簡介
       清潔驗證是一個需要具有完備證明文件的過程，證明制藥行業(yè)生產(chǎn)設(shè)備的清潔是有效的和一致的。清潔驗證策略的必要性已經(jīng)要求去尋找一個定量的、精確的方法，確定制藥生產(chǎn)過程中的污染物或者清潔殘渣是否存在。
測試方法
       當(dāng)前有兩種清潔驗證方法需要采用 TOC 分析：棉簽技術(shù)和清洗水技術(shù)。下面是這兩個方法的主要敘述。
棉簽技術(shù)
       棉簽技術(shù)需要一些棉花，聚酯、聚亞安酯或者 Teflon^?的棉簽，采集制藥生產(chǎn)罐內(nèi)部某些區(qū)域的樣品。這些區(qū)域可以是罐的內(nèi)壁，也可以是一個稱作“試樣” 的小板（在生產(chǎn)過程中，這個小板懸浮在產(chǎn)品的表面，作為生產(chǎn)用罐清潔和清洗程度的標志物）。棉簽放置于要采樣的表面，擦拭整個樣品表面。 擦拭的方向和壓力在清潔標準操作規(guī)程（SOP）中作了定義。然后萃取這個采樣過的棉簽。將棉簽放入一個裝有酸性溶液的小瓶中，然后執(zhí)行超聲波或者離心處理，Z后分析此酸性溶液的 TOC 濃度。
       也可以通過將棉簽放入一個密封的、裝有 5%磷酸和 100 克/升過硫酸鈉溶液的玻璃安瓿瓶中，之后分析這個棉簽浸取液。無機碳形式的二氧化碳被吹掃到環(huán)境中，然后密封這個玻璃瓶。玻璃瓶被加熱到100℃并保存指定的時間。Z終，打開玻璃瓶， TOC 以二氧化碳的形式被吹出并進行檢測。
清洗水方法
       這個過程包括：在產(chǎn)品生產(chǎn)之前分析取自設(shè)備的清洗水，然后在清潔和清洗了生產(chǎn)設(shè)備之后再次分析這個清洗水。比較兩次的分析結(jié)果以證實設(shè)備的清潔度。
清潔驗證中TOC分析的優(yōu)勢
       TOC 分析具有檢測原材料、生物制品、清洗物質(zhì)、清潔劑和其它有機污染物等很多應(yīng)用場合。 TOC的結(jié)果是重復(fù)的以及定量的，并且不會受到特定物質(zhì)的干擾。這使 TOC 的結(jié)果能夠被快速地進行準確無誤的驗證。
結(jié)論
       通過快速和準確的分析， TOC 分析儀能夠檢測制藥行業(yè)生產(chǎn)水中大量的有機污染物。在 TOC 分析的廣泛的應(yīng)用中，OST 和清潔驗證只是其中的兩項應(yīng)用。隨著法規(guī)條例的不斷補充， TOC 分析像其它方法和技術(shù)一樣，其重要性將不斷地提高。雖然如此，需要做更多的研究，使 TOC 的分析在制藥行業(yè)發(fā)揮Z大的效率。

清潔驗證是目前生物制藥行業(yè)不可缺少的重要環(huán)節(jié)，對于安全規(guī)范質(zhì)量生產(chǎn)的重要性不言而喻。

　　與傳統(tǒng)的HPLC方法相比較，TOC法的靈敏度更高，對于少數(shù)不溶于水的有機化合物也能檢測到。而且驗證過程簡單方便，無需設(shè)置其他參數(shù)，而目前被廣泛應(yīng)用于清潔驗證。

　　TOC取樣驗證棉簽是一種專門用于檢測水質(zhì)和制藥設(shè)備表面殘留物的工具。它可以檢測出水中的總有機碳(TOC)含量，以及設(shè)備表面的有機物和無機物的殘留量。這些殘留物可能會影響生產(chǎn)過程中的水質(zhì)和產(chǎn)品的質(zhì)量和純度，因此需要進行定期的檢測和驗證。

　　深圳美迪科生物一次性TOC取樣拭子棉簽助力清潔驗證

　　TOC驗證取樣棉簽通常使用無紡布材料制成，具有低離子、低粒子和低縮水性等特點，能夠有效地避免交叉污染和產(chǎn)生誤差。其操作簡單、快速，可靠性高，因此在生物制藥行業(yè)中得到廣泛應(yīng)用。

