%) 中一致。此外，E圖顯示在確定 CMV 血清學(xué)狀態(tài)，并在治 療開始后 12 周內(nèi)評估免疫相關(guān)肝炎的發(fā)展。紅色虛線表示 CD4+ TEM ≥ 16% 的cutoff值， 中值用黑線表示，MoT 方案在預(yù)測 16 名 IV 期黑色素瘤患者的肝炎方面表現(xiàn)良好。F圖顯示6 名 CMV IgG+ CD4+ TEM ≥16% 黑色素瘤患者中有 5 名正確預(yù)測了肝炎。

經(jīng)過驗證，文章作者用cutoff值≥16% CD4+ TEM 細(xì)胞作為 CMV Ig+ 患者檢查點阻斷相關(guān)肝炎的預(yù)測因子，相關(guān)的PPV=83%，NPV=80%。

另外，文章作者還從批內(nèi)精密度、批間精密度、操作者間分析精度、樣本穩(wěn)定性、樣本染色穩(wěn)定性、年齡、性別和疾病相關(guān)偏倚、季節(jié)性等方面進(jìn)行了驗證，確保該方案結(jié)果是在可接受范圍內(nèi)的，由于篇幅的關(guān)系，就不一一列出來了，感興趣的讀者可以去原文查看，其詳細(xì)的介紹了作者驗證思路與結(jié)果。