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  go小飛454 2015-10-30 00:00:00

  蠻好用的

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  aifangaini87 2016-04-25 00:00:00

  不知道你說(shuō)的是以下哪三種呢？感覺(jué)都還可以 Bicinchoninic acid (BCA )法是在世界上常用的蛋白濃度檢驗(yàn)方法之一BCA法基礎(chǔ)上改進(jìn)而成。其原理與Lowery法蛋白定量相似，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)與Cu 2+ 絡(luò)合并將Cu 2+ 還原成Cu + 。兩分子BCA與一個(gè)Cu + 螯合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562 nm處有高的光吸收值并與蛋白質(zhì)濃度成正比，據(jù)此可測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。與Lowery法相比，BCA蛋白測(cè)定方法靈敏度高，操作簡(jiǎn)單，試劑及其形成的顏色復(fù)合物穩(wěn)定性俱佳，在50-200μg/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，并且受干擾物質(zhì)影響小。與Bradford法相比，BCA法的顯著優(yōu)點(diǎn)是不受去垢劑的影響。 Lowry法包括兩步反應(yīng)：diyi步是在堿性條件下，蛋白質(zhì)與銅作用生成蛋白質(zhì)-銅絡(luò)合物；第二步是此絡(luò)合物將Folin試劑還原，產(chǎn)生深藍(lán)色，顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。定量范圍為5～100μg/ml蛋白質(zhì)。Folin試劑顯色反應(yīng)由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此樣品中若含有酚類、檸檬酸和巰基化合物均有干擾作用。此外，不同蛋白質(zhì)因酪氨酸、色氨酸含量不同而使顯色強(qiáng)度稍有不同。 Bradford法是Z常用的蛋白質(zhì)快速定量方法。Coomassie brilliant blue G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合使染料的Z大吸收峰由465 nm變?yōu)?95 nm，溶液的顏色由棕色變?yōu)樘m色，595nm波長(zhǎng)下吸光度值與蛋白含量成正比。靈敏度比Lowry法高4倍，與BCA法相當(dāng)。反應(yīng)迅速，2分鐘即可達(dá)到平衡并在1小時(shí)內(nèi)保持穩(wěn)定。操作簡(jiǎn)便，只需要一種反應(yīng)試劑。干擾物質(zhì)少，鈉鉀鎂離子、Tris、葡萄糖和蔗糖、甘油、巰基乙醇、硫酸氨、EDTA等均不干擾測(cè)定。提供5×染料濃縮液可進(jìn)行200-400T標(biāo)準(zhǔn)2 ml比色杯檢測(cè)，或2500Tmicroplate檢測(cè)。

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