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- xy877516 2017-02-22 00:00:00
- 細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒貨號：C1052規(guī)格：50T保存：-20℃保存，一年有效。C1052-2碘化丙啶染色液(20×)需避光保存。本試劑盒可4℃保存，一個月內(nèi)有效。產(chǎn)品說明：細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一種采用經(jīng)典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即PI staining)方法進行細胞周期與細胞凋亡分析的檢測試劑盒。 碘化丙啶(Propidium，簡稱PI)是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內(nèi)的DNA被碘化丙啶染色后，可以用流式細胞儀對細胞進行DNA含量測定，然后根據(jù)DNA含量的分布情況，可以進行細胞周期和細胞凋亡分析。碘化丙啶染色后，假設G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。凋亡細胞由于細胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生DNA片段化(DNA fragmentation)導致部分基因組DNA片斷在染色過程中丟失，因此凋亡細胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強度小于1，在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的sub-G1峰，即凋亡細胞峰。細胞發(fā)生凋亡時，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂，產(chǎn)生凋亡小體，使細胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細胞凋亡的早期，細胞對前向角光散射的能力顯著降低，對側向光散射的能力增加或沒有變化。在細胞凋亡的晚期，前向和側向光散射的信號均降低。因此可通過流式細胞儀測定細胞光散射的變化觀察細胞凋亡情況。本試劑盒通常應用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細胞的細胞周期與細胞凋亡檢測。如果用于組織的細胞周期與細胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細胞狀態(tài)，才可以進行檢測。本試劑盒足夠檢測50個樣品，每個樣品的細胞數(shù)量可以為10-100萬。試劑盒組成：試劑名稱 規(guī)格 染色緩沖液 25mL 碘化丙啶染色液(20×) 1.25mL RNase A (50×) 0.5 mL 使用方法：（僅供參考）1. 細胞樣品的準備：a. 對于貼壁細胞：小心收集細胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細胞，至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1毫升冰浴預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。b. 對于懸浮細胞：1000g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1毫升冰浴預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。2. 細胞固定：加入1毫升冰浴預冷70%乙醇中，輕輕吹打混勻，4℃固定2小時或更長時間。固定12-24小時可能效果更佳。1000g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的70%乙醇，以避免吸走細胞。加入約1毫升冰浴預冷的PBS，重懸細胞。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的PBS，以避免吸走細胞。輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。3. 碘化丙啶染色液的配制：參考下表，根據(jù)待檢測樣品的數(shù)量配制適量的碘化丙啶染色液：試劑名稱 1個樣品 6個樣品 12個樣品 染色緩沖液 0.5mL 3mL 6mL 碘化丙啶染色液(20×) 25μL 150μL 300μL RNase A (50×) 10μL 60μL 120μL Final volume 0.535 mL 3.21 mL 6.42 mL 注：配制好的碘化丙啶染色液短時間內(nèi)可以4℃保存，宜當日使用。4. 染色：每管細胞樣品中加入0.5毫升碘化丙啶染色液，緩慢并充分重懸細胞沉淀， 37℃避光溫浴30分鐘。隨后可以4℃或冰浴避光存放。染色完成后宜在24小時內(nèi)完成流式檢測，Z好能在當日完成流式檢測。5. 流式檢測和分析：用流式細胞儀在激發(fā)波長488nm波長處檢測紅色熒光，同時檢測光散射情況。采用適當分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。
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ELISA試劑盒說明書有什么要求用途嗎？
ELISA試劑盒檢測試劑每次試驗、每塊扳上都要設置以下3項對照和用途：
1.空白對照：僅用稀釋液代替檢測樣本、ELISA試劑盒用來觀察zui終反應的顯色“本底"、ELISA試劑盒并用于酶標儀消除、扣除“本底"，也就是說：以本底為“零"讀取陽性、陰性對照孔和樣本檢測孔的吸光值(A);或者，在計算陰性對照均值(NCx)、陽性對照均值(PCx)、樣本讀數(shù)的S/C.O.值時減去空白對照的本底吸光值。早期的酶標儀沒有自動扣除空白對照孔讀數(shù)的功能，ELISA試劑盒這種酶標儀現(xiàn)在已經(jīng)被淘汰了，寫上這段話的目的是補充說明設置空白對照的用途?？瞻卓拙唧w如何讀取讀數(shù)，應該按照說明書操作。
2.陰性對照：
(1)陰性對照的含義與要求：ELISA試劑盒所謂陰性對照，是本次檢測試驗中采用與待檢測物(樣品、人用試劑就是人的血清等)具有同源性和同質(zhì)性，又不含有待檢物質(zhì)，并且能夠客觀比較和鑒別處理因素(血清免疫學試驗中有特異性抗原與抗體反應)之間的差異。因此，用動物血清或其制品代替陰性人血清作為對照品，無論是從理論還是實踐上都是不可取的。注意：據(jù)我所知，國產(chǎn)ELISA試劑盒中，有的廠家是用動物血清制品稀釋配置或與部分人血清混合配置的;陰性對照讀數(shù)，并不是“越低越好"。NCx值接近0.00X水平，這是假象!試想一下，真正采用“陰性人血清"的陰性對照品，NCx值會如此之低嗎?例如，雅培乙肝六項ELISA試劑盒的NCx值，分別為：0.010(HBsAg)、0.027(抗—HBs)、0.035(HBeAg)、1.083(抗—HBe)、1.065(抗—HBc)、0.045(抗HBc-IgM)。生物梅里埃的HIV試劑NCx是0.091。辨別試劑NCx值是否合理的一個很簡單的方法，只要對比大量陰性樣本的實際讀數(shù)就“一目了然"啦!
(2)陰性對照分為兩類
一是受檢人血清中并不含有或方法學靈敏度未能檢出的待檢物的基準水平，并且結果判斷值(Cut off)計算式中決定“是"(陽性)、或“否"(陰性)的*可變值。陰性對照值高，導致假陰性;反之，ELISA試劑盒導致假陽性。二是陰性對照設置，在方法學上要求加入指示性定量標準品，ELISA試劑盒如中和劑HBeAg，定量HBcAg等，用以檢測抗—HBe、抗—HBc。或者，選取代表平均水平的正常人血清用作陰性對照，ELISA試劑盒如檢測抗—HBc IgM。此類Cut off 值計算時，多數(shù)均包括陰性和陽性對照值2個可變值。
ELISA試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀守法，嚴于律己，寬仁以待，敢于承擔的企業(yè)精神作為標準，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務來維護和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。
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