　　棉簽的頭是100%的連續(xù)聚酯纖維材質(zhì)制作，頭部直接加熱模塑于聚丙烯手柄上，優(yōu)于傳統(tǒng)的棉簽;

　　總有機碳含量 <50 μg/L, <50 ppb, 保障拭子本身不干擾測試數(shù)據(jù);

　　雙層、雙層編織滌綸頭，可夾帶污染物;在抽樣過程中的針織結(jié)構(gòu)。這是最大限度地采樣收集并釋放到稀釋劑中，以提供優(yōu)良的回收率;

　　帶缺口的分離式手柄，可將頭部放入最小處理和采樣的小瓶;

　　100%聚丙烯手柄，確保無其他污染物，具有優(yōu)異的耐化學(xué)性。

在現(xiàn)代的科學(xué)研究、生產(chǎn)和實驗室工作中，潔凈度和準確性至關(guān)重要。針對TOC(總有機碳)驗證的特殊需求，美迪科推出了TOC清潔驗證棉簽MPS-713。這款棉簽具有極強的耐磨性和鎖緊性能，為清潔驗證工作提供了極大的便利和可靠性。

　　該棉簽的特點之一是其潔凈室水洗設(shè)計。它采用雙層針織滌綸材料制成，不含硅、氨和鄰苯二甲酸二辛酯(DOP)，確保了高度的潔凈度。無論是微生物取樣還是純化水的TOC取樣，這款棉簽都是專門為清潔驗證而設(shè)計的，可滿足各種驗證要求。

　　手柄采用淺綠色的聚丙烯材料制成，具有良好的耐化學(xué)性和抗溶劑鎖緊能力。同時，手柄設(shè)計合理，易于折斷，方便取樣后的處理和保存。熱粘合頭的設(shè)計使棉簽柔軟無磨損，并且具有超低的不揮發(fā)物殘留和低顆粒纖維生成，確保了取樣的準確性和可靠性。

　　除了優(yōu)異的性能特點，美迪科TOC清潔驗證棉簽還注重產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝和包裝環(huán)節(jié)。它在100級潔凈區(qū)內(nèi)進行全程生產(chǎn)和包裝，極大地降低了發(fā)塵量，確保了產(chǎn)品的潔凈度。

　　美迪科TOC清潔驗證棉簽的結(jié)構(gòu)特點也非常值得一提。它的清潔頭采用針織滌綸材質(zhì)制成，具有干凈耐磨的特性，可用于清潔驗證工作的各個環(huán)節(jié)。拭子手柄采用剛性設(shè)計，并配備大型內(nèi)部頭部槳葉，提供了堅實的支撐，使棉簽在使用過程中更加穩(wěn)定和可靠。手柄還帶有折斷點，方便處理和保存樣本，增加了工作效率。

　　綜上所述，美迪科TOC清潔驗證棉簽MPS-713是一款針對清潔驗證工作而設(shè)計的專用棉簽，具有強的耐磨性和鎖緊性能。它采用潔凈室水洗設(shè)計，不含有害物質(zhì)，擁有良好的耐化學(xué)性和溶劑鎖緊能力。該棉簽在生產(chǎn)工藝和包裝環(huán)節(jié)也經(jīng)過精心設(shè)計，確保產(chǎn)品的潔凈度。無論是用于微生物取樣還是TOC取樣，美迪科TOC清潔驗證棉簽都是您可靠的選擇。

確定最適合您的機會和挑戰(zhàn)

制藥企業(yè)不斷面臨進行清潔驗證的挑戰(zhàn)。以下是確保實施成功、合規(guī)清潔驗證的五種方法。

01  為您的清潔程序確定合適的技術(shù)和最有效的部署方案（實驗室、在線、旁線）

了解您的清潔過程。為清潔過程選擇正確的技術(shù)是成功實施清潔驗證的關(guān)鍵。對于清潔驗證，有許多常用的分析方法。

 專屬性方法 

如在清潔過程中對特定分析物進行UV/VIS或HPLC試驗。盡管可以對目標分析物進行檢測并使人們確信目標分析物已經(jīng)清洗干凈，但這些測試無法檢測到可能影響產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)量、效能或安全的其它化合物，如降解物或洗滌劑。這種類型的分析僅限于在實驗室使用。

