ACE? UHPLC 可重復(fù)使用的色譜柱連接器

• 壓力額定值> 1700bar（> 25000psi）

• 與所有UHPLC系統(tǒng)兼容

• 與所有UHPLC色譜柱品牌兼容

• 消除連接不良

• 創(chuàng)新且可重復(fù)使用的設(shè)計(jì)

所有UHPLC色譜柱品牌都需要正確安裝，以實(shí)現(xiàn)Z大柱效。

為了避免出現(xiàn)問題，不推薦使用型壓制接頭，因?yàn)檫@些接頭在安裝時不允許在管道、接頭與色譜柱入口之間自由移動。

這可能會導(dǎo)致色譜柱連接不良，進(jìn)而由于向系統(tǒng)引入了額外的柱體積（死體積）表現(xiàn)出非預(yù)期的峰拖尾。

或者，可以觀察到入口接頭連接處有泄漏。
ACE UHPLC色譜柱連接器（p/n EXL-CC）可重復(fù)使用，每次均可以使UHPLC色譜柱得到正確安裝。

它們獨(dú)特的設(shè)計(jì)確保它們可以隨著重復(fù)使用保持壓力等級，但無需性地焊在入口管道上。

為了使接頭的使用壽命盡可能Z大，需要使用ACE扭矩扳手（p/n EXL-TW）。
標(biāo)準(zhǔn)ACE HPLC PEEK手指連接器（p/n ACE-FT，壓力額定值為350bar / 5000psi）可用在UHPLC色譜柱出口端處，該處壓力要求較低，但正確的連接仍然很重要。

ACE Excel UHPLC色譜柱與所有市售UPLC和UHPLC儀器兼容

Thermo Scientic Accela

Dionex UltiMate 3000

Waters

• Acquity UPLC

• Acquity UPLC H–Class

• Acquity UPLC I–Class

安捷倫科技

• 1290 Infinity

• 1220 Infinity

• 1260 Infinity
  

• 1200 Infinity

島津

• Nexera

• Prominence

加上許多其他品牌的UHPLC儀器，恕不能一一列舉

        誤區(qū)1：HPLC 柱不可以反沖

        這是不正確的。通常情況下液相色譜柱所設(shè)計(jì)的耐壓值是遠(yuǎn)高于最da操作壓力的。換柱時反沖可以清洗柱頭一些具有強(qiáng)吸附性質(zhì)的物質(zhì)，我們沖洗出這些殘留物質(zhì)也是為了防止壓力增大。但是如果你購買的色譜柱在柱頭使用了大粒度的填料，這時你反沖會沖出這一部分填料。因此你要先檢查一下自己使用的液相色譜柱再選擇是否反沖。

        誤區(qū)2：所有的C18（L1）色譜柱都是一樣的

        這是不正確的。在早期的HPLC體系中，C18是唯yi反向色譜的鍵合固定相，因此C18就作為了反向色譜柱的標(biāo)準(zhǔn)。但是時代不會一直停滯腳步，人們對于科學(xué)的追求與理解愈發(fā)深刻，更多的固定相出現(xiàn)了，誕生了許多C18色譜柱。雖然同樣是選用硅膠作為基體，但各自都有自己特定的填料鍵合合成工藝，因此色譜性能也不相同。所以單純的因?yàn)槊Q都是C18色譜柱，想當(dāng)然覺得性能都一樣是不對的。

        誤區(qū)3：色譜柱里一旦進(jìn)入空氣就會損壞

        我們都知道當(dāng)色譜柱不與色譜儀連接的時候，需確保色譜柱被緊緊地密封。但是在實(shí)際應(yīng)用中，即使色譜柱的端部進(jìn)入了少量的空氣也不是很嚴(yán)重的事情。當(dāng)色譜柱連接到色譜儀上使用時，在系統(tǒng)初始加壓階段，在很短的時間內(nèi)空氣就會被溶劑擠壓排出。所以，不要因?yàn)樯V柱進(jìn)入了少量空氣就認(rèn)為色譜柱已被損壞。