 非專屬性方法 

如總有機碳TOC分析法，與專屬性方法相比，可對清潔度有更全面的了解。TOC法不只是檢測一種分析物，而是通過采用一種方法來檢測清潔劑、降解物、API和賦形劑。TOC還可根據(jù)您的工藝提供多種ZJ部署方案（實驗室、在線、旁線）。

了解有關(guān)ZJ部署方案，

長按識別二維碼，獲取更多信息。

02  簡化方法驗證和儀器確認

需要進行方法驗證和儀器確認，以表明方法參數(shù)適當(dāng)，并且儀器適用于該方法。盡管這些對于清潔程序的成功與否至關(guān)重要，但方法驗證和儀器確認并不一定非得很復(fù)雜。

開發(fā)一種合適的方法來提供充分的化合物回收率、線性、穩(wěn)固性和專屬性數(shù)據(jù)，并設(shè)定合適的接受標準。重要的是要證明這些分析數(shù)據(jù)滿足要求，并確保所選擇的技術(shù)能夠滿足可靠的方法開發(fā)需求。方法開發(fā)和驗證應(yīng)本著實用性、可實現(xiàn)、可驗證并具有說服性原則。

對儀器進行全面確認，以驗證儀器的安裝、操作和性能滿足其預(yù)定的用途要求。一些儀器制造商會提供相關(guān)文件和服務(wù)來協(xié)助您全面完成儀器確認工作。

03  選擇ZJ消耗品，以實現(xiàn)ZJ回收率和樣品可靠性

樣品瓶和標準品等消耗品會對分析方法的成敗產(chǎn)生極大影響。請確保您為清潔工藝選擇可追溯、合規(guī)和和合適的消耗品。

應(yīng)該定期對系統(tǒng)進行挑戰(zhàn)，以確保方法的適用性。選擇濃度合適的一種或多種化合物，以反映您的清潔工藝，并且對清潔驗證使用的儀器進行適當(dāng)?shù)奶魬?zhàn)。

一些供應(yīng)商會提供特殊消耗品，以提高驗證方法成功實施的概率。例如，如果您的工藝涉及到蛋白質(zhì)檢測，則對TOC樣品瓶進行預(yù)先酸化可大大提高經(jīng)常被漏報的粘性蛋白質(zhì)的回收率。在開發(fā)檢測方法時，請考慮此類解決方案。

在線分析相較于實驗室分析，可以降低使用樣品瓶的成本并提高樣品的可靠性。自動化分析在一定程度上消除了取樣誤差，同時節(jié)省了金錢和時間。

04  利用數(shù)據(jù)來控制、深入了解和優(yōu)化清潔工藝

選擇能夠生成可信、可驗證并用于故障排除和重要CGMP決策數(shù)據(jù)的技術(shù)。如果數(shù)據(jù)沒有經(jīng)過驗證且不準確，就很難深入了解和控制清潔工藝。

擁有準確的數(shù)據(jù)可以使人們對結(jié)果充滿信心，并以此做出重大質(zhì)量決策。如果采用TOC，在選擇具體TOC技術(shù)進行清潔驗證時應(yīng)格外小心，因為某些技術(shù)不適合用于精確分離和檢測。

TOC分析儀提供了可以洞悉清潔工藝的三個單獨的數(shù)據(jù)，以ZZ實現(xiàn)對清潔工藝的控制、深入了解和優(yōu)化。一個樣品分析可以給出無機碳、總有機碳和電導(dǎo)率數(shù)據(jù)。通過這些數(shù)據(jù)可用于確定清潔工藝失敗的根本原因，采取糾正和預(yù)防措施或優(yōu)化清潔周期。

05  數(shù)據(jù)可靠性

在CGMP設(shè)置中，數(shù)據(jù)可靠性比以往任何時候都重要，在清潔驗證中實施分析技術(shù)時必須考慮數(shù)據(jù)可靠性。

FDA已經(jīng)對采用相關(guān)分析方法時不遵守數(shù)據(jù)可靠性標準多次發(fā)出了警告函。具體來說，當(dāng)采用HPLC時，常見的問題是沒有對峰值進行積分或沒有對鬼峰產(chǎn)生的原因進行調(diào)查。在清潔驗證中出現(xiàn)未知峰不可避免，但必須對其進行徹底調(diào)查并記錄。

使用TOC進行清潔驗證不僅可以全面了解清潔度，并且一些分析儀還完全符合21 CFR 第11部分規(guī)定的要求和數(shù)據(jù)可靠性準則。數(shù)據(jù)應(yīng)保存在安全的數(shù)據(jù)庫中，能夠隨時訪問，所有工作均應(yīng)保存在安全審核記錄中。在利用數(shù)據(jù)做出重要質(zhì)量決策時，需要制定和實施強有力的程序來保證數(shù)據(jù)的可靠性和安全性。

當(dāng)采用在線TOC分析進行清潔驗證時，由于不存在數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)錄、打印和未驗證數(shù)據(jù)傳輸?shù)沫h(huán)節(jié)，因此具有更高的數(shù)據(jù)安全性和可靠性。

01 簡介

清潔驗證研究和持續(xù)的清潔周期監(jiān)控都需要使用TOC濃度低且穩(wěn)定的樣品瓶來進行靈敏度和可靠性高的擦拭和淋洗樣品分析。使用TOC濃度較高且差異較大的清潔驗證套裝，會增加失敗的風(fēng)險，從而不得不進行額外清潔，或者做出不準確的設(shè)備清潔度評估，導(dǎo)致代價高昂甚至危險的后果。

本文評估以下兩種不同的清潔驗證套裝，均包括低TOC棉簽和TOC樣品瓶:

1. 蘇伊士公司的Sievers^?清潔驗證套裝

2. Texwipe* TX3342 TOC清潔驗證批量套裝

02 評估

本文評估各供應(yīng)商的清潔驗證套裝的基準TOC貢獻和差異。在測試中，我們分析了各供應(yīng)商的兩個批次的棉簽(每批次12個棉簽)，棉簽均裝在40毫升超純水的樣品瓶中(每個供應(yīng)商提供12個樣品瓶)。兩種清潔驗證套裝均使用Texwipe棉簽。

03 基準TOC結(jié)果

04 結(jié)論和建議

本文中的數(shù)據(jù)顯示，測試的兩個批次的Sievers清潔驗證套裝的背景TOC都比較低而且穩(wěn)定。此外，在同一批次內(nèi)，Sievers套裝的濃度差異較小(Sievers的兩個批次的標準偏差分別為3.3和3.4ppb，Texwipe的同兩個批次的標準偏差分別為4.0和6.3ppb)。在不同批次之間，Sievers套裝的濃度差異也較小。由于Sievers套裝的背景TOC低而且差異小，因而更能提供靈敏而精確的清潔數(shù)據(jù)。Sievers的高品質(zhì)保證和樣品瓶的完全可追溯性為準確而完整的分析提供了強有力的保障。

在進行清潔驗證時，Sievers認證的樣品瓶、清潔驗證套裝、預(yù)酸化樣品瓶都具有出眾的性能和穩(wěn)定性。如果您需要使用酸化擦拭樣品，比如用來回收蛋白質(zhì)或肽，Sievers給您提供裝有酸化水的預(yù)酸化樣品瓶。無論您是要回收常規(guī)化合物還是難以回收的化合物，Sievers認證的和專用的TOC樣品瓶都能幫助您完成極其準確的分析。

*Illinois Tool Works Inc的商標

簡介 

       在生產(chǎn)消費品時，有效地清潔生產(chǎn)設(shè)備對質(zhì)量控制 來說至關(guān)重要。清潔工藝的目標是降低產(chǎn)品污染的 風(fēng)險，有效的清潔工藝可以將風(fēng)險降低到可接受的 水平，以確保產(chǎn)品質(zhì)量。如果無法衡量和驗證清潔 工藝的有效性，就無法了解產(chǎn)品質(zhì)量和消費者安全 的風(fēng)險。 