        誤區(qū)4：保護(hù)柱是沒必要的

        這也是太JD的誤區(qū)，其實(shí)使用保護(hù)柱有很多好處。HPLC的移動相中常使用各種試劑，其中會混有一些不溶解物質(zhì)或不純物質(zhì)。多數(shù)不溶物通過使用篩板或膜濾器過濾移動相可以除去，但極細(xì)小的粒子還是無法完全過濾。此外在移動相調(diào)制之后，還有通過空氣、容器、人體等有不溶物、不純物落入的可能性。這些不溶物、不純物質(zhì)會污染柱、或使堵塞、或給分析帶來不良影響等。這時通過在色譜柱前安裝分析保護(hù)柱可以防止其產(chǎn)生，能起保護(hù)色譜柱的作用。相較于更換一根昂貴的分析柱，添加或更換保護(hù)柱只需要很少的花費(fèi)。恒譜生液相色譜保護(hù)柱幾乎無死體積、便于更換，適用于UHPLC系統(tǒng)的高壓，將那些強(qiáng)保留的、不可吸附的化合物截留下來。樣品和流動相的過濾可以維護(hù)保護(hù)柱對化學(xué)污染物的吸附容量，能夠更長時間的維護(hù)柱效，延長色譜柱的使用壽命。

        誤區(qū)5：反相色譜柱不可以使用純水相

        這也是不正確的，有些色譜工作者在使用低有機(jī)溶劑含量或者純水作為反相色譜柱的流動相時，發(fā)生相塌陷的現(xiàn)象，所以有些人認(rèn)為反相色譜柱不可以使用純水相。但事實(shí)上市場上銷售的反相色譜柱（如極性嵌入和極性封端柱）都是具有水浸潤性的，其表面特性是允許使用純水的，不會導(dǎo)致塌陷或者保留時間移位。

        誤區(qū)6：色譜柱填料粒徑越小、壓力越高，分離效果越好

　　色譜柱性能的好壞不能單純用填料是否是超小的粒徑以及超高的柱壓來評估。現(xiàn)代對于色譜柱的柱特性研究越來越深入，已經(jīng)研發(fā)了一些能夠提高色譜柱柱效的方法。例如，采用新的表面多孔材料的色譜柱，其柱效與sub-2μm UHPLC柱效一樣好，與常規(guī)的LC填料色譜柱比起來，柱壓很低。

　　誤區(qū)7：柱壓不會影響色譜分離效果

        近年來，柱壓的問題引起了很多色譜工作者的注意，柱壓是色譜的很多參數(shù)都是受柱壓影響的，包括部分溶質(zhì)的摩爾體積、停滯體積、柱孔隙度、保留因子、流動相密度、介電常數(shù)、固定相結(jié)構(gòu)、pH值和電離常數(shù)等。當(dāng)色譜柱在約2000psi（13.789MPa）壓力下運(yùn)行時，即使保留時間上存在小差異，也并不會引起我們的注意；特別是如果重復(fù)性較好及定量不受影響的時候。但是，當(dāng)柱壓接近2000psi（13.789MPa）時，柱壓的影響可能就相當(dāng)明顯了。

        近幾十年來，液相色譜法被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)領(lǐng)域，藥物分析，食品分析，環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域，人們對于液相色譜法的不斷研究，也誕生出更多的液相色譜應(yīng)用以及解決方法等，相信未來液相色譜法的應(yīng)用領(lǐng)域會更加廣闊。

ACE色譜柱柱前過濾器
使用Advanced Chromatography Technologies的品質(zhì)柱前過濾器可以保護(hù)您的HPLC和UHPLC色譜柱免于過早失效。
HPLC色譜柱失效的Z常見原因之一是色譜柱入口篩板上聚集的顆粒物質(zhì)，導(dǎo)致背壓較高和/或峰形變形。

據(jù)估計(jì)，超過70％的HPLC色譜柱失效是由入口篩板堵塞引起的。UHPLC色譜柱（特別是那些用2μm以下顆粒填充的色譜柱）特別容易受入口篩板堵塞的影響。
Advanced Chromatography Technologies可以提供三種不同的柱前過濾器，每種過濾器均為色譜柱的特殊保護(hù)而設(shè)計(jì)。

保護(hù)您的HPLC和UHPLC色譜柱免于過早失效

1.利用ACE鍵合相的固定相選擇

分離度方程式可以確定影響分離度的參數(shù)：柱效（N）、容量因子（k）和選擇性（α）。

在過去幾年里，柱效和使用超GX色譜柱（被稱為“UHPLC”色譜柱）作為實(shí)現(xiàn)分離目標(biāo)的手段已得到了極大的重視。

UHPLC已通過更快速的分離和更快速的方法開發(fā)提高實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)力來證明了其價值。

然而，選擇性往往被忽視，且其重要性也被強(qiáng)調(diào)柱效所掩蓋。這是令人遺憾的。

在影響分離度的三個參數(shù)中，選擇性是Z為重要的。

（參見圖1）通過利用柱效和選擇性，通?？梢詫?shí)現(xiàn)更好和更快的分離。

圖 1：N、α和k對分離度（Rs）的影響

提高N，α或k可以提高分離度（Rs）。

然而，從這些圖中可以看出，隨著N或k值的提高，對分離度的改善效果也逐漸降低。

另一方面，提高選擇性（α）則沒有這個問題，因此其成為開發(fā)分離方法時的Z佳優(yōu)化變量。

在反相色譜中，固定相與分析物之間存在多種相互作用的機(jī)制，這可以用來實(shí)現(xiàn)分離。

這些相互作用機(jī)制包括：疏水性結(jié)合、π-π、氫鍵、偶極-偶極和形狀選擇性。

不同類型的鍵合相將提供其中一種或多種相互作用機(jī)制。表1列出了ACE鍵合相和每種可能的主要相互作用機(jī)制，這取決于分析物和流動相條件。

表1: 比較不同鍵合相的分離機(jī)制/相互作用                                                                                  

利用鍵合相的選擇性實(shí)現(xiàn)更好的分離。
圖2表明了兩種ACE鍵合相即C18-AR與苯基之間的選擇性差異。
盡管兩種鍵合相提供了強(qiáng)π-π和偶極-偶極相互作用的可能性，但是在其它可能的相互作用機(jī)制（特別是疏水性結(jié)合）的強(qiáng)度方面，它們存在顯著差異。

C18-AR可能具有其它不同的分離機(jī)制，可以為復(fù)雜的混合物帶來更好的分離效果。對于其他混合物，可能不是這種情況，這是ACE鍵合相的優(yōu)勢。

當(dāng)開發(fā)分離方法時，ACE鍵合相可以提供各種可供選擇的重要保留機(jī)制。

非常強(qiáng)大且獨(dú)特的C18-AR和C18-PFP相只有在ACE和ACE Excel色譜柱中可以獲得。
通過利用柱效和選擇性，可以實(shí)現(xiàn)更好的分離。

圖 2：C18-AR與苯基相之間選擇性差異的比較

色譜柱尺寸： 50 x 2.1 mm, 3 μm
流動相：

A= 20mM KH2PO4,pH 2.7（溶于水中）；
B= 20mM KH2PO4,pH 2.7（溶于甲醇/水中：65:35, v/v）
流速： 0.6 mL/min
溫度： 60 ℃
檢測： UV 214 nm
梯度： 5分鐘內(nèi)從3至B，并持續(xù)1分鐘。

樣品：
1. 甲硝唑
2. 3-羥基苯甲酸
3. 苯酚
4. 苯甲醇
5. 咖啡茵
6. 水楊酸
7. 喹喔啉
8. 苯甲酸
9. 奎寧
10. 非那西丁
11. 1,4-二硝基苯
12. 1,3,5-三硝基苯
13. 呋塞米
14. 1,3,5 -三甲氧基苯
15. 吡羅昔康
16. 卡維地洛
17. 苯甲酸乙酯
18. 去甲替林

C18-AR相的疏水性更大，這可以為色譜峰對（13,14）和（15,17）提供更多的保留值和更佳的選擇性。還要注意C18-AR與苯基相的洗脫順序有很多變化。

圖3給出了鍵合相選擇能力的另一實(shí)例。

一個分離是用C18鍵合相的UHPLC色譜柱完成，另一個分離是用C18-PFP鍵合相的UHPLC色譜柱完成。

C18-PFP鍵合相提供的額外分離機(jī)制，使得總體分離效果更佳出色。

圖 3：ACE Excel可以獲得zhuo越的分離度和峰形：藥物及其相關(guān)物質(zhì)的UHPLC結(jié)果

條件
色譜柱尺寸：50 x 2.1mm
流動相：

A = 5mM甲酸（溶于水中）
B = 5mM甲酸（溶于甲醇中）
梯度：5分鐘內(nèi)從3至B
流速：0.6 mL/min
溫度：40 ℃
檢測：UV 254 nm