       根據(jù)美國食品和藥品管理局（FDA）提供的數(shù)據(jù)， 2017 年食品和飲料行業(yè)產(chǎn)品召回的主要原因是微 生物對產(chǎn)品的污染。對于減少和消除微生物污染來說，強有力的清潔工藝至關(guān)重要，因此監(jiān)控清潔工 藝有效性的方法同樣至關(guān)重要。  

       總有機碳（TOC）分析是消費品生產(chǎn)商廣泛采用的非專屬方法，用于檢測產(chǎn)品、清潔劑、以及微生物 等污染物的殘留量。 

       為了證明 TOC 分析法適用于預(yù)期用途，我們對設(shè) 備清潔之后可能尚存的殘留物進行了回收和線性研究。工廠通常會測試化學(xué)污染物和化合物，但很少用 TOC 分析法來測試微生物的回收率。本文旨在探討對于清潔驗證和確認，TOC 分析法能否證明 可接受的微生物污染回收率和線性。

實驗設(shè)計和設(shè)置 

       我們同科羅拉多大學(xué)博爾德分校合作，用一整夜時 間在胰酶大豆肉湯中培養(yǎng) 100 毫升枯草芽孢桿菌 （Bacillus subtilis）。以 4500 轉(zhuǎn)/分鐘的速度將Z 終培養(yǎng)物的十毫升等分試樣離心分離 10 分鐘，形 成細胞沉淀。 在每次離心之間，倒出上面的液體，用渦旋混合方 法用 10 毫升超純水使沉淀細胞重新懸浮。重復(fù)此 過程 7 次。設(shè)計淋洗循環(huán)以除去細胞培養(yǎng)基帶來的 TOC 污染。在第 7 次淋洗循環(huán)后，根據(jù)已有的 4,6- 二氨基 -2- 苯 基 吲 哚 （ 4,6-diaminidino-2-phenylindole，DAPI）染色任務(wù)來對細胞進行重 新懸浮、稀釋、計數(shù)（見圖 1）。 

       確定細胞密度之后，用 Sievers* M9 TOC 分析儀 測量 1 ppm 確認標樣組，然后進行三次細胞濃度 稀釋。在測量 TOC 之后，用 0.45μm 滅菌過濾器 過濾剩余樣品，徹底除去細菌（見圖 2）。然后 再次測量 TOC 以確定每個樣品的非細胞背景 TOC（見圖 2）。

圖 1： 枯草芽孢桿菌在細胞計數(shù)的熒光顯微鏡成像

圖 2：枯草芽孢桿菌的過濾過程

結(jié)果

表 1：微生物細胞密度與 TOC 的相關(guān)性結(jié)果

       表 1 和圖 3 是微生物 TOC 相關(guān)性研究的結(jié)果。線性趨勢線的 R2 值為 0.9981，表明實測細胞密度有良好的線性趨勢。根據(jù)圖 3 所示的線性擬合趨勢線方程，定義為 3 倍噪聲的檢測水平（LOD，Level  of Detection）為 2.74E + 06 細胞/mL。此外，根據(jù)線性擬合趨勢線和 M9 儀器規(guī)格，50 ppm 的Z 大儀器定量限為 2.49E + 08 細胞/mL。 

       在進行微生物 TOC 定量之后，分別將 1 毫升的每 種細胞密度溶液放在不銹鋼試樣板上進行試樣污染， 然后使試樣干燥。此試樣污染的目的是確定微生物 TOC 相關(guān)結(jié)果的目視檢測限。圖 4 是微生物試樣 污染圖。

圖 3：微生物細胞密度與 TOC 的線性關(guān)系

圖 4：微生物試樣板污染 (A) 5.8E+07 細胞/mL (B) 5.8E+06 細胞/mL (C) 5.8E+05 細胞/mL

討論與結(jié)論

       微生物 TOC 相關(guān)結(jié)果和試樣污染圖都說明了連續(xù) 監(jiān)測已有的清潔工藝有效性的重要性。在理想光線 下，很容易在試樣板上看到Z 高細胞密度（5.8E +  07 細胞/mL）的污染斑。而對于較低細胞密度， 即使光線很好，也很難在試樣板上看到污染斑。這表明除了強有力的清潔工藝之外，還需要用非目測的方法來測試清潔工藝的有效性。 