樣品
1. 對乙酰氨基酚
2. 氫氯噻嗪
3. 甲基苯基亞砜
4. 甲基苯砜

在C18 UHPLC色譜柱和C18-PFP色譜柱上同樣快速地產(chǎn)生色譜圖。

然而，C18-PFP色譜柱可以為色譜峰對（13,14）和（15,17）提供更佳的選擇性，因此能夠提供優(yōu)越的總體分離性能。

2.ACE和ACE Excel硅膠基質(zhì)固定相幾乎消除了硅醇基對色譜分離的不利影響，并且在為堿性化合物提供zhuo越峰形方面贏得了口碑。  

峰拖尾可以降低分離度，降低靈敏度，甚至干擾準(zhǔn)確度和精密度（圖4）。  

峰拖尾有許多潛在的原因，但分離堿性物質(zhì)時的主要原因是硅膠固定相載體顆粒表面上的酸性硅醇基與分析物上的氨基之間的相互作用（圖5）。  

圖 4：峰拖尾對分離度和靈敏度的影響  

隨著峰拖尾（Tf，拖尾因子）從1.0增加到2.0，分離度（Rs）從1.5下降到0.87。  

由于峰寬增加以及峰面積保持不變，靈敏度（峰高）也隨著峰拖尾的增加而下降。  

ACE色譜柱采用具有極低硅醇活性的超惰性硅膠制成。  

這種超純硅膠采用ZL技術(shù)進(jìn)行有效鍵合和徹底封尾。  

導(dǎo)致這種硅膠基質(zhì)的固定相幾乎消除了硅醇基對色譜分離的不利影響。  

ACE色譜柱的超惰性特性使其成為分離極性堿性化合物的理想選擇。  

當(dāng)分離復(fù)雜堿性化合物時,與其他現(xiàn)代堿性去活色譜柱相比，ACE色譜柱總是能給出明顯更好的峰形和柱效（圖6）。  

圖 5：峰拖尾相互作用  

硅膠固定相載體表面上的酸性硅醇基可形成與堿性化合物相互作用的離子交換位點(diǎn)。  

這種離子交換的相互作用通?？梢詫?dǎo)致峰保留（二次保留），并當(dāng)采用反相HPLC分離胺類化合物時引起峰拖尾。  

一種幾乎消除了硅醇基對色譜分離不利影響的硅膠基質(zhì)固定相  

圖 6：峰拖尾比較  

條件
色譜柱尺寸：50 x 2.1 mm
流動相：40％甲醇，60％水
流速：0.2 mL/min
溫度：22oC
樣品：吡啶  

報告了堿性化合物（吡啶）在各種常見C18色譜柱上的塔板數(shù)。  

在10％峰高下測量塔板數(shù)，以使峰拖尾納入在測量中。  

ACE C18-PFP由于其超惰性性質(zhì)而達(dá)到了Z高塔板數(shù)。  

3.ACE Excel為UHPLC帶來了享有盛譽(yù)的ACE HPLC性能  

重要的是要認(rèn)識到色譜柱的選擇性和柱效是獨(dú)立的變量，在開發(fā)分離方法時您不必選擇使用一種而不使用另一種。事實(shí)上，為了實(shí)現(xiàn)Z佳的總體分離效果，您應(yīng)當(dāng)對上述兩個變量以及保留值進(jìn)
行優(yōu)化。當(dāng)需要實(shí)現(xiàn)高速分離時尤其如此。（參見圖7）  

圖 7：利用柱效和鍵合相選擇性來開發(fā)更快的分離方法  

條件：
流動相：  

A = 5mM甲酸（0.189）ml / L;
A = 5mM甲酸（溶于甲醇中）
柱溫：40℃
檢測：PDA, 254nm  

樣品：
1. 阿司匹林
2. 非那西丁
3. 1,3-二硝基苯
4. 苯甲酸乙酯  

5. 尼美舒利
6. 布洛芬
7. 吲哚美辛

利用UHPLC色譜柱更高的柱效，可在更高的流動相流速下使用更短的色譜柱，以使這種混合物的分離時間縮短80%（相比HPLC色譜柱）。
然而，也可以通過優(yōu)化鍵合相的選擇性來進(jìn)一步縮短分離時間，在這個案例中，就是利用了C18-PFP鍵合相所具有的增強(qiáng)的選擇性。

與C18UHPLC色譜柱、C18 HPLC色譜柱相比，ACE Excel C18-PFP UHPLC色譜柱分別將混合物的分離時間縮短了80％以上以及96％，同時保持了所有峰的分離度。

ACE Excel UHPLC色譜柱的設(shè)計(jì)旨在充分利用低擴(kuò)散、超高壓UPLC?和UHPLC儀器（高達(dá)1000 bar），并可與所有市售UPLC和UHPLC系統(tǒng)相兼容。
ACE Excel UHPLC色譜柱可以為堿性化合物提供更佳的峰形，改善柱子與柱子之間的重現(xiàn)性，提供額外的利用多種分離機(jī)制的固定相，以及改善色譜柱的耐用性。

ACE Excel UHPLC色譜柱的可用性意味著色譜分析師在使用UPLC和UHPLC儀器時有更多的選擇來獲得更好的結(jié)果。

圖 8：ACE Excel色譜柱提供快速、高分辨率的分離

條件
色譜柱：ACE Excel C18, 2 μm, 3.0 x 50 mm
流動相：60秒內(nèi)從30%B至B
A =水+ 0.1％TFA B =乙腈
流速：2.5 mL/min
柱溫：40oC
壓力：703 bar (10,335 psi)
檢測：PDA, 254 nm
儀器：安捷倫1290 UHPLC
化合物
1. 乙酰苯胺
2. 苯乙酮
3. 苯丙酮
4. 苯丁酮
5. 二苯甲酮
6. 苯戊酮
7. 苯己酮
8. 苯庚酮
9. 苯辛酮

ACE Excel C18色譜柱可在不到60秒內(nèi)提供這9種分析物的基線分離。

4.已經(jīng)證實(shí)ACE HPLC色譜柱和ACE Excel UHPLC色譜柱具有持久耐用的、可靠的日常性能和zhuo越的色譜柱壽命。  

通過鍵合在硅膠固定相載體上的硅氧烷的酸化水解可以失去鍵合相，從而降低色譜柱的壽命。該酸水解隨著流動相pH的降低和柱溫的升高而增加。  

與C18相相比，較短的烷基相如C4和C3以及苯基相通常更容易失去鍵合相。此外，低純度的硅膠固定相載體和低表面覆蓋的固定相載體使得一些鍵合相更易于酸解。
由于使用超高純度的硅膠固定載體粒子以及鍵合相的極高表面覆蓋，ACE鍵合相表現(xiàn)出極高的穩(wěn)定性。（參見圖9）
盡管所有ACE鍵合相的穩(wěn)定性都很優(yōu)異，但是一些鍵合相并不像其它鍵合相那樣穩(wěn)定。例如，通常認(rèn)為C18鍵合比柱長較短的烷基相、PFP相和苯基鍵合相更穩(wěn)定。  

實(shí)際上，典型的苯基固定相穩(wěn)定性不佳是該相在方法開發(fā)中不常被選擇的主要原因之一。
為了解決這個問題而開發(fā)了ACE C18-AR，其允許色譜分析利用強(qiáng)大的π-π和偶極-偶極分離機(jī)制，并仍然享有C18相的堅(jiān)固性及耐用性。  

如圖10所示，ACE C18-AR不僅對典型的苯基鍵合相具有非常優(yōu)異的穩(wěn)定性，它甚至還比許多其他C18鍵合相表現(xiàn)出更佳的穩(wěn)定性。  

類似地，ACE C18-PFP提供了多種分離機(jī)制，可以利用它們實(shí)現(xiàn)更佳的總體分離效果，同時從C18相的穩(wěn)定性中受益。  

圖 9：酸穩(wěn)定性，pH 1.8  

條件
色譜柱：ACE 4.6 x 150 mm
流動相：50% CH3CN, 50%水
流速：1.0 mL/min
溫度：22 °C
分析物：菲  

酸性暴露條件：
流動相：50% CH3CN 50% 0.1%TFA（溶于水中）（pH 1.8）
流速：1.0 mL/min
溫度：22 ℃  

圖10：加速柱穩(wěn)定性研究：pH 1.9時80℃  

酸性暴露條件：
流動相：5:95 MeOH/0.1% TFA（溶于水中）（pH 1.9）
流速：0.20 mL/min
溫度：80 ℃
色譜柱尺寸：50 x 2.1mm
分析物：菲  