       根據(jù)收集的數(shù)據(jù)，可以想象用于生產(chǎn)消費品的設(shè)備上仍有顯著微生物污染，卻僅憑目視檢查就被投放 到生產(chǎn)中，導(dǎo)致嚴重后果。因此必須連續(xù)監(jiān)測已有 的清潔工藝的有效性，才能降低產(chǎn)品質(zhì)量風(fēng)險和消 費者安全風(fēng)險。 

       Z 后，由于微生物分子組成的不確定性，很難確定微生物溶液的回收率。本研究根據(jù)先前在確定活性 微生物細胞中的碳含量時的發(fā)現(xiàn)，旨在確定微生物 溶液的理論回收率。圖 5 是理論微生物 TOC 產(chǎn)出 量的計算過程。基于每個細胞的碳原子參考數(shù)， 5.8E + 07 細胞/mL 的理論 TOC 濃度為 11.6 ppm。

圖 5：理論微生物 TOC 產(chǎn)出量的維度分析

      在本文的實驗中，測量到 5.8E + 07 細胞/mL 的 TOC 實際回收值為 9.13 ppm，對挑戰(zhàn)性的化合 物的回收率為 78.7％，從而證明實驗方法是成功的。 

       總之，本研究用 Sievers M9 TOC 分析儀演示了 在清潔驗證和確認時的細胞密度同目視檢測限的 關(guān)系，成功地證實了微生物 TOC 回收率。實驗 數(shù)據(jù)支持使用 Sievers TOC 分析儀來確認設(shè)備清 潔度，同時表明除了目視檢查之外還須考慮使用 監(jiān)測微生物污染的定量方法。 TOC 分析法是測 量殘留物、監(jiān)測清潔工藝、降低總體風(fēng)險的有效 方法。蘇伊士公司提供 Sievers 系列產(chǎn)品，包括 能夠解決您的一切清潔驗證和確認需求的 TOC 解決方案、服務(wù)、支持。

各位奮斗在方法驗證戰(zhàn)線的小伙伴們，你是否困擾于分析方法驗證實驗？首先要起草驗證方案，做完實驗后，還有一系列的計算、匯總、報告……計算過程繁瑣耗時，匯總報告數(shù)據(jù)繁多……

如果您有此困擾，不妨來看看沃特世Empower MVM方法驗證插件解決方案。Empower 3方法驗證管理器（MVM）是Empower 3色譜數(shù)據(jù)軟件的選件，讓您可以在同一個應(yīng)用程序內(nèi)完成整個色譜方法驗證過程，從最初的規(guī)劃方案到最 后的報告結(jié)果。

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Empower 3 MVM能為實驗室和企業(yè)帶來一系列的優(yōu)勢，包括：

• 減少現(xiàn)有方法驗證流程中的人工步驟，縮減80%的方法驗證時間和成本。

• 更易于符合法規(guī)要求，與此同時顯著增強數(shù)據(jù)可追溯性。

• 方法驗證時無需使用不同的軟件。

• 自動化地、更有效率地簡化方法驗證工作流程。

• 輕松地確認數(shù)據(jù)是否符合方法驗證要求，結(jié)果是否在規(guī)定范圍內(nèi)

• 驗證數(shù)據(jù)安全地存儲在數(shù)據(jù)庫內(nèi)。

MVM方法驗證管理器使用流程

下面，就讓我們一起來看看Empower MVM是如何幫助您自動完成方法驗證的吧:

第 一步，創(chuàng)建MVM驗證方案模板，并設(shè)置每個驗證工作的限度標準。我們以線性測試為例，需要設(shè)置線性樣品包含幾個濃度水平，每個濃度配幾份樣品，每個樣品進樣次數(shù)，以及對于線性R2的限度要求等。

第二步，創(chuàng)建樣品組，并勾選每針進樣所屬的驗證測試工作。

第三步，運行樣品，得到色譜結(jié)果。

第四步，得到驗證結(jié)果。Empower會自動進行計算，并與限度比較，得到是否滿足驗證要求的結(jié)論。

第五步，查看并生成驗證報告。

驗證報告可通過統(tǒng)計圖和數(shù)據(jù)表格的形式報告，驗證結(jié)果通過與否一目了然，還可以根據(jù)需求自定義報告模版，滿足不同驗證要求。

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