使用設(shè)計(jì)用于加速柱降解下的條件，ACE C18-AR相顯示保留損失極少，其壽命相當(dāng)于高度穩(wěn)定的ACE C18相。兩種固定相均由相同的超純硅膠而制成，而且比Zorbax SB-C18的耐久性更好(Zorbax SB-C18曾視作在高溫和低pH條件下具有極好穩(wěn)定性的固定相）。
正如預(yù)期的那樣，基于低純度硅膠（Waters Spherisorb ODS2）的C18鍵合柱在這些加速條件下壽命大大降低。
特別值得注意的是常規(guī)苯基色譜柱與ACE C18-AR的壽命比較結(jié)果。與ACE C18-AR相比，盡管使用高純度二氧化硅，苯基色譜柱的壽命仍降低，這表明ACE C18-AR可能適用于那些使用苯丙基色譜柱壽命短的應(yīng)用。  

將HPLC和UHPLC連接到通常被稱為LC-MS的質(zhì)譜儀上已經(jīng)相當(dāng)普遍。  

然而，質(zhì)譜對可能從HPLC/UHPLC色譜柱上洗脫下來的微量的鍵合相（稱為柱“流失”）非常敏感。柱  

流失可能會干擾分析結(jié)果，并且重要的是，LC-MS應(yīng)用中所選擇的色譜柱具有足夠穩(wěn)定的鍵合相以避免過量的柱流失。  

圖11表明ACE C18-PFP色譜柱幾乎沒有“流失”干擾LC-MS分析。  

C18-PFP（以及ACE C18和ACEC18-AR）的穩(wěn)定性使得這些色譜柱更適合LC-MS應(yīng)用。  

圖 11：ACE C18-PFP色譜柱的低柱流失使其成為LC/MS應(yīng)用中的理想選擇  

條件
色譜柱尺寸：50 x 3.0 mm
流動相：梯度：在5分鐘內(nèi)從5至95% B，95% B時持續(xù)5分鐘
A: 0.1％甲酸(溶于水中)
B: 0.1％甲酸(溶于乙腈中)
流速：0.43 mL/min
溫度：60oC
檢測：安捷倫1100 MSD ESI正離子快速掃描模式,快速掃描全50 – 1000 m/z
樣品：空白運(yùn)行  

柱流失可能會干擾LC-MS應(yīng)用中目標(biāo)分析物的檢測和測量。  

ACE C18-PFP色譜柱未顯示柱流失。  

所有ACE色譜柱的低流失特性使其非常適合LC-MS應(yīng)用。  

UHPLC色譜柱可能缺乏耐用性。加上入口篩板堵塞的可能性，您可能面臨色譜柱的耐用性不如HPLC色譜柱的問題。  

ACE Excel色譜柱非常寬容，并提供您期望從HPLC色譜柱中獲得的相同耐用性和使用壽命。  

ACE Excel將改變您對UHPLC色譜柱耐用性的看法。  

ACE Excel色譜柱不僅填裝的更好，還采用了ZL的入口篩板設(shè)計(jì)，使其比其它UHPLC色譜柱更不容易被堵塞。  

仍建議您像使用任何UHPLC色譜柱一樣過濾樣品和流動相，但ACE Excel色譜柱比其他UHPLC色譜柱更為寬容，并提供與HPLC色譜柱相同的耐用性和使用壽命。  

圖 12：ACE Excel色譜柱在耐用性方面有良好的口碑  

將2.1×100mm ACE Excel C18 UHPLC色譜柱在平均1,000 bar（14,500 psi）壓力下進(jìn)行2000多個梯度的運(yùn)行。  

在該穩(wěn)定性研究結(jié)束時，柱效（塔板數(shù)）和保留時間基本保持不變。  

5.ACE Excel色譜柱具有口碑zhuo越的可重現(xiàn)性。  

柱子與柱子之間的可重現(xiàn)性受硅膠固定相載體的生成、固定相與固定相載體的鍵合以及色譜柱中固定相的填充的影響。  

在色譜柱的制備過程中，每個階段被控制得越好，色譜柱的可重現(xiàn)性和質(zhì)量則越好。
ACE色譜柱在色譜柱制備過程中的每個階段均得到了全面控制。  

這些控制措施確保ACE色譜柱在柱間以及批次之間產(chǎn)生可靠且可預(yù)測的性能。  

圖13提供了典型批次驗(yàn)證測試的實(shí)例。  

硅醇活性的細(xì)微變化是柱子與柱子之間選擇性變化的主要原因之一。  

ACE和ACE Excel色譜柱由于使用超純試劑和嚴(yán)格的制造工藝控制（可以獲得具有均一表面特性的高純度硅膠固定相載體）而具有出色的可重現(xiàn)性。  

將這種高純度硅膠與先進(jìn)的鍵合技術(shù)相結(jié)合，可以產(chǎn)生一系列高惰性的固定相，這些固定相幾乎消除了色譜中的硅醇干擾，從而提供zhuo越的柱子與柱子之間的可重現(xiàn)性。  

6.ACE色譜柱可以提供從UHPLC到HPLC再到制備型HPLC的易擴(kuò)展性。  

相同的質(zhì)量控制，可以確保不同批次色譜柱的高重現(xiàn)性，也可以保證您更容易地在UHPLC和HPLC方法之間進(jìn)行轉(zhuǎn)換，或需要分離和純化目標(biāo)化合物時放大到制備應(yīng)用上。  

柱效當(dāng)然會改變，但可以預(yù)料的是，譜帶間距（選擇性）將相同。  

圖14闡明了當(dāng)使用相同的ACE鍵合相但不同粒徑填充的色譜柱進(jìn)行操作時，可以預(yù)見到分析物一致的譜帶間距類型（選擇性）。  

圖 14：將ACE固定相從UHPLC（2μm）擴(kuò)展到HPLC（3μm和5μm）再至制備型HPLC（10μm）時，選擇性得到了保留與保證。

條件
流動相：35:65 MeCN/0.1%TFA（溶于水中）
溫度：22 ℃
波長：254 nm

分析物
1. 尿嘧啶
2. 4-羥基苯甲酸
3. 乙酰水楊酸
4. 苯甲酸
5. 2-羥基苯甲酸
6. 對羥基苯甲酸乙酯

試驗(yàn)樣品的這些色譜圖在填充有相同的鍵合相但不同粒徑的色譜柱上以相同的流動相條件運(yùn)行，結(jié)果闡明分離從UHPLC擴(kuò)展到HPLC再到制備型HPLC的容易程度。

當(dāng)使用ACE Excel UHPLC色譜柱進(jìn)行快速方法開發(fā)，且該方法必須可轉(zhuǎn)移到HPLC時，易擴(kuò)展性則顯得特別有價值。

圖 15：ACE固定相可以提供相同的選擇性，無論它們是UHPLC、HPLC還是制備型HPLC色譜柱

條件
色譜柱：2.1 x 50 mm
流動相：1.4分鐘內(nèi)從30% B至90% B
A = 20mM甲酸銨+ 0.1％甲酸
B =乙腈+ 0.1％甲酸
梯度：在30％B時持續(xù)0.30分鐘，在1.10分鐘內(nèi)從30至90％B，在90％B時持續(xù)0.40分鐘
流速：0.5 mL/min
柱溫：30oC
檢測：AB Sciex Triple Quad（TM）5500 MS，以ESI（+）模式運(yùn)行
儀器：島津Prominence UFLC系統(tǒng)

分析物
1. 甲苯咪唑
2. 普羅替林
3. 阿米替林
4. 洛哌丁胺

試驗(yàn)樣品的這些色譜圖在ACE Excel C18 2μmUHPLC色譜柱、ACE C18 3μmHPLC色譜柱和ACE C185μm色譜柱上以相同的流動相條件運(yùn)行，結(jié)果闡明ACE固定相的選擇性一致，無論填充粒徑如何。

這使得從UHPLC到HPLC或HPLC再到UHPLC的方法轉(zhuǎn)移更加容易。同時也使得從分析型應(yīng)用擴(kuò)展到制備型應(yīng)用更加容易。

ACE色譜柱可以提供從UHPLC到HPLC再到制備型HPLC的易擴(kuò)展性。

相同的質(zhì)量控制，可以確保不同批次色譜柱的高重現(xiàn)性，也可以保證您更容易地在UHPLC和HPLC方法之間進(jìn)行轉(zhuǎn)換，或需要分離和純化目標(biāo)化合物時放大到制備應(yīng)用上。

柱效當(dāng)然會改變，但可以預(yù)料的是，譜帶間距（選擇性）將相同。

圖14闡明了當(dāng)使用相同的ACE鍵合相但不同粒徑填充的色譜柱進(jìn)行操作時，可以預(yù)見到分析物一致的譜帶間距類型（選擇性）。

圖 14：將ACE固定相從UHPLC（2μm）擴(kuò)展到HPLC（3μm和5μm）再至制備型HPLC（10μm）時，選擇性得到了保留與保證。

條件
流動相：35:65 MeCN/0.1%TFA（溶于水中）
溫度：22 ℃
波長：254 nm

分析物
1. 尿嘧啶
2. 4-羥基苯甲酸
3. 乙酰水楊酸
4. 苯甲酸
5. 2-羥基苯甲酸
6. 對羥基苯甲酸乙酯

試驗(yàn)樣品的這些色譜圖在填充有相同的鍵合相但不同粒徑的色譜柱上以相同的流動相條件運(yùn)行，結(jié)果闡明分離從UHPLC擴(kuò)展到HPLC再到制備型HPLC的容易程度。

當(dāng)使用ACE Excel UHPLC色譜柱進(jìn)行快速方法開發(fā)，且該方法必須可轉(zhuǎn)移到HPLC時，易擴(kuò)展性則顯得特別有價值。

圖 15：ACE固定相可以提供相同的選擇性，無論它們是UHPLC、HPLC還是制備型HPLC色譜柱

條件
色譜柱：2.1 x 50 mm
流動相：1.4分鐘內(nèi)從30% B至90% B
A = 20mM甲酸銨+ 0.1％甲酸
B =乙腈+ 0.1％甲酸
梯度：在30％B時持續(xù)0.30分鐘，在1.10分鐘內(nèi)從30至90％B，在90％B時持續(xù)0.40分鐘
流速：0.5 mL/min
柱溫：30oC
檢測：AB Sciex Triple Quad（TM）5500 MS，以ESI（+）模式運(yùn)行
儀器：島津Prominence UFLC系統(tǒng)

分析物
1. 甲苯咪唑
2. 普羅替林
3. 阿米替林
4. 洛哌丁胺

試驗(yàn)樣品的這些色譜圖在ACE Excel C18 2μmUHPLC色譜柱、ACE C18 3μmHPLC色譜柱和ACE C185μm色譜柱上以相同的流動相條件運(yùn)行，結(jié)果闡明ACE固定相的選擇性一致，無論填充粒徑如何。

這使得從UHPLC到HPLC或HPLC再到UHPLC的方法轉(zhuǎn)移更加容易。同時也使得從分析型應(yīng)用擴(kuò)展到制備型應(yīng)用更加容易。

色譜柱是氣相色譜儀的心臟，如何選擇色譜柱？

色譜柱作為液相分離系統(tǒng)中的重要儀器之一，其類型決定了色譜系統(tǒng)的性質(zhì)，色譜柱的粒徑和長度影響了分析時間和分析效率。在日常使用的時候需要小心保護(hù)，正確的使用和保養(yǎng)方法可以延長色譜柱的使用壽命。

1.要選擇合適的流動相，也可以在進(jìn)樣器前面接預(yù)柱，如果分析柱是鍵合硅膠，預(yù)柱為硅膠，這樣流動相進(jìn)入分析柱之前會被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

2.色譜柱不能反沖，反沖會降低柱效，除非生產(chǎn)商注明了該柱可以反沖。

3.不要將基質(zhì)復(fù)雜的樣品直接注入柱內(nèi)，記得對樣品提前處理，要不就加一截保護(hù)柱，保護(hù)柱可以更換。

4.注意溫度和壓力要保持穩(wěn)定，不要急劇變化，溫度的急劇變化會影響柱內(nèi)的情況，沖動柱內(nèi)填料。

5.使用時遵循色譜柱上標(biāo)示的流動方向，記住流動相流動的方向，流入端是先污染端，以便維護(hù)。

6.反相柱的溶劑基本就是乙腈或甲醇，正相柱既可以適用正相系統(tǒng)，也可以適用反相系統(tǒng)，一定要清楚是否需要置換色譜柱內(nèi)部保存溶劑。

7.用流動相比例的水系和有機(jī)系來沖洗色譜柱，也可以使用內(nèi)含10%左右的純水來沖洗。

8.色譜柱內(nèi)部保存液具有揮發(fā)性，可添加5%-10%的水，堵緊堵頭再用封口膜封起來，減少其揮發(fā)速度。如果在一段時間不用后，使用前用小流速的和色譜柱內(nèi)部相同的溶劑沖洗一定的時間。